本文關(guān)鍵詞：基于多糖接枝聚天冬氨酸構(gòu)建新型可降解基因載體　出處：《北京化工大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：基因治療(Gene therap y)在治療先天基因缺陷以及獲得性疾病方面展現(xiàn)出巨大的潛力�；蛑委熞蕾囉诎踩咝У幕蜉d體,基因載體通常分為病毒性載體和非病毒性載體兩大類。兩者相比,非病毒性基因載體無傳染性,載體容量大,結(jié)構(gòu)容易控制,適合大規(guī)模生產(chǎn),毒性低、免疫反應(yīng)低,但是現(xiàn)有的基因載體轉(zhuǎn)染效率還不夠理想。因此,發(fā)展安全高效的非病毒性載體仍面臨著挑戰(zhàn)。天然多糖可再生,生物相容性良好,基于多糖構(gòu)建基因載體是設(shè)計安全高效載體的一種有效手段。聚天冬氨酸(Poly (aspartic acid))毒性低,生物相容性好,易生物降解,是制備基因載體的理想材料。本文研究內(nèi)容如下：1、我們首先以環(huán)糊精(Cyclodextrin, CD)、葡聚糖(Dextran)和殼聚糖(Chitosan, CS)為代表探究了一種多糖接枝聚天冬氨酸的普適性方法。以乙二胺(Ethylene diamine, ED)修飾的CD和Dextran以及本身含有-NH2的CS為引發(fā)劑,引發(fā)單體天冬氨酸-p-芐酯-N-羰基內(nèi)酸酐(BLA-NCA)的開環(huán)聚合反應(yīng)得到多糖接枝聚天冬氨酸芐酯聚合物(Polysaccharide-PBLA),再通過ED與Polysaccharide-PBLA上芐基的胺解反應(yīng)構(gòu)建了一系列基因載體(Polysaccharide-PAsp-ED)。通過降解,細(xì)胞毒性,海腎熒光素酶等實驗證明Polysaccharide-PAsp-ED具有良好的降解性,較低的毒性,尤其是基于殼聚糖的基因載體具有較優(yōu)異的轉(zhuǎn)染效率。2、為進一步提高基因載體的轉(zhuǎn)染效率,構(gòu)建具有靶向性的基因載體,我們又進行了下面的課題。在CS上引入了CD,形成CS-CD多糖骨架,以通過ED修飾的CS-CD為引發(fā)劑,引發(fā)單體BLA-NCA的開環(huán)聚合反應(yīng),得到CS-CD-PBLA,通過與ED的胺解反應(yīng),得到陽離子聚合物CS-CD-PAsp-ED (CCPE)。通過接有葉酸(Folic acid, FA)的金剛烷胺(Adamantanamine, Ad)與CD空腔之間的自組裝賦予陽離子聚合物靶向性(CCPE-FA)。并且將CCPE和C CPE-FA聚合物通過layer-by-layer方式包裹DNA形成靶向性三元復(fù)合物。實驗結(jié)果表明,在具有葉酸靶向的Hela、C6細(xì)胞系中靶向性三元復(fù)合物具有較高的轉(zhuǎn)染效率以及顯著靶向性。
[Abstract]:Gene therapy (Gene therap Y) shows great potential in the treatment of congenital gene defects and acquired diseases. Gene therapy relies on safe and efficient gene vectors. Gene vectors are usually divided into viral vectors and non-viral vectors. Compared with the two vectors, non-viral gene vectors are non-infectious, the vector capacity is large, the structure is easy to control, suitable for mass production, low toxicity. The immune response is low, but the transfection efficiency of the existing gene vectors is not ideal. Therefore, the development of safe and efficient non-viral vectors is still facing challenges. Natural polysaccharides can be regenerated and have good biocompatibility. The construction of gene vector based on polysaccharide is an effective way to design a safe and efficient vector. Poly aspartic acido) has low toxicity and good biocompatibility. It is an ideal material for the preparation of gene vectors. In this paper, we use cyclodextrin Cyclodextrin (CDCD) as follows. Dextranan and chitosan. A universal method for grafting polyaspartic acid with Polysaccharide was studied. Ethylenediamine ethylene diamine was used. D) modified CD and Dextran and CS containing -NH2 as initiators. Poly (benzyl aspartate) was grafted by the ring-opening polymerization of the monomer aspartic acid -p-benzyl ester -N-carbonyl intraanhydride (BLA-NCA). Polysaccharide-PBLAs. A series of gene vectors were constructed by the amination reaction of Ed with benzyl on Polysaccharide-PBLA. By degradation. Cytotoxicity, sea kidney luciferase and other experiments proved that Polysaccharide-PAsp-ED has good degradability and low toxicity. Especially, chitosan based gene vector has excellent transfection efficiency. In order to further improve the transfection efficiency of gene vector, construction of targeted gene vector. We also carried out the following tasks: the introduction of CDS on CS to form a CS-CD polysaccharide skeleton with CS-CD modified by Ed as initiator. The ring-opening polymerization of monomer BLA-NCA was initiated to obtain CS-CD-PBLA.Through the amination reaction with Ed, CS-CD-PBLAwas obtained. The cationic polymer CS-CD-PAsp-ED was prepared by grafting folate Folic acid. The amantanamine of amantanamine. Self-assembly between Adand and CD cavity endows CCPE-FAA with cationic polymer targeting property. The CCPE and C CPE-FA polymers were encapsulated with DNA by layer-by-layer to form targeted ternary complexes. The targeting ternary complexes have high transfection efficiency and significant targeting in Hela- C6 cell lines with folic acid targeting.
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R450;R318.08

【共引文獻】

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本文編號：1412653