發(fā)布時間：2023-12-09 12:18

　　目的:運動能改善胰島素抵抗,但是相關機制一直不太明確。在此基礎上,本課題建立C2C12肌管胰島素抵抗模型,并用機械牽拉模擬運動,探索運動對胰島素信號通路,炎癥,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激,脂肪酸氧化的調(diào)節(jié)作用,以此證明機械牽拉改善C2C12肌管狀態(tài)的可能作用機制。方法:1.將C2C12小鼠成肌細胞用2%的馬血清分化培養(yǎng)6天,變成肌管。除正常組外,用0.5mM棕櫚酸誘導16h建立胰島素抵抗模型。2.用油紅O放射檢測脂肪沉積,ROS熒光染色檢測氧化應激,糖攝取方法檢測上清葡萄糖含量,熒光定量PCR法檢測胰島素信號通路相關因子,包括胰島素受體底物1、磷酸肌醇3-激酶、蛋白激酶B、葡萄糖轉(zhuǎn)運體4的基因表達,鑒定胰島素抵抗模型建立成功。3.胰島素抵抗組用15%,1HZ,6h的牽拉參數(shù)進行牽拉,采用熒光定量PCR法檢測普通對照組,胰島素抵抗組,機械牽拉組胰島素信號通路相關因子(GLUT4,PI3K,IRS-1,AKT),炎癥因子(IL-6,TNFα,TGF-β,NF-κB),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激因子(ATF3,BIP,CHOP,HSP70,TRB3),脂肪酸代謝因子PGC1α、PPARα和Acox1的基因表達;采用糖攝取方...

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
符號與說明
引言
文獻綜述
    1.胰島素抵抗
    2.骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運的途徑
        2.1 胰島素依賴性途徑
        2.2 非胰島素依賴性葡萄糖攝取
    3.影響骨骼肌胰島素抵抗的因素
        3.1 胰島素抵抗與氧化應激
        3.2 胰島素抵抗與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激
        3.3 胰島素抵抗與炎癥
        3.4 胰島素抵抗與脂肪沉積
        3.5 胰島素抵抗與脂肪酸代謝
    4.運動改善胰島素抵抗
        4.1 運動抗氧化改善骨骼肌胰島素抵抗
        4.2 運動抗炎癥改善骨骼肌胰島素抵抗
        4.3 運動抗脂肪酸氧化改善胰島素抵抗
        4.4 運動抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激改善胰島素抵抗
    5.總結
1.實驗材料
    1.1 細胞株
    1.2 儀器
    1.3 實驗試劑
2.實驗方法
    2.1 C2C12 小鼠成肌細胞的培養(yǎng)
        2.1.1 細胞復蘇
        2.1.2 細胞傳代培養(yǎng)
        2.1.3 細胞凍存
    2.2 C2C12 小鼠成肌細胞分化
    2.3 棕櫚酸誘導IR模型
    2.4 周期性機械牽拉
    2.5 上清葡萄糖含量的測定
    2.6 油紅O的測定
    2.7 ROS活性氧測試方法
    2.8 細胞的提取與檢測(Trizol法)
3.技術路線圖
4.統(tǒng)計學分析
5.實驗結果
    5.1 C2C12 細胞誘導分化為肌管
    5.2 C2C12 肌管胰島素抵抗模型的鑒定
        5.2.1 C2C12 肌管油紅0 染色
        5.2.2 C21C2 肌管ROS熒光染色
        5.2.3 C2C12 肌管上清葡萄糖含量
        5.2.4 C2C12 肌管胰島素信號通路的基因表達
    5.3 機械牽拉改善胰島素抵抗
        5.3.1 機械牽拉后C2C12 肌管的形態(tài)變化
        5.3.2 機械牽拉提高了葡萄糖的攝取
        5.3.3 機械牽拉改善胰島素信號通路的基因表達
        5.3.4 機械牽拉改善IR肌細胞炎癥因子表達
        5.3.5 機械牽拉改善IR及細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激因子表達
        5.3.6 機械牽拉改善脂防酸氧化
6.討論
    6.1 C2C12 肌管胰島素抵抗模型的建立
    6.2 機械牽拉參數(shù)的選擇
    6.3 C2C12 肌管胰島素抵抗模型的鑒定
        6.3.1 C2C12 肌管胰島素抵抗模型出現(xiàn)脂肪沉積
        6.3.2 C2C12 肌管胰島素抵抗模型出現(xiàn)氧化應激
        6.3.3 C2C12 肌管胰島素抵抗模型葡萄糖攝取減少
        6.3.4 C2C12 肌管胰島素抵抗模型中胰島素信號通路異常
    6.4 機械牽拉對IR肌管的改善效應
        6.4.1 機械牽拉對IR肌管糖攝取的改善效應
        6.4.2 機械牽拉改善IR肌細胞胰島素信號通路的因子表達
        6.4.3 機械牽拉改善IR肌細胞炎癥因子表達
        6.4.4 機械牽拉改善IR肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激因子表達
        6.4.5 機械牽拉改善IR肌細胞脂防酸氧化的因子表達
7.結論
8.參考文獻
致謝



本文編號：3871561