【摘要】：香港巨牡蠣(Crassostrea hongkongensis)天然分布于我國(guó)南方沿岸,是我國(guó)特有的重要經(jīng)濟(jì)貝類。作為香港巨牡蠣最大“天然苗種場(chǎng)”,廣西欽州茅尾海出產(chǎn)的香港巨牡蠣更形成了地標(biāo)產(chǎn)品“欽州大蠔”,帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)效益。但由于天然采苗的不穩(wěn)定性,加上近年來(lái)環(huán)境和氣候的變化,天然種苗量驟減,春季牡蠣大規(guī)模死亡現(xiàn)象頻發(fā)。當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶即從廣東珠海等地引進(jìn)牡蠣種苗進(jìn)行養(yǎng)殖。本研究利用微衛(wèi)星分子標(biāo)記研究廣西茅尾海香港巨牡蠣的群體遺傳結(jié)構(gòu),估算其有效群體大小。從而監(jiān)測(cè)和評(píng)估其遺傳結(jié)構(gòu)的變化,并預(yù)測(cè)其演變趨勢(shì)。并通過(guò)組織切片技術(shù)研究其繁殖特性,試圖從香港巨牡蠣的繁殖方式解釋其群體遺傳結(jié)構(gòu)變化的動(dòng)因。主要研究結(jié)果如下：1.篩選8個(gè)符合Hardy-Weinberg平衡的微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)茅尾海6個(gè)香港巨牡蠣群體：2014年珠海引進(jìn)養(yǎng)殖群體(ZH),2013、2015年茅尾海野生群體(13MW、15MW),2012、2013、2014年采苗的茅尾海牡蠣群體(12L、13L、14L),進(jìn)行群體遺傳學(xué)分析。結(jié)果表明,基于所有樣品的等位基因數(shù)2-18,等位基因豐度為2.00-17.32；各個(gè)群體平均等位基因豐度相近,以14L最高(9.8),而ZH最低(8.1),幼苗群體整體偏高9.1(12L),9.4(13L)；平均期望雜合度分別為0.75(ZH)、0.77(13MW)、0.79(15MW)、 0.81(12L)、0.79(13L)、0.78(14L);平均觀察雜合度中野生群體較高0.73(13MW)、 0.79(15MW),養(yǎng)殖群體較低：0.68(ZH)、0.60(12L)、0.68(13L)、0.69(14L);成體群體的近郊系數(shù)FIS普遍小于幼苗群體,其最大值和最小值分別是0.02(13MW)、0.21(12L)。以上數(shù)據(jù)表明,群體的遺傳多樣性中等,各個(gè)群體間等位基因豐度、期望和觀測(cè)雜合度沒(méi)有明顯差異(P0.05, ANOVA),說(shuō)明幼苗和自然群體的遺傳結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定。群體間的遺傳分化系數(shù)Fst中等偏低,為0.0003-0.0529;珠海引進(jìn)群體與茅尾海的5個(gè)群體之間的Fst最大,遺傳距離的的分布趨勢(shì)相同。說(shuō)明至今引進(jìn)的珠海香港牡蠣對(duì)茅尾海香港牡蠣遺傳結(jié)構(gòu)的影響是有限的。2.經(jīng)Ewens-Watterson檢驗(yàn)篩選出6個(gè)中性的微衛(wèi)星標(biāo)記,對(duì)野生群體(13MW)和幼苗群體(12L、13L和14L),利用LDNe、ONeSAMP、NeEstimator、MLNE2.0等4種軟件估算廣西茅尾海香港巨牡蠣群體的有效群體大小(Ne)。各個(gè)方法估算的Ne結(jié)果從19 (MLNE2.0軟件,偽最大似然時(shí)間法)到233 (NeEstimator軟件,即時(shí)F統(tǒng)計(jì)值矩量法);利用兩代群體比僅用單個(gè)群體估算的Ne大。但是相對(duì)于整個(gè)茅尾海每年以萬(wàn)噸計(jì)的牡蠣產(chǎn)量,由此估算的有效群體相當(dāng)小。而野生群體的平均等位基因豐度為6.9,與幼苗群體等位基因豐富度均值(7.8)沒(méi)有顯著性差異(p=0.449,雙樣品t檢驗(yàn))。3.以組織切片結(jié)合肉眼觀察和活體鏡檢方法研究茅尾海和大風(fēng)江海區(qū)香港巨牡蠣的繁殖特性。大風(fēng)江黃場(chǎng)(HH)1齡牡蠣周年(2013年7月-2014年6月)性腺的檢測(cè)表明：廣西欽州的香港巨牡蠣每年有1個(gè)繁殖周期；以肉眼可分辨的特點(diǎn),可將性腺發(fā)育過(guò)程分為Ⅰ-未分化期(1-3月)、Ⅱ-分化期(4月)、Ⅲ-成熟排放期(5-10月)及Ⅳ-休止期(11-12月)；性成熟牡蠣在繁殖季節(jié)可多次產(chǎn)卵排精,可持續(xù)數(shù)月；生殖細(xì)胞分批成熟,分批排放。這一繁殖特性,會(huì)造成某一批牡蠣幼苗由少數(shù)成體繁殖而來(lái),因此根據(jù)每年中某批次幼苗樣品,估算的有效群體大小非常小,但就整個(gè)海區(qū)而言,一年中持續(xù)數(shù)月的繁殖季節(jié)中,大量親本的子代將有機(jī)會(huì)在不同的時(shí)機(jī)存活下來(lái)。從而維持茅尾海香港巨牡蠣自然群體遺傳結(jié)構(gòu)的相對(duì)穩(wěn)定。4.對(duì)比吊養(yǎng)在茅尾海沙井(SJ)、茅尾海入海口龍門(LM)、茅尾海入�？谕馇嗖祟^(QCT)、大風(fēng)江入海口內(nèi)黃場(chǎng)(HH)和大風(fēng)江入�？谕怫呜S(XF)5處的同批次2齡牡蠣性腺的啟動(dòng)和發(fā)展過(guò)程表明：1、2齡牡蠣的性腺發(fā)育基本同步；性腺發(fā)育以高鹽度的外海XF和QCT最快,而低鹽的茅尾海內(nèi)海SJ最遲。XF牡蠣4月份已發(fā)育至成熟排放期,比SJ提前約30天；QCT次之,比SJ提前約20天；而大風(fēng)江入海口內(nèi)HH和茅尾海入�？趦�(nèi)LM分別比SJ提前約15和7天；SJ牡蠣性腺在4月份仍然處于未分化期,雌雄難辨。緯度相近的5個(gè)地點(diǎn),性腺發(fā)育存在差異,而溫度沒(méi)有顯著差異,我們推測(cè)可能是由于外海區(qū)域冬季溫度相對(duì)穩(wěn)定并且餌料生物相對(duì)豐富造成的。
【圖文】：

泳圖上的位置基本一致，且呈現(xiàn)單一明顯的條帶，提取的ＤＮＡ質(zhì)量較高，基本上無(wú)逡逑拖帶現(xiàn)象。逡逑圖２－１邋２０。年茅尾海野生群體ＤＮＡ部分提取結(jié)果逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｐａｒｔｉａｌ邋ｒｅｓ山ｔ邋ｏｆ邋ＤＮＡ邋ｅ巧ｒａｃｔｉｏｎ邋ｆｒｏｍ邋２０１３ＭＷ逡逑３．２引物篩選逡逑從馬海濤開(kāi)發(fā)的香港巨牡腑引物中，加Ｍ１３合成２０對(duì)引物，在５０’Ｃ、５５’Ｃ、逡逑６０°Ｃ梯度進(jìn)行普通ＰＣＲ初步篩選，去掉了邋４對(duì)不能同時(shí)在ＤＮＡ邋ｐｏｏｌ邋１和ＤＮＡ邋ｐｏｏｌ邋２逡逑中擴(kuò)增的引物。再把１６對(duì)引物進(jìn)行帶巧光標(biāo)記的ＰＣＲ擴(kuò)增，篩選出了邋１２對(duì)擴(kuò)增穩(wěn)逡逑定、條帶清晰、無(wú)明顯雜帶的引物。將篩選出的１２對(duì)引物在２００年茅尾海野生群體逡逑中擴(kuò)X椇�，，经行毛细管道i炯觳猓歡越峁校齲幔潁洌祝澹椋睿猓澹髕膠餳觳�，踢出箔h(huán)義蝦希齲幔潁洌祝澹椋睿猓邇善膠獾模炊砸鎩Ｗ詈笊稈〕隼┰鑫榷ㄇ曳系希虜└衿膠獾模稿義隙砸錚唬茫瑁藎埃�、ＣＭ９ＹEⅲ茫瑁矗埃怠ⅲ茫停�、ＣＭＪＹEⅲ茫瑁叮玻場(chǎng)ⅲ希椋罰。�、ＣｈＡP罰叮瑢ㄏ感佩義舷⒓恚玻礎(chǔ)ｅ義希保稿義

本文編號(hào)：2553713