發(fā)布時(shí)間：2017-09-11 05:24

  本文關(guān)鍵詞：MGF調(diào)控骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的遷移及ERK在其中的作用

  更多相關(guān)文章： 機(jī)械生長(zhǎng)因子 肌衛(wèi)星細(xì)胞 增殖 遷移信號(hào)通路

【摘要】：研究目的骨骼肌損傷現(xiàn)象在人們?nèi)粘ｓw育活動(dòng)中是很常見的,但其愈合效果往往不理想,原因是骨骼肌的自我修復(fù)有諸多的局限性,于是,如何使骨骼肌能夠更快速而且高質(zhì)量地愈合,成了運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域迫切需要解決的問(wèn)題和從事體育運(yùn)動(dòng)人群的關(guān)注焦點(diǎn)。在骨骼肌受損時(shí),肌衛(wèi)星細(xì)胞開始發(fā)揮舉足輕重的作用,它經(jīng)過(guò)自身的增殖、遷移等行為,影響著骨骼肌的再生。以往關(guān)于MGF遷移通路的研究比較少見。本研究通過(guò)離體培養(yǎng)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,在MGF干預(yù)下聯(lián)合使用PD98059(Erk1/2)抑制劑,探究MGF調(diào)控骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移的信號(hào)傳導(dǎo)通路。實(shí)驗(yàn)方法取體重為110g左右的SD大鼠(雄性)1只,在清潔無(wú)菌的條件下提取比目魚肌和腓腸肌,充分剪碎后用兩步酶消化法消化肌肉釋放細(xì)胞;接著進(jìn)行兩次差速貼壁去除大部分成纖維細(xì)胞及其他細(xì)胞;臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)所得細(xì)胞活性率;使用細(xì)胞免疫染色法來(lái)進(jìn)行鑒定。取傳代至三代的細(xì)胞用45ng/ml的人工合成MGF進(jìn)行干預(yù),實(shí)驗(yàn)分組:C組、MGF組、MGF+PD組,每組分別干預(yù)24、48、72、96h,用CCK-8實(shí)驗(yàn)測(cè)肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖能力;使用Transwell法測(cè)其遷移率;Western Blot測(cè)各組Erk1/2蛋白表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、臺(tái)盼藍(lán)拒染法:細(xì)胞著色數(shù)量為17個(gè),未被著色細(xì)胞數(shù)為483個(gè)。本次實(shí)驗(yàn)細(xì)胞活性率為(500-17)÷500x100%=96.6%(大于95%)符合實(shí)驗(yàn)要求。2、免疫化學(xué)染色結(jié)果:橫紋肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性。3、CCK-8結(jié)果:檢測(cè)的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的OD值,比較C組和MGF組的數(shù)據(jù)表明,MGF組在24、48、72、96h增殖的OD值均非常顯著高于C組(P0.01)。4、Transwell結(jié)果:a.MGF組結(jié)果顯示,48、72h組的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移的OD值非常顯著高于24h組細(xì)胞(P0.01),96h組OD值也顯著高于24h組(P0.05)。b.比較MGF組與MGF+PD組的數(shù)據(jù)表明,在24、48、72、96h組中,MGF組與MGF+PD組骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移的OD值均沒(méi)有顯著性差異(P0.05)。5、Western Blot結(jié)果:使用Western Blot測(cè)P-Erk1/2在MGF組和MGF+PD組的表達(dá),結(jié)果顯示MGF+PD組在培養(yǎng)24、48、72h時(shí)P-Erk1/2表達(dá)量非常顯著低于MGF組(P0.01),MGF+PD組培養(yǎng)96h時(shí)P-Erk1/2的表達(dá)量也低于MGF組(P0.05)。結(jié)論1.外源性MGF能促進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖,而且對(duì)其增殖的影響具有時(shí)效關(guān)系,最佳時(shí)間點(diǎn)為72h,在24-72h范圍內(nèi)促進(jìn)細(xì)胞增殖效果呈逐漸上升趨勢(shì),在72-96h范圍內(nèi)呈下降趨勢(shì)。2.外源性MGF能促進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的遷移,而且骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖能力可能會(huì)影響其遷移效果。3.ERK抑制劑(PD)對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移效果的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示MGF可能不是通過(guò)MAPK/ERK1/2信號(hào)通路影響骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移的。
【關(guān)鍵詞】：機(jī)械生長(zhǎng)因子 肌衛(wèi)星細(xì)胞 增殖 遷移信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：上海體育學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：G804.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 1 前言11
• 2 文獻(xiàn)綜述11-17
• 2.1 骨骼肌的損傷及修復(fù)11-12
• 2.2 IGF-I對(duì)骨骼肌再生修復(fù)的影響12
• 2.3 MGF的發(fā)現(xiàn)和命名12-13
• 2.4 MGF的功能13
• 2.5 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞13
• 2.6 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活13-14
• 2.7 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和分化14-15
• 2.8 細(xì)胞的遷移15
• 2.9 信號(hào)通路與細(xì)胞遷移15-16
• 2.10 ERK及MAPK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路16-17
• 3 研究對(duì)象與方法17-25
• 3.1 研究對(duì)象17
• 3.2 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線17-18
• 3.3 實(shí)驗(yàn)的主要儀器名稱18
• 3.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑18-19
• 3.5 主要實(shí)驗(yàn)試劑配制方法及步驟19-20
• 3.6 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的原代、傳代培養(yǎng)20
• 3.6.1 原代培養(yǎng)20
• 3.6.2 傳代培養(yǎng)20
• 3.7 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的活性檢測(cè)方法——臺(tái)盼藍(lán)拒染法20-21
• 3.8 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的純度鑒定21-22
• 3.9 MGF影響骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的測(cè)定方法22
• 3.9.1 實(shí)驗(yàn)分組22
• 3.9.2 CCK-8 法增殖測(cè)定22
• 3.10 MGF影響骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移的測(cè)定方法22-23
• 3.10.1 實(shí)驗(yàn)分組22
• 3.10.2 Transwell法遷移測(cè)定22-23
• 3.11 Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蛋白表達(dá)23-25
• 3.11.1 蛋白樣本制備23
• 3.11.2 BCA法蛋白定量23
• 3.11.3 SDS-PAGE電泳23-25
• 3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-33
• 4.1 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞活細(xì)胞計(jì)數(shù)25
• 4.2 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的形態(tài)變化特征25-27
• 4.3 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的純度鑒定27-28
• 4.4 MGF干預(yù)下骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖變化28
• 4.5 MGF組和MGF+PD組不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移結(jié)果28-31
• 4.5.1 MGF組和MGF+PD組遷移效果圖比較28-29
• 4.5.2 MGF組和MGF+PD組的肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移結(jié)果比較29-31
• 4.6 Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-33
• 4.6.1 Erk1/2 蛋白的表達(dá)31-32
• 4.6.2 P- Erk1/2 蛋白的表達(dá)32-33
• 5 討論33-36
• 5.1 高純度骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的提取33
• 5.2 細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇和使用33-34
• 5.3 衛(wèi)星細(xì)胞鑒定34
• 5.4 不同增殖能力的骨骼肌衛(wèi)星模型的建立34-35
• 5.4.1 MGF干預(yù)濃度的選擇34
• 5.4.2 MGF干預(yù)時(shí)間的設(shè)定34-35
• 5.5 MGF對(duì)肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移的影響35
• 5.6 Erk1/2 對(duì)肌衛(wèi)星細(xì)胞遷移的影響35-36
• 6 結(jié)論36-37
• 7 參考文獻(xiàn)37-41
• 8 致謝41

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 吳]};陸耀飛;;機(jī)械生長(zhǎng)因子對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞激活的影響及與其增殖的量效關(guān)系[J];體育科學(xué);2011年02期

2 陳國(guó)慶;;運(yùn)動(dòng)對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的影響及作用機(jī)制[J];四川解剖學(xué)雜志;2011年02期

3 門杰;李越;;骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];吉林體育學(xué)院學(xué)報(bào);2013年05期

4 危小焰;史仍飛;卞玉華;;不同頻率張應(yīng)變刺激對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J];體育科學(xué);2008年06期

5 吳]};陸耀飛;;骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞研究進(jìn)展[J];健康研究;2009年05期

6 吳]};陸耀飛;;不同氧環(huán)境及葡萄糖濃度對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J];體育科學(xué);2014年05期

7 朱道立;;骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞及其在組織工程與創(chuàng)傷修復(fù)中的應(yīng)用[J];生物學(xué)教學(xué);2009年02期

8 王海燕;陳濤;丁樹哲;;骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞“衰老”的分子機(jī)制及運(yùn)動(dòng)對(duì)其影響[J];中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志;2013年08期

9 史仍飛;危小焰;卞玉華;;機(jī)械牽拉刺激對(duì)大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的影響[J];體育科學(xué);2007年05期

10 戴玉州;陳彩珍;;衰老和運(yùn)動(dòng)對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的影響[J];山西師大體育學(xué)院學(xué)報(bào);2010年S2期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 覃立立;黎小葵;王，

本文編號(hào)：828872