【摘要】：近年來,隨著海洋環(huán)境污染日益加重,有害藻華發(fā)生頻率日趨增大,特別是部分有害藻華產(chǎn)生的生物毒素,不僅對(duì)海洋生態(tài)系統(tǒng)、海洋漁業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生影響,更重要的是藻毒素通過食物鏈富集,對(duì)人體健康會(huì)造成潛在的毒害,甚至導(dǎo)致人類中毒死亡。迄今為止,已發(fā)現(xiàn)海洋藻毒素及其衍生物約有200多種,按毒素溶解性質(zhì)可分為兩大類:水溶性毒素和脂溶性毒素。由于有害藻華毒素種類多,且每一類毒素包含多種毒素單體,有害藻華爆發(fā)后,海洋環(huán)境管理部門快速確定是否是產(chǎn)毒藻華,產(chǎn)生何種毒素,就成為有害藻華災(zāi)害應(yīng)急管理的首要任務(wù),因此,急需發(fā)展針對(duì)有害藻華藻中各類毒素快速篩查和鑒別的有效方法。本研究采用液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC MS),首先對(duì)8種典型水溶性藻毒素在電噴霧離子源負(fù)模式下的質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行了研究,在此基礎(chǔ)上,發(fā)展了基于毒素化合物精確質(zhì)量數(shù)篩選的有害藻中20多種水溶性毒素同步篩查鑒別方法;此外,采用反相液相色譜與親水作用色譜串聯(lián)分離 高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),實(shí)現(xiàn)了20多種水溶性毒素與200多種脂溶性藻毒素的同步篩查鑒別分析,具體內(nèi)容如下:1.麻痹性貝毒(Paralytic Shellfish Poisoning toxins,PSP toxins)是有害藻華毒素中毒性最大,影響最為廣泛的水溶性藻毒素。針對(duì)8種常見含硫PSP毒素(GTX1、GTX 4、GTX2、GTX3、dc GTX2、dc GTX3、C1和C2)的化學(xué)結(jié)構(gòu)特征,利用多級(jí)離子阱質(zhì)譜技術(shù)對(duì)其在電噴霧質(zhì)譜負(fù)離子模式條件下的分析特征進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,8種目標(biāo)化合物在一級(jí)質(zhì)譜分析過程中均易失去1個(gè)H,形成準(zhǔn)分子離子[M H] 峰;在二級(jí)質(zhì)譜分析過程中各化合物的母離子([M H] )主要通過丟失 H2O和 NHCO等中性碎片,形成穩(wěn)定的特征子離子峰,并且同分異構(gòu)體的二級(jí)質(zhì)譜圖有差異,可為含硫PSP毒素的二級(jí)質(zhì)譜定性、定量分析提供依據(jù)。此外,對(duì)各目標(biāo)化合物的二級(jí)質(zhì)譜主要碎片峰進(jìn)行了三級(jí)質(zhì)譜分析,對(duì)三級(jí)質(zhì)譜分析產(chǎn)生的主要特征碎片峰進(jìn)行了歸屬,并對(duì)裂解途徑進(jìn)行了推測,可為電噴霧質(zhì)譜在負(fù)離子模式條件下檢測有害藻中含硫PSP毒素提供參考和依據(jù)。2.針對(duì)有害藻中的常見PSP毒素,采用親水作用色譜 高分辨電噴霧質(zhì)譜法(HILIC HR ESI/MS)結(jié)合PSP毒素精確質(zhì)量數(shù)數(shù)據(jù)列表篩查,建立了快速篩查、定性識(shí)別有害藻中25種已知PSP毒素的方法。產(chǎn)毒藻細(xì)胞破碎后經(jīng)0.1 mol/L乙酸溶液提取,通過HILIC HR ESI/MS正負(fù)離子模式全掃描分析,得到產(chǎn)毒藻提取物中PSP毒素準(zhǔn)分子離子精確質(zhì)量數(shù),結(jié)合PSP毒素?cái)?shù)據(jù)列表篩查并輔以商品化軟件數(shù)據(jù)分析,實(shí)現(xiàn)產(chǎn)毒藻中PSP毒素的快速定性識(shí)別。建立的數(shù)據(jù)列表包含25種常見PSP毒素精確分子質(zhì)量及碎片離子信息,所發(fā)展的HILIC HR ESI/MS方法分離度高、靈敏度好,所考察的10種常見PSP毒素檢測限在10~80 nmol/L范圍內(nèi),能滿足產(chǎn)毒藻實(shí)際樣品的分析要求。3種產(chǎn)毒藻實(shí)際樣品篩查、分析結(jié)果良好,說明本方法是有害藻華產(chǎn)毒藻中多種已知PSP毒素快速篩查、定性識(shí)別的有效方法。3.采用反相液相色譜串聯(lián)親水作用色譜 高分辨電噴霧質(zhì)譜法(RPLC/HILIC HR ESI/MS),結(jié)合藻毒素精確質(zhì)量數(shù)數(shù)據(jù)列表篩查,建立了同步篩查鑒別產(chǎn)毒藻中水溶性和脂溶性藻毒素的新方法。首先,對(duì)產(chǎn)毒藻細(xì)胞進(jìn)行超聲破碎處理,然后,以甲醇/0.1 mol/L乙酸(1:1,V/V)混合溶液為溶劑進(jìn)行超聲波輔助提取,最后,粗提液通過RPLC/HILIC HR ESI/MS正負(fù)離子模式全掃描進(jìn)行分析;其中,RPLC柱與HILIC柱通過三通相連接,RPLC柱采用低流速高比例水相(0.2 m L/min,80%水)沖洗,而HILIC柱則采用高流速高有機(jī)相(1m L/min,85%乙腈)沖洗,實(shí)現(xiàn)水溶性和脂溶性藻毒素在一次進(jìn)樣分析中的同步分離檢測。為了驗(yàn)證方法的可靠性,選取11種典型水溶性藻毒素和8種典型脂溶性藻毒素,對(duì)方法的重復(fù)性和靈敏度進(jìn)行了考察,19種典型毒素化合物峰面積的RSD值均低于4.55%,保留時(shí)間的RSD值均低于0.96%;日內(nèi)重復(fù)性的RSD值在4.38~7.92%范圍內(nèi),日間重復(fù)性的RSD值在8.37~14.87%范圍內(nèi);19種化合物儀器檢測限在0.02~50.9 ng范圍內(nèi),能滿足產(chǎn)毒藻中各類毒素篩查分析的要求。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：國家海洋局第一海洋研究所
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：X835

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2410425