【摘要】：重金屬污染已成為世界性環(huán)境污染問(wèn)題,因其不可降解及能夠通過(guò)食物鏈富集的特點(diǎn),對(duì)生態(tài)系統(tǒng)中的生物的生長(zhǎng)繁殖造成巨大影響。卵黃原蛋白是昆蟲卵黃發(fā)生的前體,是昆蟲生殖的關(guān)鍵物質(zhì)基礎(chǔ)。橢圓食粉螨Aleurolyphus ovatus(Troupeau)是一種可快速繁殖且易于飼養(yǎng)的儲(chǔ)藏物害螨,對(duì)影響其生殖的環(huán)境因素的研究有利于為害螨防治提供理論基礎(chǔ)。因此本文以橢圓食粉螨為研究對(duì)象,克隆并分析與其繁殖相關(guān)的卵黃原蛋白(vitellogenin,Vg)基因序列并探究Vg基因?qū)︺U脅迫的響應(yīng)機(jī)制。具體方法為在人工飼料中添加不同的鉛,設(shè)置包括對(duì)照在內(nèi)的5個(gè)濃度梯度(0 mg?kg~(-1)、12.5 mg?kg~(-1)、25 mg?kg~(-1)、50 mg?kg~(-1)及100 mg?kg~(-1)),分別測(cè)定不同濃度下長(zhǎng)期鉛脅迫后其卵黃原蛋白基因的表達(dá);分別使用Western Blot及ELISA試劑盒法測(cè)定不同濃度脅迫下橢圓食粉螨卵黃原蛋白的含量。主要結(jié)果如下:1、本研究得到AOVg基因cDNA的全長(zhǎng)為6270 bp,開放閱讀框(ORF)為6030 bp,共編碼2009個(gè)氨基酸殘基,5'端非翻譯區(qū)(Untranslated Region,UTR)長(zhǎng)度為128 bp,3'UTR長(zhǎng)度為112bp,Vg蛋白有Vitellogenin-N,DUF1943和VWD三個(gè)保守區(qū)域,19個(gè)氨基酸的信號(hào)肽;C-末端有GL/ICG,DGXR保守序列和半胱氨酸殘基(C)。2、成功表達(dá)出一段含有258個(gè)氨基酸的AOVg蛋白保守片段,原核表達(dá)產(chǎn)物49.18kDa,命名為pET-32a-AOVg,重組蛋白以包涵體形式分泌;成功制備AOVg多克隆抗體Anti-AOVg,經(jīng)Western Blot檢測(cè)后對(duì)AOVg具有較好的特異性。3、對(duì)重金屬鉛脅迫影響橢圓食粉螨卵黃原蛋白的轉(zhuǎn)錄與翻譯進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明,低濃度鉛脅迫能促進(jìn)AOVg的表達(dá),差異不顯著,但高濃度鉛脅迫會(huì)顯著促進(jìn)AOVg基因表達(dá)。從整體來(lái)看隨著鉛脅迫濃度升高,鉛脅迫的促進(jìn)效果呈現(xiàn)出先升高后降低隨后又升高的趨勢(shì)。對(duì)不同濃度鉛脅迫下AOVg蛋白含量的研究表明,隨著鉛脅迫濃度的升高,AOVg含量有著先升高再降低的趨勢(shì),但隨著鉛脅迫濃度繼續(xù)升高(100 mg?kg~(-1)),AOVg含量有升高的趨勢(shì)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S379.5;X503.22
【圖文】：

第 2 章 橢圓食粉螨卵黃原蛋白的克隆與序列分析析提取質(zhì)量粉螨總 RNA 的提取質(zhì)量對(duì)于擴(kuò)增特異性的目的很關(guān)鍵。在本研究中，取 5μL 橢圓食粉螨總 R結(jié)果如圖 2.1，從圖中可以看到有明顯的兩條亮18S 較亮。說(shuō)明橢圓食粉螨總 RNA 的提取完整光度計(jì)測(cè)得：RNA 濃度為 1130ng/μl，A260/A的 RNA 純度較好，可以用來(lái)進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)

2.2 橢圓食粉螨 AOVg 擴(kuò)增ctrophoretogram of amplifying橢圓食粉螨 AOVg 3’和 5’擴(kuò)phoretogram of amplifying V及氨基酸序列特征

19.3 橢圓食粉螨 AOVg 3’和 5’擴(kuò)增情況ctrophoretogram of amplifying Vg 3’and酸及氨基酸序列特征因 cDNA 的全長(zhǎng)為 6270 bp，NCORF）為 6030 bp，起始密碼子（ 6155 bp，共編碼 2009 個(gè)氨基TR）長(zhǎng)度為 128 bp，3'UTR 長(zhǎng)度信號(hào)序列 AATAA 和 PolyA 尾，游 46bp 的位置。此外橢圓食粉螨序、卵裂位點(diǎn)和半胱氨酸殘基等子式為 C10069H15922N2790O3038S49，

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本文編號(hào)：2746741