【摘要】：微生物絮凝劑是由細(xì)菌等微生物經(jīng)過發(fā)酵提取所得到的的生物大分子,具有較好的絮凝效果,其成分主要包括多糖、蛋白質(zhì)、核酸、纖維素等。菲律賓蛤仔粘附污泥(RPM)最近被報(bào)道為一種天然的高效生物絮凝劑,推測黏附污泥中的微生物是絮凝現(xiàn)象產(chǎn)生的原因。本文深入研究了三株絮凝活性菌株的胞外多糖聚合物,由于其良好的絮凝效果,采用多種手段對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征,并探討其結(jié)構(gòu)信息可能對(duì)絮凝效果產(chǎn)生的促進(jìn)作用,因此,本文從篩選的菌株中做了以下工作:(1)微生物胞外多糖的提取純化選取菌株,本文從實(shí)驗(yàn)室中初期篩選鑒定的絮凝活性菌株中選取三株Halomonas sp.GHF11、Pseudoalteromonas sp.GHS19和Pseudoalteromonas sp.JP,通過接種培養(yǎng),用乙醇沉淀法獲得多糖粗品。多糖粗品經(jīng)過Sevag法脫蛋白處理后,經(jīng)過陰離子交換柱DEAE和Sephadex凝膠滲透色譜柱進(jìn)一步純化得到多糖純品。對(duì)獲得的多糖純品進(jìn)行絮凝活性測試和結(jié)構(gòu)信息的表征。(2)多糖純品的活性測試對(duì)微生物多糖純品的活性進(jìn)行了探究,分析了不同濃度下多糖的絮凝活性和脫色活性的變化規(guī)律,找到了最佳活性的多糖濃度。結(jié)果表明在0.5 mg/L的F11多糖劑量時(shí),最佳絮凝效果達(dá)到71.2%,而在反應(yīng)劑量小于0.1 mg/L或大于1.0 mg/L時(shí),絮凝效果較差。另外,對(duì)F11多糖純品關(guān)于三種染色劑包括甲基藍(lán)、結(jié)晶紫、孔雀石綠的脫色效果進(jìn)行了探究。結(jié)果顯示,該多糖對(duì)于孔雀石綠的脫色效果最好,在反應(yīng)劑量1.8 mg/L時(shí),達(dá)到最佳脫色效果92.4%。同樣地,反應(yīng)劑量過高或較少,脫色效果將逐漸減弱。同樣地,S19多糖的絮凝活性與其劑量有著相似的關(guān)系。在劑量為0.9 mg/L時(shí),達(dá)到最佳絮凝率為78.8%,反應(yīng)劑量為2.0 mg/L時(shí),有最佳脫色活性87.9%。JP多糖在投加劑量為0.8 mg/L時(shí),達(dá)到最佳絮凝率為83.5%,反應(yīng)劑量為1.5 mg/L時(shí),有最佳脫色活性93.6%。(3)多糖結(jié)構(gòu)的解析分離純化的多糖經(jīng)過一系列手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)的表征。紅外光譜顯示該多糖的主要官能團(tuán),包括羥基、羰基、亞甲基、碳骨架環(huán)等。凝膠滲透色譜法測得F11和S19兩多糖分子量分別為31KDa和1010KDa,使用高效液相色譜測得F11樣品單糖組成為甘露糖、氨基葡萄糖、葡萄糖、半乳糖、核糖。利用氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)多糖進(jìn)行甲基化分析,總離子流圖和質(zhì)譜圖顯示,其糖苷鍵的連接方式有葡萄糖末端連接、葡萄糖1→2→3→4連接,甘露糖1→2→3→4→6連接。S19樣品單糖組成為葡萄糖和甘露糖,甲基化分析顯示,其糖苷鍵連接方式為葡萄糖Glc1→3連接、葡萄糖Glc1→4連接、葡萄糖Glc1→3→4連接以及甘露糖Man1→2→3→4→6連接。
【圖文】：

動(dòng)部分收集器連續(xù)收集洗脫液。然后用硫酸苯酚法測定各管的糖含量，收集同一吸收峰下的洗脫液，濃縮后冷凍干燥，從而獲得所需的純多糖產(chǎn)品。 總糖含量的測定多糖含量的測定便于分析多糖中含有其他雜質(zhì)含量的高低，只有雜質(zhì)含量較下一步的操作。本文使用苯酚硫酸法[67]來測定總糖含量。試劑的配制：80 %的苯酚：將 80 g 苯酚溶于 20 g 去離子水中，，得到 80%的苯存在棕色瓶中冷藏待用。6 %的苯酚：測定標(biāo)線時(shí)使用 80 %的苯酚進(jìn)行稀釋作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：在 105 ℃的烘箱中將葡萄糖烘干至恒重，準(zhǔn)確稱取葡 于 500 mL 容量瓶中，定容后得 40 μg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后分別吸取0.5、1.0、1.5、2.0 mL，用去離子水補(bǔ)充至 2.0 mL，然后加入 1.0 mL 6%苯酚和硫酸，搖勻，沸水浴 15 min，冷卻后，測量 490 nm 處的吸光度。橫坐標(biāo)為多g/mL），縱坐標(biāo)為吸光度（OD），制作多糖含量的標(biāo)準(zhǔn)線性方程如圖 2-1 所示

劑量對(duì)絮凝活性和脫色活性的影響劑量的多糖溶液，溶解于去離子水中，分別測定其絮凝活性，用水重復(fù)三次，找出最佳絮凝活性和脫色活性對(duì)應(yīng)的多糖濃度，并分析度時(shí)絮凝活性的變化規(guī)律。討論純度分析酸苯酚法測定多糖總含量, 與多糖粉末實(shí)際重量對(duì)比,經(jīng)稱量, F11 57 mg，硫酸苯酚法測得含糖量為 49.6 mg，占總重量的 87 %，純。另外對(duì)多糖溶液進(jìn)行紫外掃描，觀察是否有蛋白質(zhì)、核酸的特征掃描曲線較為平滑，不含有 220 nm 和 280 nm 的紫外吸收，證明多干凈，且不存在核酸的影響，因此認(rèn)為該多糖粉末純度很高，可進(jìn)研究和活性的測定。
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：X703;X172

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本文編號(hào)：2694749