【摘要】：目的研究載脂蛋白E(Apo E)基因型多態(tài)性在中國人群中的分布特征,以及阿爾茨海默癥(AD)患者與健康人群中載脂蛋白E基因型的分布情況,探討在中國人群Apo E基因型多態(tài)性與AD之間的相關(guān)性,預(yù)測發(fā)生AD疾病的可能性,為預(yù)防AD提供依據(jù)。材料和方法檢測4251名正常人、404名AD患者及其年齡相對應(yīng)的390名健康人的Apo E基因分型。采用全血提取DNA;限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP);瓊脂糖凝膠電泳;Hin P1Ⅰ限制性內(nèi)切酶酶切;非SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳;銀染等實(shí)驗(yàn)方法。結(jié)果結(jié)果表明,在正常人群中,ε3等位基因頻率最高(82%),其次是ε4(6.25%)和ε2(11.75%)。ε3/ε3基因型攜帶者為最常見(64.19%),ε4/ε4為頻率最低(0.59%)。在AD與對照人群中,Apo Eε4等位基因頻率(15.35%)顯著高于對照組(10.00%)。結(jié)論攜帶兩個(gè)ε4等位基因具有高于5倍的幾率發(fā)展為AD患者,我們的研究證實(shí)在中國人群中Apo Eε4為AD的高風(fēng)險(xiǎn)因素。目的神經(jīng)退行性疾病是一類以中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元進(jìn)行性損傷及死亡導(dǎo)致運(yùn)動功能障礙和認(rèn)知功能受損為特征的一類疾病。神經(jīng)退行性疾病已成為第四位死亡原因。阿爾茨海默癥(Alzheimer’s Disease,AD)作為常見的神經(jīng)退行性疾病之一,已在世界范圍內(nèi)嚴(yán)重影響人類的健康及經(jīng)濟(jì)狀況。雖然針對AD的基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn)眾多,但其發(fā)病機(jī)制至今未明。近年有研究表明氯喹作為自噬調(diào)節(jié)劑用于神經(jīng)退行性疾病的治療很有探索價(jià)值。但目前關(guān)于氯喹在神經(jīng)退行性疾病AD治療中的作用還沒有大量的研究。本研究通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)探索氯喹對阿爾茨海默癥中APP代謝的分子機(jī)制。材料和方法在不同細(xì)胞系(SH-SY5Y,2EB2,20E2)分別用不同濃度的氯喹藥物干預(yù),檢測其對β淀粉樣蛋白前體(amyloid precursor protein,APP)的切割的影響。在APP23/PS45雙轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)用氯喹藥物干預(yù)。將6周齡的陽性轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組(藥物干預(yù)組)。實(shí)驗(yàn)組給予氯喹藥物50mg/kg腹腔注射,對照組給予等計(jì)量的PBS緩沖液,連續(xù)4周。通過Morris水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測藥物對小鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力的影響。再通過Western blotting,ELISA,免疫組化實(shí)驗(yàn)分別檢測氯喹對APP的切割及淀粉樣蛋白Aβ的影響。結(jié)果體外實(shí)驗(yàn)中,隨著氯喹藥物濃度的增加,2EB2細(xì)胞中APP無明顯變化,APP切割產(chǎn)物CTF以C89顯著增加為主,BACE1水平顯著增加。20E2細(xì)胞中APP及切割產(chǎn)物CTF均顯著增加。SH-SY5Y細(xì)胞中APP及切割產(chǎn)物CTF,ADAM10,BACE1蛋白水平顯著增加,但PS1蛋白無明顯變化。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,與對照組比較,實(shí)驗(yàn)組(藥物干預(yù)組)小鼠隱蔽平臺逃避潛伏期和活動總路徑無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,穿越平臺所在象限的次數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。腦組織內(nèi)APP,β-CTF,α-CTF,BACE1蛋白水平均增加,PS1無變化,Aβ40/Aβ42水平減少和老年斑的數(shù)量顯著減少。結(jié)論我們發(fā)現(xiàn)氯喹在體外或體內(nèi)均對APP切割代謝有影響。在APP23/PS45的AD模型小鼠中,氯喹可以減少Aβ從而減少老年斑的沉積,但未發(fā)現(xiàn)氯喹可以改善AD模型小鼠學(xué)習(xí)和記憶障礙。我們的研究表明氯喹可能作為治療AD一種潛在藥物。但其對改善認(rèn)知缺損仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16

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本文編號：2380786