本文選題：血清 + microRNA�。� 參考：《南方醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：背景肺癌是全世界發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤。據(jù)統(tǒng)計,一半的肺癌患者在確診肺癌時已發(fā)生了遠處轉移,基本失去了接受根治性治療的機會,中位生存期僅有8-11個月。其中,肺癌中85%的病例為非小細胞肺癌,非小細胞肺癌又以腺癌和鱗癌兩類為主。截至目前為止,還未有一種準確可靠、經(jīng)濟便捷和創(chuàng)傷性小的方法應用于早期非小細胞肺癌患者的診斷。miRNA為一類長度約19-24個核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA,大量的文獻證實其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及轉移復發(fā)相關。自從miRNA被首次在循環(huán)系統(tǒng)中檢測到以來,其已被證實能夠穩(wěn)定地存在于血清中,而且可能作為一種無創(chuàng)性的生物標志物應用于腫瘤早期診斷。目的試圖找到潛在的可用于非小細胞肺癌早期診斷的血清miRNA生物標志物。材料與方法本實驗研究主要分為三部分進行。在第一部分實驗中,我們選取了 6例早期非小細胞肺癌患者和6例年齡與性別相匹配的健康人,提取其中的血清總RNA,采用丹麥Exiqon公司的miRCURYTM LNA Array篩選出早期非小細胞肺癌患者相對于健康人的差異性miRNAs表達譜,同時利用生物信息學的方法進行數(shù)據(jù)挖掘獲得組織或血清樣本中非小細胞肺癌相關的差異表達miRNAs,最后將兩部分結果取交集初步篩選出差異表達的血清miRNAs;在第二部分實驗中,我們選取了 12例早期非小細胞肺癌患者和12例年齡、性別相匹配的健康人,一共24例病例作為訓練集進行初步驗證。同樣地,提取其中的血清總RNA,然后采用實時熒光定量PCR技術對第一部分中初步篩選出來的差異表達血清miRNAs進行初步驗證;在第三部分實驗中,我們選取了 60例早期非小細胞肺癌患者和60例年齡、性別相匹配的健康人,一共120例病例作為驗證集進行進一步驗證。同樣地,提取其中的血清總RNA,然后采用實時熒光定量PCR技術對通過前兩部分實驗研究初步驗證得到的差異表達血清miRNAs進行進一步驗證。最后,我們采用受試者工作曲線對經(jīng)過訓練集和驗證集雙重驗證的差異表達血清miRNAs進行診斷效能分析,確定潛在的可應用于非小細胞肺癌患者早期診斷的生物標志物。結果在第一部分實驗中,12例病例血清提取的總RNA純度及濃度均達到后續(xù)實驗的基本要求;每張芯片的探針點均成像均勻,未見有明顯異常的區(qū)域;以表達倍數(shù)變化2倍及以上,p值小于0.05的標準對芯片結果進行篩選,可以得到122個上調差異表達的miRNAs和87個下調差異表達的miRNAs;數(shù)據(jù)挖掘結果中,對于血清樣本,有31個上調差異表達的miRNAs,有28個下調差異表達的miRNAs;對于組織樣本,有172個上調差異表達的miRNA,有137個下調差異表達的miRNAs。取交集后,最終初步篩選出了 miR-185-5p、miR-431-5p、miR-484、miR-492、miR-584-5p、miR-590-3p 和 miR-631 等 7 個血清差異表達miRNAs。在第二部分實驗中,正常對照組血清中U6的平均Ct值為23.57 ±0.23,肺癌實驗組血清中U6的平均Ct值為23.19 ±0.25,兩組血清樣本間U6的Ct值無顯著性統(tǒng)計差異,可作為合適的內參基因;在訓練集中,相比于健康人,早期非小細胞肺癌患者血清中的miR-492和miR-590-3p分別上調了 1.88和1.71倍,且p值分別為0.0086和0.0141,差異均具有統(tǒng)計學上意義;miR-631則下調了 1.46倍,且p值為0.0304,差異具有統(tǒng)計學上意義;而miR-185-5p、miR-431-5p和miR-484等3個miRNAs雖然也呈現(xiàn)出差異性表達,但是其p值均大于0.05,差異不具有統(tǒng)計學上意義;miR-584-5p則顯示其Ct值大于40,提示其在血清中的含量極低,檢測不到。在第三部分實驗中,在驗證集中,相比于健康人,早期非小細胞肺癌患者血清中的miR-492和miR-590-3p分別上調了 1.65和1.69倍,且p值均小于0.0001,差異均具有統(tǒng)計學上意義;miR-631則下調了 1.50倍,且p值小于0.0001,差異具有統(tǒng)計學上意義。單獨應用miR-492、miR-590-3p或miR-631等3個血清miRNAs對健康人和早期非小細胞肺癌患者進行區(qū)分的AUC分別為;0.789、0.792和0.711。當將這3個血清miRNAs作為一個組合時,運用該組合對健康人和早期非小細胞肺癌患者進行區(qū)分的AUC達到0.828(95%CI,0.750-0.905,p = 0.000),敏感度高達 86.7%,特異度高達 71.7%。結論由miR-492、miR-590-3p和miR-631等3個血清miRNAs組成的集合可以作為一種潛在的生物標志物應用于非小細胞肺癌患者的早期診斷,具有一定的臨床意義。然而,此種生物標志物的真正臨床使用,還需要進一步的實驗研究,尤其是大樣本、多中心參與的前瞻性臨床試驗。
[Abstract]:In the first part of the experiment , we selected 6 patients with early non - small cell lung cancer and 6 healthy persons with age and sex . In the second experiment , the values of miR - 492 and miR - 590 - p in serum of non - small - cell lung cancer were significantly lower than those in healthy people , and the difference was statistically significant . Conclusion The combination of miR - 492 , miR - 590 - 3P and miR - 631 can be used as a potential biomarker in the early diagnosis of non - small cell lung cancer patients and has some clinical significance . However , the real clinical use of such biomarkers requires further experimental research , in particular large - sample and multi - center participation in prospective clinical trials .

【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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