鉛是一種天然存在于地下深處的重金屬,在過去的幾千年里,由于人類的活動(dòng),使環(huán)境中的鉛含量急劇升高。土壤和大氣中的鉛會(huì)通過雨水的沉降和沖刷進(jìn)入水環(huán)境,污染水體并在水生動(dòng)物體內(nèi)積累,進(jìn)而通過食物鏈轉(zhuǎn)移至人體。鉛會(huì)隨時(shí)間在機(jī)體不同組織中積累且不易降解,對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、免疫、血液、生殖系統(tǒng)以及胃腸道都有不良影響,危害極大。由于人體接觸鉛的途徑主要是被污染的水、土壤以及食物,因此阻斷胃腸道中的鉛吸收是一種合理的預(yù)防策略。隨著分子展示技術(shù)的發(fā)展,將重金屬離子結(jié)合蛋白展示在工程菌表面,被認(rèn)為是去除環(huán)境中重金屬污染的一種有前途和可持續(xù)的途徑,已成為環(huán)境領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一,但關(guān)于工程菌在生物體內(nèi)吸附重金屬的研究卻很少。本課題利用細(xì)胞展示技術(shù),選用具有Pb²⁺特異性吸附的蛋白PbBD,并通過冰晶核蛋白INP將其錨定在大腸桿菌BL21表面,以研究工程菌E.coli PbBD對(duì)鉛暴露下的草魚各組織中鉛含量的降低作用以及對(duì)腸道菌群的修復(fù)作用。草魚被隨機(jī)分為四組(對(duì)照組,Pb組,Pb+PbBD組和PbBD組),Pb²⁺通過添加在魚食中(5mg/kg草魚)給與,喂食7周,工程菌...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 前言
    1.1 鉛的來源及危害
        1.1.1 環(huán)境中鉛的來源
        1.1.2 鉛暴露引起的危害
        1.1.3 鉛對(duì)魚類的污染
    1.2 細(xì)胞表面展示技術(shù)
        1.2.1 細(xì)胞表面展示技術(shù)概述
        1.2.2 冰晶核蛋白
        1.2.3 鉛特異性結(jié)合蛋白
    1.3 腸道修復(fù)法
        1.3.1 腸道微生物
        1.3.2 腸道微生物穩(wěn)態(tài)
        1.3.3 腸道修復(fù)
    1.4 本研究的目的
第二章 材料與方法
    2.1 表面展示體系的構(gòu)建
        2.1.1 目的片段的連接
        2.1.2 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.1.3 工程菌的培養(yǎng)
    2.2 對(duì)工程菌E.coli PbBD的研究
        2.2.1 工程菌E.coli PbBD的吸附效果檢測(cè)
        2.2.2 利用Western blot檢測(cè)蛋白的表達(dá)
        2.2.3 透射電鏡(TEM)分析
    2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.3.1 制備含Pb²⁺及E.coli PbBD的飼料
        2.3.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.3.3 Pb²⁺水平檢測(cè)
        2.3.4 生理生化指標(biāo)測(cè)定
        2.3.5 石蠟切片染色
        2.3.6 工程菌的定殖檢測(cè)
        2.3.7 草魚糞便16SrDNA測(cè)序
    2.4 微生物多樣性測(cè)序結(jié)果分析
        2.4.1 測(cè)序數(shù)據(jù)分析
        2.4.2 OTU聚類和物種注釋
        2.4.3 Alpha多樣性,Beta多樣性和組間差異顯著性分析
第三章 結(jié)果
    3.1 工程菌的研究結(jié)果
        3.1.1 Pb²⁺吸附效果及特異性
        3.1.2 融合蛋白的表達(dá)
        3.1.3 透射電鏡結(jié)果分析
    3.2 草魚的研究結(jié)果
        3.2.1 組織中的Pb²⁺水平
        3.2.2 生化標(biāo)記物的變化
        3.2.3 腸道石蠟切片染色分析
        3.2.4 工程菌在腸道內(nèi)的定殖情況
        3.2.5 草魚糞便16SrDNA測(cè)序結(jié)果及分析
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
在校期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3842495