【摘要】：香港巨牡蠣(Crassostrea hongkongensis)天然分布于我國南方沿岸,是我國特有的重要經(jīng)濟貝類。作為香港巨牡蠣最大“天然苗種場”,廣西欽州茅尾海出產(chǎn)的香港巨牡蠣更形成了地標產(chǎn)品“欽州大蠔”,帶來了巨大的經(jīng)濟效益。但由于天然采苗的不穩(wěn)定性,加上近年來環(huán)境和氣候的變化,天然種苗量驟減,春季牡蠣大規(guī)模死亡現(xiàn)象頻發(fā)。當?shù)仞B(yǎng)殖戶即從廣東珠海等地引進牡蠣種苗進行養(yǎng)殖。本研究利用微衛(wèi)星分子標記研究廣西茅尾海香港巨牡蠣的群體遺傳結構,估算其有效群體大小。從而監(jiān)測和評估其遺傳結構的變化,并預測其演變趨勢。并通過組織切片技術研究其繁殖特性,試圖從香港巨牡蠣的繁殖方式解釋其群體遺傳結構變化的動因。主要研究結果如下：1.篩選8個符合Hardy-Weinberg平衡的微衛(wèi)星標記對茅尾海6個香港巨牡蠣群體：2014年珠海引進養(yǎng)殖群體(ZH),2013、2015年茅尾海野生群體(13MW、15MW),2012、2013、2014年采苗的茅尾海牡蠣群體(12L、13L、14L),進行群體遺傳學分析。結果表明,基于所有樣品的等位基因數(shù)2-18,等位基因豐度為2.00-17.32；各個群體平均等位基因豐度相近,以14L最高(9.8),而ZH最低(8.1),幼苗群體整體偏高9.1(12L),9.4(13L)；平均期望雜合度分別為0.75(ZH)、0.77(13MW)、0.79(15MW)、 0.81(12L)、0.79(13L)、0.78(14L);平均觀察雜合度中野生群體較高0.73(13MW)、 0.79(15MW),養(yǎng)殖群體較低：0.68(ZH)、0.60(12L)、0.68(13L)、0.69(14L);成體群體的近郊系數(shù)FIS普遍小于幼苗群體,其最大值和最小值分別是0.02(13MW)、0.21(12L)。以上數(shù)據(jù)表明,群體的遺傳多樣性中等,各個群體間等位基因豐度、期望和觀測雜合度沒有明顯差異(P0.05, ANOVA),說明幼苗和自然群體的遺傳結構相對穩(wěn)定。群體間的遺傳分化系數(shù)Fst中等偏低,為0.0003-0.0529;珠海引進群體與茅尾海的5個群體之間的Fst最大,遺傳距離的的分布趨勢相同。說明至今引進的珠海香港牡蠣對茅尾海香港牡蠣遺傳結構的影響是有限的。2.經(jīng)Ewens-Watterson檢驗篩選出6個中性的微衛(wèi)星標記,對野生群體(13MW)和幼苗群體(12L、13L和14L),利用LDNe、ONeSAMP、NeEstimator、MLNE2.0等4種軟件估算廣西茅尾海香港巨牡蠣群體的有效群體大小(Ne)。各個方法估算的Ne結果從19 (MLNE2.0軟件,偽最大似然時間法)到233 (NeEstimator軟件,即時F統(tǒng)計值矩量法);利用兩代群體比僅用單個群體估算的Ne大。但是相對于整個茅尾海每年以萬噸計的牡蠣產(chǎn)量,由此估算的有效群體相當小。而野生群體的平均等位基因豐度為6.9,與幼苗群體等位基因豐富度均值(7.8)沒有顯著性差異(p=0.449,雙樣品t檢驗)。3.以組織切片結合肉眼觀察和活體鏡檢方法研究茅尾海和大風江海區(qū)香港巨牡蠣的繁殖特性。大風江黃場(HH)1齡牡蠣周年(2013年7月-2014年6月)性腺的檢測表明：廣西欽州的香港巨牡蠣每年有1個繁殖周期；以肉眼可分辨的特點,可將性腺發(fā)育過程分為Ⅰ-未分化期(1-3月)、Ⅱ-分化期(4月)、Ⅲ-成熟排放期(5-10月)及Ⅳ-休止期(11-12月)；性成熟牡蠣在繁殖季節(jié)可多次產(chǎn)卵排精,可持續(xù)數(shù)月；生殖細胞分批成熟,分批排放。這一繁殖特性,會造成某一批牡蠣幼苗由少數(shù)成體繁殖而來,因此根據(jù)每年中某批次幼苗樣品,估算的有效群體大小非常小,但就整個海區(qū)而言,一年中持續(xù)數(shù)月的繁殖季節(jié)中,大量親本的子代將有機會在不同的時機存活下來。從而維持茅尾海香港巨牡蠣自然群體遺傳結構的相對穩(wěn)定。4.對比吊養(yǎng)在茅尾海沙井(SJ)、茅尾海入�？邶堥T(LM)、茅尾海入�？谕馇嗖祟^(QCT)、大風江入�？趦�(nèi)黃場(HH)和大風江入�？谕怫呜S(XF)5處的同批次2齡牡蠣性腺的啟動和發(fā)展過程表明：1、2齡牡蠣的性腺發(fā)育基本同步；性腺發(fā)育以高鹽度的外海XF和QCT最快,而低鹽的茅尾海內(nèi)海SJ最遲。XF牡蠣4月份已發(fā)育至成熟排放期,比SJ提前約30天；QCT次之,比SJ提前約20天；而大風江入�？趦�(nèi)HH和茅尾海入�？趦�(nèi)LM分別比SJ提前約15和7天；SJ牡蠣性腺在4月份仍然處于未分化期,雌雄難辨。緯度相近的5個地點,性腺發(fā)育存在差異,而溫度沒有顯著差異,我們推測可能是由于外海區(qū)域冬季溫度相對穩(wěn)定并且餌料生物相對豐富造成的。
【圖文】：

泳圖上的位置基本一致，且呈現(xiàn)單一明顯的條帶，提取的ＤＮＡ質量較高，基本上無逡逑拖帶現(xiàn)象。逡逑圖２－１邋２０。年茅尾海野生群體ＤＮＡ部分提取結果逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｐａｒｔｉａｌ邋ｒｅｓ山ｔ邋ｏｆ邋ＤＮＡ邋ｅ巧ｒａｃｔｉｏｎ邋ｆｒｏｍ邋２０１３ＭＷ逡逑３．２引物篩選逡逑從馬海濤開發(fā)的香港巨牡腑引物中，加Ｍ１３合成２０對引物，在５０’Ｃ、５５’Ｃ、逡逑６０°Ｃ梯度進行普通ＰＣＲ初步篩選，去掉了邋４對不能同時在ＤＮＡ邋ｐｏｏｌ邋１和ＤＮＡ邋ｐｏｏｌ邋２逡逑中擴增的引物。再把１６對引物進行帶巧光標記的ＰＣＲ擴增，篩選出了邋１２對擴增穩(wěn)逡逑定、條帶清晰、無明顯雜帶的引物。將篩選出的１２對引物在２００年茅尾海野生群體逡逑中擴X椇�，，经行毛细管道i炯觳猓歡越峁校齲幔潁洌祝澹椋睿猓澹髕膠餳觳�，踢出箔h(huán)義蝦希齲幔潁洌祝澹椋睿猓邇善膠獾模炊砸鎩Ｗ詈笊稈〕隼┰鑫榷ㄇ曳系希虜└衿膠獾模稿義隙砸錚唬茫瑁藎埃�、ＣＭ９ＹEⅲ茫瑁矗埃�、ＣＭＷ、ＣＭＪＹEⅲ茫瑁叮玻場ⅲ希椋罰。�、ＣｈＡP罰�，尐细信辶x舷⒓恚玻礎ｅ義希保稿義

本文編號：2553713