【摘要】：研究目的:觀察大鼠在運(yùn)動(dòng)性動(dòng)情周期抑制狀態(tài)下卵巢線粒體DNA拷貝數(shù)的變化以及卵巢NADH表達(dá)水平的變化。從分子水平初步探討運(yùn)動(dòng)性動(dòng)情周期抑制的發(fā)病機(jī)制和導(dǎo)致的病理結(jié)果。以期為運(yùn)動(dòng)性月經(jīng)失調(diào)的預(yù)防與治療提供新的線索。研究方法:將健康且動(dòng)情周期正常的SD大鼠(3月齡、雌鼠)30只隨機(jī)分為2組:空白對(duì)照組(C組,n=10)、運(yùn)動(dòng)組(E組,n=20)。對(duì)照組不做任何干預(yù),自然喂養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。運(yùn)動(dòng)組大鼠每天進(jìn)行大負(fù)荷游泳訓(xùn)練,每周訓(xùn)練6天,休息1天。所有大鼠每天進(jìn)行陰道涂片以觀察其動(dòng)情周期的變化。當(dāng)運(yùn)動(dòng)組大鼠連續(xù)3個(gè)動(dòng)情周期出現(xiàn)陰道上皮角化細(xì)胞大量減少甚至消失時(shí)確定實(shí)驗(yàn)造模成功。實(shí)驗(yàn)期間,運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組大鼠死亡5只,皆因游泳訓(xùn)練過程中嗆水致死。造模成功后觀察大鼠的一般情況及體重變化,無菌提取其卵巢,用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(q RT-PCR)法擴(kuò)增線粒體DNA測(cè)其拷貝數(shù),用已知濃度的質(zhì)粒DNA做為標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線來定量線粒體DNA的拷貝數(shù),分析對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組的拷貝數(shù)變化情況,同時(shí)分析其與突變情況的相關(guān)性。用蛋白質(zhì)印跡(Western blot)法檢測(cè)線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅲ(NADH限速酶)的蛋白表達(dá)水平。研究結(jié)果:1.隨著實(shí)驗(yàn)過程深入,運(yùn)動(dòng)組大鼠陸續(xù)出現(xiàn)動(dòng)情周期紊亂,活動(dòng)減少、反應(yīng)遲鈍、精神萎靡、易受驚嚇,攝食飲水減少,毛發(fā)脫落稀疏無光澤,體重增長緩慢。對(duì)照組大鼠動(dòng)情周期正常,發(fā)育良好、活潑好動(dòng),飲水?dāng)z食正常,毛發(fā)整潔有光澤,體重穩(wěn)定增長。2、本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,運(yùn)動(dòng)組個(gè)體較對(duì)照組個(gè)體卵巢mtDNA相對(duì)拷貝數(shù)均明顯降低(p0.01)。對(duì)照組平均mtDNA相對(duì)拷貝數(shù)為82.74±3.85,運(yùn)動(dòng)組平均mtDNA相對(duì)拷貝數(shù)僅為38.54±1.42,兩組平均值表現(xiàn)出極顯著差異(p0.01)。3、結(jié)果統(tǒng)計(jì)將樣本NADH(51KD)與對(duì)應(yīng)內(nèi)參蛋白GAPDH(36KD)兩灰度值相比所得比值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)照組NADH平均灰度比值為0.89±0.17,而在運(yùn)動(dòng)組中該值為0.36±0.09,差異極顯著(p0.01)。研究結(jié)論:1、長期大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)不利于大鼠的一般情況和臟器的發(fā)育,使機(jī)體長期處于無氧刺激過程,導(dǎo)致卵巢線粒體結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生病理性改變,可能導(dǎo)致大鼠動(dòng)情周期抑制。2、長期大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)影響mtDNA的自我復(fù)制功能,運(yùn)動(dòng)組大鼠卵巢mtDNA拷貝數(shù)顯著降低,提示長期高強(qiáng)度訓(xùn)練抑制線粒體DNA的復(fù)制功能。3、長期大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)抑制mtDNA的轉(zhuǎn)錄功能,降低線粒體的酶活性,使呼吸鏈酶活性下降。機(jī)體長期啟用低、無氧供能途徑,相對(duì)削弱了線粒體的氧化磷酸化功能。本實(shí)驗(yàn)從線粒體方面對(duì)長期高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致動(dòng)情周期抑制提供了相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持,為運(yùn)動(dòng)性閉經(jīng)的預(yù)防和治療提供了新的線索,有待進(jìn)一步探索。
[Abstract]:Aim: to observe the changes of ovarian DNA copy number and ovarian NADH expression level under exercise estrous cycle inhibition in rats. The pathogenesis and pathological results of motor estrous cycle inhibition were discussed at molecular level. In order to provide new clues for the prevention and treatment of exercise-induced menstrual disorders. Methods: thirty healthy SD rats with normal estrous cycle (3 months old, female rats) were randomly divided into two groups: blank control group (group C, n 鈮，

本文編號(hào)：2483249