目的:運(yùn)動(dòng)能改善胰島素抵抗,但是相關(guān)機(jī)制一直不太明確。在此基礎(chǔ)上,本課題建立C2C12肌管胰島素抵抗模型,并用機(jī)械牽拉模擬運(yùn)動(dòng),探索運(yùn)動(dòng)對(duì)胰島素信號(hào)通路,炎癥,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,脂肪酸氧化的調(diào)節(jié)作用,以此證明機(jī)械牽拉改善C2C12肌管狀態(tài)的可能作用機(jī)制。方法:1.將C2C12小鼠成肌細(xì)胞用2%的馬血清分化培養(yǎng)6天,變成肌管。除正常組外,用0.5mM棕櫚酸誘導(dǎo)16h建立胰島素抵抗模型。2.用油紅O放射檢測(cè)脂肪沉積,ROS熒光染色檢測(cè)氧化應(yīng)激,糖攝取方法檢測(cè)上清葡萄糖含量,熒光定量PCR法檢測(cè)胰島素信號(hào)通路相關(guān)因子,包括胰島素受體底物1、磷酸肌醇3-激酶、蛋白激酶B、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4的基因表達(dá),鑒定胰島素抵抗模型建立成功。3.胰島素抵抗組用15%,1HZ,6h的牽拉參數(shù)進(jìn)行牽拉,采用熒光定量PCR法檢測(cè)普通對(duì)照組,胰島素抵抗組,機(jī)械牽拉組胰島素信號(hào)通路相關(guān)因子(GLUT4,PI3K,IRS-1,AKT),炎癥因子(IL-6,TNFα,TGF-β,NF-κB),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激因子(ATF3,BIP,CHOP,HSP70,TRB3),脂肪酸代謝因子PGC1α、PPARα和Acox1的基因表達(dá);采用糖攝取方...

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
符號(hào)與說(shuō)明
引言
文獻(xiàn)綜述
    1.胰島素抵抗
    2.骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的途徑
        2.1 胰島素依賴性途徑
        2.2 非胰島素依賴性葡萄糖攝取
    3.影響骨骼肌胰島素抵抗的因素
        3.1 胰島素抵抗與氧化應(yīng)激
        3.2 胰島素抵抗與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        3.3 胰島素抵抗與炎癥
        3.4 胰島素抵抗與脂肪沉積
        3.5 胰島素抵抗與脂肪酸代謝
    4.運(yùn)動(dòng)改善胰島素抵抗
        4.1 運(yùn)動(dòng)抗氧化改善骨骼肌胰島素抵抗
        4.2 運(yùn)動(dòng)抗炎癥改善骨骼肌胰島素抵抗
        4.3 運(yùn)動(dòng)抗脂肪酸氧化改善胰島素抵抗
        4.4 運(yùn)動(dòng)抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激改善胰島素抵抗
    5.總結(jié)
1.實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 細(xì)胞株
    1.2 儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
2.實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 C2C12 小鼠成肌細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.1.2 細(xì)胞傳代培養(yǎng)
        2.1.3 細(xì)胞凍存
    2.2 C2C12 小鼠成肌細(xì)胞分化
    2.3 棕櫚酸誘導(dǎo)IR模型
    2.4 周期性機(jī)械牽拉
    2.5 上清葡萄糖含量的測(cè)定
    2.6 油紅O的測(cè)定
    2.7 ROS活性氧測(cè)試方法
    2.8 細(xì)胞的提取與檢測(cè)(Trizol法)
3.技術(shù)路線圖
4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.1 C2C12 細(xì)胞誘導(dǎo)分化為肌管
    5.2 C2C12 肌管胰島素抵抗模型的鑒定
        5.2.1 C2C12 肌管油紅0 染色
        5.2.2 C21C2 肌管ROS熒光染色
        5.2.3 C2C12 肌管上清葡萄糖含量
        5.2.4 C2C12 肌管胰島素信號(hào)通路的基因表達(dá)
    5.3 機(jī)械牽拉改善胰島素抵抗
        5.3.1 機(jī)械牽拉后C2C12 肌管的形態(tài)變化
        5.3.2 機(jī)械牽拉提高了葡萄糖的攝取
        5.3.3 機(jī)械牽拉改善胰島素信號(hào)通路的基因表達(dá)
        5.3.4 機(jī)械牽拉改善IR肌細(xì)胞炎癥因子表達(dá)
        5.3.5 機(jī)械牽拉改善IR及細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激因子表達(dá)
        5.3.6 機(jī)械牽拉改善脂防酸氧化
6.討論
    6.1 C2C12 肌管胰島素抵抗模型的建立
    6.2 機(jī)械牽拉參數(shù)的選擇
    6.3 C2C12 肌管胰島素抵抗模型的鑒定
        6.3.1 C2C12 肌管胰島素抵抗模型出現(xiàn)脂肪沉積
        6.3.2 C2C12 肌管胰島素抵抗模型出現(xiàn)氧化應(yīng)激
        6.3.3 C2C12 肌管胰島素抵抗模型葡萄糖攝取減少
        6.3.4 C2C12 肌管胰島素抵抗模型中胰島素信號(hào)通路異常
    6.4 機(jī)械牽拉對(duì)IR肌管的改善效應(yīng)
        6.4.1 機(jī)械牽拉對(duì)IR肌管糖攝取的改善效應(yīng)
        6.4.2 機(jī)械牽拉改善IR肌細(xì)胞胰島素信號(hào)通路的因子表達(dá)
        6.4.3 機(jī)械牽拉改善IR肌細(xì)胞炎癥因子表達(dá)
        6.4.4 機(jī)械牽拉改善IR肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激因子表達(dá)
        6.4.5 機(jī)械牽拉改善IR肌細(xì)胞脂防酸氧化的因子表達(dá)
7.結(jié)論
8.參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3871561