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核酸分子組裝引導的納米顆粒在納米孔中的易位研究

發(fā)布時間:2020-06-17 04:28
【摘要】:作為一種新型的DNA測序技術,近幾年來納米孔傳感已經發(fā)展成為一種成熟的單分子檢測技術,包括miRNA檢測、核酸之間的鑒定、DNA結合物的檢測、分子間相互作用力的檢測以及納米顆粒的檢測。金納米顆粒是一種用途廣泛的納米材料,具有獨特的物理化學性質,利用納米顆粒的組裝進行檢測應用日益廣泛。本文主要將納米孔傳感和納米材料組裝技術相結合,系統(tǒng)地研究了金納米顆粒及組裝體通過固態(tài)納米孔的信號特征,為固態(tài)納米孔應用于納米材料以及癌癥標志物的檢測提供技術指導和理論支持。主要內容如下:1.基于固態(tài)納米孔傳感平臺研究了金納米顆粒通過納米孔的易位信號。我們記錄了在電解質溶液中,金納米顆粒在電壓驅動下通過納米孔時電流的堵塞變化,通過分析阻塞電流的幅值和阻塞時間,對納米粒子的捕獲和易位動力學過程進行研究。我們發(fā)現阻塞電流的方向與納米孔的孔徑有關,我們分別使用孔徑為40、78和120 nm的納米孔來檢測金納米顆粒。根據理論分析解釋了在小孔徑下電流增大而在大孔徑下電流減小的現象。2.利用DNA組裝,通過納米孔單分子檢測癌癥標記物miRNA。miRNA是短的非編碼RNA分子,在調節(jié)基因表達中起重要作用。在這項工作中,我們開發(fā)了一種新的miRNA檢測方法,它結合了兩種納米檢測技術,即具有高選擇性的納米顆粒自組裝體系和單分子的納米孔檢測平臺,用于快速檢測miRNA。同時我們可以對探針進行設計編碼用于miRNA的多元檢測,并且檢測分子的大小不受納米孔孔徑的限制,進一步擴大了納米孔的檢測范圍和應用,建立了一種快速、特異、高效的生物傳感平臺,可以有效地運用到醫(yī)學檢測中。3.通過DNA折紙設計DNA條帶并組裝成納米金鏈,并研究其在納米孔中的易位行為。為了提高納米孔的通量和多元檢測性,我們通過DNA折紙技術設計了一款拓撲結構靈活的DNA條帶作為運輸載體,該納米帶還可以作為模板組裝納米顆粒,形成長的納米金鏈,并通過納米孔研究其易位行為,分析堵塞信號可以區(qū)分納米顆粒的位置和數量,為創(chuàng)建新型的納米孔傳感器提供了新的思路。
【學位授予單位】:南京郵電大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2018
【分類號】:TB383.1;R318
【圖文】:

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圖 1.1 (A)納米孔檢測原理示意圖[20];(B)生物分子通過納米孔的動態(tài)過程以及相應的電流信號圖[21];趩畏肿觽鞲械募{米孔技術有著相似的原則。如原理圖 1.1(A)所示,在納米孔傳感檢測中,一層絕緣的薄膜將溶液分成兩個部分,形成兩個單獨的離子溶液池(通常為 NaCl或 KCl),即順式面(Cis)和反式面(Trans)。嵌在薄膜中央的納米孔(通常小于 100 nm)成了連接兩部分的唯一通道。在兩邊池中分別插入 AgCl 電極,當在這兩側施加一個穩(wěn)定的偏置電壓時,溶液中離子會定向移動,產生一個穩(wěn)定的從孔的一側到另一側的離子電流。納米孔兩側的離子隨時間不停的變化,可以通過膜片鉗和數模轉換器將信號記錄下來,所得曲線為事件電流曲線(current-time trace)。當沒有加入生物分子時,所測得的這一電流值稱為開孔電流(open-pore current,I0)。一般在溶液中離子濃度較高的時候(大于 100 mM/L),I0可以由以下 Eq(1.1)來表示[21]:10 bias24l 1I Vd d (1.1)其中 d 表示納米孔的直徑,l 代表納米孔的長度,σ為離子溶液的電導率,Vbias代表施加

示意圖,納米孔,測序,原理


學專業(yè)學位碩士研究生學位論文 第一章要樣品的擴增、標記、表面固定等化學修飾,納米孔傳感檢測可以適用于聚合物的檢測。電流時間曲線中,電流被短暫的阻塞,然后又回到開孔電流水平,我們稱易位事件。生物分子被納米孔捕獲、進入納米孔以及完全通過納米孔,這以用記錄的電流信號來表征。每個事件產生的阻塞電流,可以通過體積排exclusion)來解釋,即當生物分子通過納米孔時,會占據孔內一定的空間,內的離子排出孔,導致孔內離子數量減少,從而使得納米孔內的電導(G)線性的生物分子來說,阻塞電流與其與孔的橫截面積之比成正比。通過事如阻塞時間( t)、阻塞電流( I)以及事件的電流的特征等相互結合可別。

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本文編號:2717073

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