本文選題：PHB1 + ATP合酶�。� 參考：《天津體育學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究運(yùn)動(dòng)疲勞狀態(tài)下骨骼肌線粒體中PHB1與F_0F_1-ATP合酶是否存在相互作用,以及與其具體產(chǎn)生作用的亞單位。方法:選取雄性SD大鼠80只(8周齡),先適應(yīng)性喂養(yǎng)2天,稱重后隨機(jī)分為兩個(gè)運(yùn)動(dòng)程序進(jìn)行動(dòng)物跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn):1.急性運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練程序(1)對照組:20只,常規(guī)飼養(yǎng),不加干涉;(2)急性力竭組:20只,常規(guī)飼養(yǎng),滿8周后讓大鼠一次性力竭活動(dòng);判別力竭狀況的標(biāo)準(zhǔn)為:大鼠的跑姿由蹬地式轉(zhuǎn)變?yōu)榉厥?滯留在跑道尾部不再連續(xù)跑動(dòng),且電刺激也不能驅(qū)使大鼠再繼續(xù)跑動(dòng)。2.長期運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練程序:(1)對照組:20只,常規(guī)飼養(yǎng),不加干涉。(2)中等強(qiáng)度訓(xùn)練組:20只,每周6天,第一周以坡度為10%,10m/min的速率跑10min;第二周以坡度為10%,15m/min的速度跑10min每天增加10min之第二周結(jié)束為止,從第三周開始維持這速度和時(shí)間跑到第8周完為止;(3)過度疲勞訓(xùn)練組:20只,每周練習(xí)6天,歇息1天,采取強(qiáng)度遞增式跑臺(tái)活動(dòng)。從練習(xí)的第1周起,逐步增添速率、坡度和跑步時(shí)長。跑臺(tái)的速率從15m/min,每周增添5m/min,增至30m/min,后再也不增添;坡度從0°起,每周增添5°,增添至15°后再也不增添;訓(xùn)練時(shí)間從30min,每周增加20min增加到110min后穩(wěn)定訓(xùn)練時(shí)間,不再增加。訓(xùn)練周數(shù)直至第8周。收集各組模型動(dòng)物的骨骼肌組織樣品,一部分留樣,一部分用研磨管進(jìn)行組織勻漿,勻漿組織用線粒體蛋白試劑盒提取線粒體蛋白,質(zhì)譜鑒定分析出與PHB1相互作用的ATP合酶亞單位。然后采取免疫共沉淀方式驗(yàn)證不同運(yùn)動(dòng)形式大鼠線粒體ATP合酶中與PHB1相互作用的亞單位。結(jié)果:1.質(zhì)譜分析檢測出了ATP合酶亞單位,四組不同運(yùn)動(dòng)形式的大鼠骨骼肌線粒體中都含有的與PHB1結(jié)合的ATP合酶蛋白:ATP合酶α亞單位和ATP合酶亞單位γ。其中以過度訓(xùn)練組ATP合酶蛋白種類最多,對照組ATP合酶蛋白種類最少。與對照組相比,中等訓(xùn)練組大鼠又檢測出ATP合酶亞單位d;過度訓(xùn)練組大鼠又檢測出ATP合酶F_0復(fù)合體亞單位B1、ATP合酶亞單位d、ATP合酶亞單位O、ATP合酶亞單位β。與中等強(qiáng)度訓(xùn)練組相比,過度訓(xùn)練組又多檢測出ATP合酶F_0復(fù)合體亞單位B1、ATP合酶亞單位β、ATP合酶亞單位O。與對照組相比,一次性力竭組又多檢測出ATP合酶亞單位β。2.免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)PHB1與ATP合酶的α、γ亞單位相互作用。結(jié)論:1.骨骼肌線粒體中PHB1與ATP合酶存在相互作用。2.大鼠骨骼肌線粒體中PHB1與ATP合酶的α、γ亞單位存在相互作用。
[Abstract]:Aim: to study the interaction between PHB1 and F_0F_1-ATP synthase in mitochondria of skeletal muscle under exercise fatigue and the specific subunits. Methods: 80 male Sprague-Dawley rats were selected and fed adaptively for 2 days. Acute exercise training program (1) the control group: 20 rats were fed with routine feeding without interference. 20 rats in acute exhaustion group were fed with routine exercise. After 8 weeks, the rats were given a one-time exhaustive exercise. According to the criteria of exhaustion, the running posture of the rats changed from pedaling to volley, and the rats did not run continuously in the tail of the runway, and the electrical stimulation could not drive the rats to continue to run. 2. Long-term exercise training program: 1) the control group: 20 rats, conventional rearing, without interference...) moderate intensity training group: 20 mice, 6 days a week, The first week ran at a slope of 10 to 10 m / min for 10 minutes; the second week at a gradient of 10 to 15 m / min 10min increased 10min daily until the end of the second week, and from the third week to the end of week 8) the overfatigue training group: 20. Practice 6 days a week, rest for 1 day, and take a step-by-step treadmill. From the first week of practice, step by step increase in speed, slope, and running time. From 15 m / min, 5 m / min per week to 30 m / min, then no further increase; from 0 擄to 5 擄per week, to 15 擄per week, no more; from 30 minutes, the increase of 20min per week to the stable training time after 110min, no longer increase. (3) the speed of the running stage is increased from 15 m / min to 30 m / min, and then increases to 30 m / min, and increases to 30 m / min per week. Number of training weeks until 8 th week. The skeletal muscle tissue samples of each group were collected, some samples were retained, some tissues were homogenized with grinding tubes, and mitochondrial proteins were extracted from homogenate tissue by mitochondrial protein kit. The ATP synthase subunits interacting with PHB1 were identified by mass spectrometry. Then the immunoprecipitation method was used to identify the interaction subunits between PHB1 and mitochondrial ATP synthase in rat mitochondria in different exercise forms. The result is 1: 1. The ATP synthase subunits were detected by mass spectrometry. The ATP synthase protein (ATP synthase 偽 subunit) and ATP synthase subunit 緯 (ATP synthase subunit) binding to PHB1 were found in the mitochondria of four different exercise forms of rat skeletal muscle. The types of ATP synthase protein were the most in the overtraining group and the least in the control group. Compared with the control group, the ATP synthase subunit d was detected in the middle training group, and the ATP synthase F0 complex subunit B1 + ATP synthase subunit, OG ATP synthase subunit 尾, was detected in the overtraining group. Compared with medium intensity training group, ATP synthase F0 complex subunit B1 + ATP synthase subunit 尾 -tATP synthase subunit O was detected in overtraining group. Compared with the control group, the ATP synthase subunit 尾. 2. The interaction between PHB1 and 偽, 緯 subunits of ATP synthase was found by immunoprecipitation. Conclusion 1. There is interaction between PHB1 and ATP synthase in mitochondria of skeletal muscle. There is interaction between PHB1 and 偽, 緯 subunits of ATP synthase in mitochondria of rat skeletal muscle.
【學(xué)位授予單位】：天津體育學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：G804.7

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