N6-甲基腺苷（m6A）,是一種動態(tài)的可逆的RNA轉(zhuǎn)錄后修飾。它是由甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物進(jìn)行催化安裝,可以被RNA去甲基化酶清除,并被含YTH結(jié)構(gòu)域的“讀者”蛋白識別并進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。METTL3是第一個被鑒定出來的甲基轉(zhuǎn)移酶,做為m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的主要催化組成部分,從酵母到人,在真核生物中高度保守。METTL3在細(xì)胞增殖、癌癥發(fā)生、細(xì)胞遷移與侵襲、干細(xì)胞分化和生存能力等多種生物進(jìn)程中發(fā)揮著重要的作用。目前,METTL3在正常心肌細(xì)胞中的作用研究尚無報道。本研究結(jié)合NCBI GENE數(shù)據(jù)庫中METTL3在人正常組織中的HPA RNA-seq結(jié)果,收集不同時期的小鼠心臟組織進(jìn)行Western Blot實(shí)驗(yàn),檢測METTL3蛋白在不同時期小鼠心臟組織中的表達(dá),結(jié)果表明METTL3在人和小鼠心臟組織中有較高表達(dá)。我們在已公布的HEK293T細(xì)胞的m⁶A-seq數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)Tbx3、Tbx2、Yap1、Nkx2.5、Hand2、Mef2a這六個在心臟組織中發(fā)揮著重要作用的基因均呈現(xiàn)出較高的甲基化富集程度。針對上述6個可能被甲基化的基因,在正常及敲降METTL3后的心肌細(xì)胞... 

【文章來源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

METTL3在心臟組織中有較高的表達(dá)

有研究通過RNA m6A甲基化測序,發(fā)現(xiàn)在健康小鼠和人的心臟組織中,大約有四分之一的轉(zhuǎn)錄本中均呈現(xiàn)出m6A甲基化狀態(tài)[64]。在Kate D.Meyer等人的研究中,Me RIP-seq鑒定HEK293T細(xì)胞中5,768個基因編碼的RNA,其中3,259個基因的轉(zhuǎn)錄本均呈現(xiàn)甲基化[7],其中在心臟組織中發(fā)揮重要功能的Tbx3、Tbx2、Yap1、Nkx2.5、Hand2、Mef2a基因表現(xiàn)為較高的甲基化富集程度。針對這六個可能被甲基化的基因,我們結(jié)合基因RNA的序列對m6A的發(fā)生位點(diǎn)進(jìn)行了一個預(yù)測,發(fā)現(xiàn)在上述六個基因的序列上均存在著m6A甲基化的發(fā)生基序。通過對正常H9C2大鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行me RIP-q PCR實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證上述六個基因轉(zhuǎn)錄本m6A的富集狀態(tài)。結(jié)果如圖3.2.1所示,與對照m RNA非m6A甲基化的基因Fibrilarin、Hprt1相比,上述六個基因Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a的m RNA均呈現(xiàn)m6A甲基化狀態(tài)。METTL3與METTL14等至少五種“Writers”蛋白組成甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物,負(fù)責(zé)安裝m6A甲基化。在H9C2細(xì)胞中使用si RNA瞬時敲降METTL3,檢測細(xì)胞中Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六種基因的轉(zhuǎn)錄本m6A甲基化富集狀態(tài)的改變。結(jié)果如圖3.2.2所示,與CTL對照組相比,敲降METTL3使Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六種基因m RNA m6A甲基化富集減少。以上數(shù)據(jù)表明METTL3調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄本m6A的水平。

METTL3與METTL14等至少五種“Writers”蛋白組成甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物,負(fù)責(zé)安裝m6A甲基化。在H9C2細(xì)胞中使用si RNA瞬時敲降METTL3,檢測細(xì)胞中Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六種基因的轉(zhuǎn)錄本m6A甲基化富集狀態(tài)的改變。結(jié)果如圖3.2.2所示,與CTL對照組相比,敲降METTL3使Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六種基因m RNA m6A甲基化富集減少。以上數(shù)據(jù)表明METTL3調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄本m6A的水平。3.3 甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3促進(jìn)心肌細(xì)胞的增殖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]RNA methylation regulates hematopoietic stem and progenitor cell development[J]. Jason Ear,Shuo Lin.  Journal of Genetics and Genomics. 2017(10)
[2]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang.  Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)



本文編號：3259071