目的了解我國膿腫分枝桿菌復合群(MABC)在非結核分枝桿菌(NTM)中的構成分布;弄清MABC的耐藥現狀；初步探索其對克拉霉素的耐藥機制及基因分型。為我國MABC肺病的治療提供依據。方法1、對中國疾病預防控制中心國家結核病參比實驗室2011年1月-2012年12月凍存的490株經對硝基苯甲酸(PNB)初步鑒定為NTM的臨床菌株給予16S rRNA、 hsp65、rpoB和ITS多靶位基因PCR-測序的分子菌種鑒定。2、用微孔板Alamar blue顯色法檢測MABC對16種藥物的最低抑菌濃度(MIC)。3、隨機挑選出部分菌株,進一步用棋盤稀釋法作兩藥的體外聯(lián)合藥敏試驗。4、對藥敏試驗延長培養(yǎng)至14天,觀察MABC對克拉霉素的誘導耐藥情況,并對耐藥相關基因rrl及erm(41)進行測序,研究克拉霉素耐藥表型和基因型的關系。5、對所有的MABC菌株進行可變數目串聯(lián)重復序列(VNTR)基因分型。結果1、鑒定結果NTM452株,其中MABC100株,占22.1%,為NTM的第二位：100株MABC中,膿腫分枝桿菌75株,馬賽分枝桿菌25株。2、100株MABC的體外藥敏結果顯示：耐藥率較低的5種藥為：利奈唑胺、阿米卡星、克拉霉素、阿奇霉素、替加環(huán)素,耐藥率分別為2%、7%、9%、15%、20%;耐藥率較高的5種藥依次為：美羅培南、左氧氟沙星、加替沙星、米諾環(huán)素、復方新諾明,耐藥率分別為：85%、79%、73%、70%、43%。莫西沙星、頭孢西汀、亞胺培南、妥布霉素的耐藥率居中。氯法齊明也有較低的MIC。3、28株菌(19株膿腫分枝桿菌、9株馬賽分枝桿菌)的聯(lián)合藥敏結果顯示：克拉霉素+莫西沙星對馬賽分枝桿菌協(xié)同效應最好(88.9%),但對膿腫分枝桿菌協(xié)同效應最差(5.2%)。不論菌種,利奈唑胺+阿米卡星、替加環(huán)素+莫西沙星的協(xié)同效應較好,分別為42.9%、57.1%。4、75株膿腫分枝桿菌中,克拉霉素誘導耐藥株51株,占68%；敏感株19株,占25.4%。25株馬賽分枝桿菌無克拉霉素誘導耐藥,敏感株21株,占84%。兩者有顯著性差異；9株克拉霉素獲得性耐藥菌株中,rrl突變的菌株6株,突變率66.7%;所有的膿腫分枝桿菌erm(41)序列完整,所有的馬賽分枝桿菌,erm(41)序列有短缺;75株膿腫分枝桿菌,T28序列型菌株57株、C28序列型菌株18株。25株馬賽分枝桿菌皆為T28序列型。5、VNTR各位點有明顯基因多態(tài)性,分辨率指數為0.996,聚類分析呈3個基因群。結論MABC為我國較為常見的NTM,耐藥率高,可用藥物有限,治療困難的主要菌種為膿腫分枝桿菌,根本的原因在于克拉霉素誘導耐藥。準確的菌種鑒定、可靠的藥敏試驗對指導MABC肺病的臨床治療有重要意義。
【學位單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R446.5


本文編號：2822761