小麥秸稈降解復合菌群FWD1的構建、降解特性及其微生物群落組成研究
本文選題:小麥秸稈 + 復合菌群 ; 參考:《西北農林科技大學》2015年碩士論文
【摘要】:農作物秸稈是一種具有多用途的可再生生物質資源,利用微生物分解這些木質纖維素原料是資源化利用的有效途徑。目前,人們已經報道了許多木質纖維素降解菌,但單一菌株存在酶系組成單一、木質纖維素降解效率低等問題。采用限制性培養(yǎng)方法篩選構建的復合菌群,不同菌在群落中各司其職,相互協作,具有較高的木質纖維素降解能力。本研究從秦嶺山區(qū)采集9個不同林地土壤樣品,以秸稈分解率、羧甲基纖維素酶(CMCase)活力及木聚糖酶活力為指標篩選出一份木質纖維素分解能力較強的冷杉林地土壤樣品(QLI),以該土壤樣品為接種物,小麥秸稈為碳源,連續(xù)繼代培養(yǎng),構建了一組穩(wěn)定高效小麥秸稈分解復合菌群FWD1,并對其分解特性及其微生物群落組成進行研究。主要取得了以下研究成果:1、高效穩(wěn)定小麥秸稈降解復合菌群FWD1的構建測定所采集的9份土壤樣品原始及富集培養(yǎng)4d、8d、12d、16d的CMCase活力、木聚糖酶活力和第16d小麥秸稈失重量,結果表明,冷杉林地土壤樣品(QLI)具有最高的CMCase活力和秸稈降解率,以其為接種物,小麥秸稈為碳源,連續(xù)繼代培養(yǎng),馴化構建復合菌群。不同代數培養(yǎng)物對小麥秸稈降解能力的變化結果表明,從第9代培養(yǎng)物開始,小麥秸稈失重率均在70%左右,彼此之間沒有太大差異;PCR-DGGE結果也表明,從第9代培養(yǎng)物開始,主要細菌組成條帶和位置沒有太大變化,微生物群落組成穩(wěn)定。從第9代開始,獲得了穩(wěn)定高效小麥秸稈降解復合菌群FWD1,該菌群對小麥秸稈的降解率達到76.92%。2、小麥秸稈降解復合菌群FWD1的降解特性與實驗室篩選的其他3組復合菌群A、B、C相比,復合菌群FWD1具有最高的CMCase酶活(79.64U)、濾紙酶活(75.74U)、木聚糖酶活(1100U)和秸稈降解率(75.22%)。氣相色譜法測定FWD1的小麥秸稈降解液組分,結果表明,代謝產物主要為乙酸、丙酸、丁酸和乙醇。乙酸濃度呈現出先升高后降低,再升高的趨勢。在發(fā)酵l d時,乙酸的含量為140.14 mg·L-1,3 d時就達到了最大值655.54 mg·L-1。而乙醇、丙酸和丁酸分別在1 d、3 d和7 d時達到最大值18.87 mg·L-1、127.17 mg·L-1和27.47 mg·L-1。此外,FWD1還能降解玉米秸稈、濾紙和脫脂棉,7d內降解率分別為52.34%、10%和2.47%。DGGE結果表明,FWD1在降解小麥秸稈、玉米秸稈、濾紙和脫脂棉過程中,各泳道既有一些公共條帶,還有一些特殊條帶,但公共條帶亮度各不相同。此外,隨著培養(yǎng)時間的延長,各樣品的Shannon指數和豐富度指數整體上都呈先增大后減小的趨勢。3、復合菌群FWD1微生物群落組成利用第二代高通量測序技術對復合菌群和菌種來源土壤樣品的細菌組成進行分析,結果表明FWD1中主要含有變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門,分別占細菌總量的67.41%、19.25%和13.34%。在種分類水平上,Clostridium sp.BNL1100,uncultured Alcaligenes sp.,uncultured Alcaligenaceae bacterium和Brevundimonas diminuta為優(yōu)勢菌,分別占細菌總量的11.80%,10.30%,6.70%和3.60%。通過連續(xù)繼代培養(yǎng),富集了變形菌門和厚壁菌門,更細化分類水平上,富集了以Clostridium sp.BNL1100為主的纖維素降解菌,比例從0.01%上升到11.80%。
[Abstract]:Crop straw is a renewable biomass resource with multipurpose use. The use of microbes to decompose these lignocellulosic materials is an effective way of resource utilization. At present, a number of lignocellulosic degrading bacteria have been reported, but single strains have a single enzyme system and low degradation efficiency of lignocellulose. In this study, 9 different woodland soil samples were collected from the Qinling Mountains mountain area, and a sample of wood was selected from the Qinling Mountains mountain area to select the straw decomposition rate, the carboxymethyl cellulase (CMCase) activity and the xylanase activity as the index. The soil samples of fir woodland (QLI) with strong qualitative cellulose decomposing ability, with the soil sample as inoculant, wheat straw as carbon source and continuous subculture, a group of stable and efficient wheat straw decomposition compound bacteria group FWD1 was constructed, and its decomposition characteristics and microbial community composition were studied. The main achievements are as follows: 1, high The construction and determination of the stable wheat straw degraded compound bacteria group FWD1, 9 samples of soil samples were collected and cultured for 4D, 8D, 12D, 16d, CMCase vitality, xylanase activity and 16d wheat straw weight loss. The results showed that the soil samples (QLI) had the highest CMCase vitality and straw degradation rate, which was the inoculant and wheat. Straw is a carbon source, continuous subculture and domestication to construct complex bacteria groups. The results of the change of wheat straw degradation ability of different algebraic cultures show that the weight loss rate of wheat straw is around 70% from the ninth generation of culture, and the PCR-DGGE results also show that the main bacteria are composed of the main bacteria from the ninth generation of culture. The microbial community composition was stable and the location of the microbial community was stable. From the ninth generation, the stable and efficient wheat straw degradation compound bacteria group FWD1 was obtained. The degradation rate of the wheat straw was 76.92%.2. The degradation characteristics of the wheat straw degraded compound bacteria group FWD1 were compared with the other 3 groups of compound bacteria, B, C, FWD, FWD, and the compound bacterial group FWD. 1 had the highest CMCase enzyme activity (79.64U), filter paper enzyme activity (75.74U), xylanase activity (1100U) and straw degradation rate (75.22%). Gas chromatography was used to determine the component of wheat straw degradation solution in FWD1. The results showed that the metabolites were mainly acetic acid, propionic acid, butyric acid and ethanol. The concentration of acetic acid first increased and then decreased and then increased. In the fermentation of L D When the content of acetic acid is 140.14 mg. L-1,3 D, it reaches the maximum value of 655.54 mg. L-1. and ethanol, propionic acid and butyric acid at 1 D, 3 D and 7 d, respectively, reaching the maximum value 18.87 mg L-1127.17 mg, L-1 and 27.47 vegetables. The degradation rate of corn straw, filter paper and skimmed cotton can be 52.34%, 10% and the result table respectively. In the process of degradation of wheat straw, corn straw, filter paper and skimmed cotton, FWD1 has some public strips and some special strips, but the brightness of the common strip is different. In addition, with the prolongation of the culture time, the Shannon index and the richness index of the samples are increasing first and then decreasing, and the compound flora is.3. The microbial community composition of FWD1 microbial community used second generation high-throughput sequencing technology to analyze the composition of bacteria in the composite bacteria group and the soil samples from the strain source. The results showed that FWD1 mainly contained deformable bacteria gate, thick wall bacteria gate and bacteriobacteria, which accounted for 67.41% of the total bacterial total, 19.25% and 13.34%. at the species classification level, Clostridium sp.BNL1100, Uncu. Ltured Alcaligenes sp., uncultured Alcaligenaceae bacterium and Brevundimonas diminuta were the dominant bacteria, which accounted for 11.80%, 10.30%, 6.70% and 3.60%. of the total bacteria, enriched the deformable bacteria gate and the thicker wall, and enriched the cellulose degrading bacteria based on Clostridium sp.BNL1100 on the more detailed classification level. The proportion rose from 0.01% to 11.80%.
【學位授予單位】:西北農林科技大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:X172;X712
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,本文編號:1845937
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