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MBR處理水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水體系中微生物研究

發(fā)布時間:2021-03-18 15:46
  本文針對膜生物反應(yīng)器(Membrane—Bioreactor,簡稱MBR)處理水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水工藝特點(diǎn),使用末端標(biāo)記限制性片段長度多態(tài)性分析(Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism,簡稱T-RFLP)、高通量測序、16S r DNA序列分析等分子生物學(xué)技術(shù)并輔以菌株的生理生化特性試驗(yàn),研究了膜生物反應(yīng)器處理水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水系統(tǒng)中微生物結(jié)構(gòu)和優(yōu)勢菌群。同時,從MBR中分離獲得了一株好氧反硝化細(xì)菌,并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)了菌株的反硝化性能;使用16S r DNA序列初步分析鑒定了可分離菌的種類。旨在為MBR反應(yīng)器細(xì)菌結(jié)構(gòu)研究以及MBR調(diào)試運(yùn)行提供參考。本研究得出的結(jié)論如下:(1)穩(wěn)定運(yùn)行時,實(shí)驗(yàn)濃度條件下MBR反應(yīng)器出水能夠滿足《淡水池塘養(yǎng)殖水排放要求》中養(yǎng)殖廢水排放一級排放標(biāo)準(zhǔn),特別是對MBR反應(yīng)器對水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水中的COD、NH4+-N均有較好的處理效果,對COD去除率在91%以上,對NH4+-N的去除率在87%以上。(2)在MBR反應(yīng)器活性污泥培養(yǎng)過程中,微生物的演替過程,既有原始優(yōu)勢種群的衰減,也有新的優(yōu)勢種群的增強(qiáng),優(yōu)勢種群的功能地位處于動態(tài)變化中。(3)MBR反應(yīng)器處理水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水體系中主要優(yōu)勢菌有未培養(yǎng)的變形菌(unc ultured_delta_proteobacterium)、未培養(yǎng)的土壤細(xì)菌(uncultured_soil_bacterium)、未培養(yǎng)的腐螺旋菌(uncultured_Saprosp.iraceae_bacterium)、未培養(yǎng)的擬桿菌門(un cultured_Bacteroidetes_bacterium)、未培養(yǎng)地發(fā)菌屬(uncultured_Geothrix_sp.)、未培養(yǎng)黃單胞菌(uncultured_Xanthomonadales_bacterium)、酸桿菌(Acidobacter ia_bacterium)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas_hydrophila)、固氮弓菌屬(Azonexus_sp.)、嗜鹽單胞菌屬(Candidatus_Halomonas)、微絲菌屬(Candidatus_Microt hrix)、綠彎菌門(Chloroflexi_bacterium)、黃色桿菌屬(Flavobacterium_cauens e)、黃桿菌屬(Flavobacterium_sp.)、出芽菌屬(Gemmata_sp.)、棉子糖乳球菌(Lactococcus_raffinolactis)、甲基彎曲菌屬(Methylosinus_sp.)、亞硝化單胞菌屬(N itrosomonas_oligotropha)、終極腐霉菌(Pythium_ultimum)、光合細(xì)菌嗜酸柏拉紅菌(R hodoblastus_acidophilus)、α-變形菌綱(alpha_proteobacterium)、絲狀細(xì)菌(filamento us_bacterium)、γ-變形菌(gamma_proteobacterium)等。(4)MBR反應(yīng)器接種期和穩(wěn)定運(yùn)行期的微生物種類豐富,微生物多樣性相似水平為0.97:相似指數(shù)分析:OUT(Operational Taxonomic Units,是在系統(tǒng)發(fā)生學(xué)研究或群體遺傳學(xué)研究中,為了便于進(jìn)行分析,人為給某一個分類單元(品系,種,屬,分組等)設(shè)置的同一標(biāo)志)為345,ace(用來估計群落中含有OTU數(shù)目的指數(shù))為1249,chao(是用chao1算法估計群落中含OTU數(shù)目的指數(shù))為782,Shannon(用來估算樣品中微生物的多樣性指數(shù)之一)為3.05,Simpson(用來估算樣品中微生物的多樣性指數(shù)之一)為0.1661。(5)使用16S r DNA序列分析鑒定從MBR反應(yīng)器中分離的菌株,鑒定出了9種(屬)細(xì)菌:假單胞菌(Pseudomonas sp.)、土生拉烏爾菌(Raoultella terrigena)、乙酰微小桿菌(Exiguobacterium acetylicum)解鳥氨酸克雷伯菌(Klebsiella ornithinolytica)、克雷伯氏桿菌(Klebsiella sp.)路德維希腸桿菌(Enterobacter ludwigii)、魏氏原壁菌(Prototheca wickerhamii)、植生拉烏爾菌(Raoultella planticola)、節(jié)桿菌(arthrobacter sp.)、煙草節(jié)桿菌(Arthrobacter nicotianae)。(6)MBR中存在著較多不可培養(yǎng)的微生物,已被分離并鑒定的微生物僅占一少部分。(7)從MBR反應(yīng)器中分離純化、篩選出一株好氧反硝化菌,通過生理生化特性及16Sr RNA基因序列分析及同源性比對,鑒定為假單胞菌(Pseudomonas sp.)。菌株的好氧反硝化性測試發(fā)現(xiàn),該菌株能夠在好氧環(huán)境條件下去除培養(yǎng)液中的硝酸鹽,該菌株反硝化作用主要發(fā)生在對數(shù)期。該菌株對硝酸鹽去除作用明顯;對于水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水中的硝酸鹽有較好去除效果。
【學(xué)位授予單位】:上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:X714
文章目錄
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 研究背景
    1.2 國內(nèi)外水產(chǎn)養(yǎng)殖水處理研究現(xiàn)狀
    1.3 MBR反應(yīng)器及研究進(jìn)展
    1.4 MBR反應(yīng)器微生物群落研究情況
    1.5 T-RFLP和高通量測序技術(shù)
    1.6 研究目的意義與研究內(nèi)容
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)裝置及運(yùn)行方式
    2.3 實(shí)驗(yàn)水質(zhì)
    2.4 分析項(xiàng)目及方法
    2.5 研究內(nèi)容和方法
        2.5.1 MBR活性污泥的培養(yǎng)馴化
        2.5.2 活性污泥樣本采集
        2.5.4 微生物基因組DNA提取
        2.5.5 基因PCR擴(kuò)增
        2.5.6 酶切與STR掃描
        2.5.7 高通量測序
            2.5.7.1 數(shù)據(jù)處理(上海美吉測序公司完成)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 MBR反應(yīng)器運(yùn)行效果
    3.2 MBR反應(yīng)器運(yùn)行各時期污泥總細(xì)菌DNA的提取
    3.3 T-RFLP圖譜分析
    3.4 W3 和W7 高通量測序數(shù)據(jù)與分析
        3.4.1 高通量測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計與優(yōu)化
            3.4.1.1 原始數(shù)據(jù)樣品區(qū)分與統(tǒng)計
            3.4.1.2 數(shù)據(jù)優(yōu)化與統(tǒng)計
            3.4.1.3 樣品序列統(tǒng)計
        3.4.2 OTU聚類結(jié)果
        3.4.3 分類學(xué)分析結(jié)果
        3.4.4 多樣性指數(shù)(Alpha-diversity)結(jié)果
        3.4.5 Rank-Abundance曲線和Shannon-Wiener曲線
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
第四章 好氧反硝化菌分離與鑒定
    4.1 材料和方法
        4.1.1 材料
            4.1.1.1 實(shí)驗(yàn)裝置
            4.1.1.2 培養(yǎng)基
            4.1.1.3 檢測試劑
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            4.1.2.1 活性污泥的培養(yǎng)馴化
            4.1.2.2 菌株的分離、純化與篩選
            4.1.2.3 菌株的鑒定
            4.1.2.4 菌株的反硝化性能實(shí)驗(yàn)
            4.1.2.5 菌株F28 對水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水的凈化效果
        4.1.3 分析方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 含好氧反硝化菌污泥的培養(yǎng)馴化
        4.2.2 菌種鑒定
        4.2.3 菌株的反硝化作用
        4.2.4 菌株F28 對水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水的凈化作用
        4.2.5 對剩余分離的37株細(xì)菌鑒定
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
研究生期間科研成果
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號:1433484

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