本文關(guān)鍵詞：煙曲霉素在蜂蜜中的殘留變化規(guī)律研究

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【摘要】：近些年蜜蜂微孢子蟲,尤其東方蜜蜂微孢子蟲在全世界流行,是蜜蜂爬蜂綜合癥的主要病因之一,給蜂產(chǎn)業(yè)造成了巨大的損失。煙曲霉素被認(rèn)為是治療蜜蜂微孢子蟲病的高效藥,然而由于知識(shí)產(chǎn)權(quán)、貿(mào)易保護(hù)等因素,蜂用煙曲霉素在我國(guó)還沒有授權(quán)使用。目前我國(guó)蜂農(nóng)主要依靠甲硝唑防治蜜蜂微孢子蟲,導(dǎo)致其在蜂產(chǎn)品殘留,給蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全造成了巨大的隱患。課題組已經(jīng)形成了煙曲霉素的新型生物發(fā)酵方法,有望開發(fā)煙曲霉素制劑用于蜜蜂微孢子蟲病防治。在推廣應(yīng)用之前,有必要開展煙曲霉素在蜂產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的殘留代謝規(guī)律及蜂蜜加工過程中降解規(guī)律研究,為煙曲霉素使用量、休藥期、最大殘留限量的制定和規(guī)范煙曲霉素使用方法提供有力的數(shù)據(jù)支持。本文分為三個(gè)部分:一、建立并優(yōu)化了蜂蜜中煙曲霉素的HPLC-MS/MS分析方法。在前人研究的基礎(chǔ)上對(duì)蜂蜜中的煙曲霉素的前處理方法和HPLC-MS/MS的分析方法分別進(jìn)行了優(yōu)化,確定蜂蜜樣品通過Oasis HLB固相萃取小柱凈化和提取,使用HPLC-MS/MS測(cè)定樣品中的煙曲霉素含量。通過方法學(xué)驗(yàn)證:該方法的檢出限為2μg/kg,在線性范圍1-1000μg/L,R2為0.9992,在三個(gè)添加水平下,回收率為72.1%-92.1%,批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.7%-10.3%,批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.2%-11.1%。方法簡(jiǎn)單、快速,方法的檢出限、回收率、精密度以及準(zhǔn)確度均滿足蜂蜜中煙曲霉素殘留分析的要求。二、煙曲霉素在巢脾內(nèi)蜂蜜中的殘留代謝規(guī)律。對(duì)比了不同飼喂?jié)舛群筒煌幚矸绞綄?duì)蜂蜜中煙曲霉素殘留的影響。結(jié)果表明,煙曲霉素殘留量在喂藥后第3 d達(dá)到峰值,之后呈下降趨勢(shì);飼喂后第55 d時(shí),低濃度飼喂組(200 mg/群)蜂蜜中殘留量為91±5.2μg/kg(搖蜜處理組為40±4.6μg/kg),高濃度飼喂組(285 mg/群)蜂蜜中殘留量為128±6.2μg/kg(搖蜜處理組為43±8.6μg/kg)。蜂蜜中煙曲霉素會(huì)在蜂巢內(nèi)迅速降解和被新采進(jìn)的蜂蜜的稀釋;但在第7 d就搖出所有存蜜的搖蜜組,后續(xù)蜂蜜中依然存在較高濃度的煙曲霉素殘留,說明蜂群內(nèi)蠟質(zhì)巢脾對(duì)煙曲霉素具有吸附作用并能反滲透到蜂蜜中。盡管藥物飼喂后55d,蜂巢內(nèi)蜂蜜的藥物殘留量都顯著降低,但均高于歐盟等國(guó)10μg/kg的限量要求。因此,養(yǎng)蜂生產(chǎn)中應(yīng)合理使用煙曲霉素并嚴(yán)格執(zhí)行休藥期,采取定時(shí)更換巢脾等措施。三、煙曲霉素在模擬加工條件下的變化規(guī)律。探究48 h內(nèi)光照和溫度對(duì)蜂蜜中煙曲霉素降解的影響。結(jié)果表明,在不同處理組,0-12 h蜂蜜中煙曲霉素含量均快速下降(其中1-3 h降解相對(duì)緩慢),12 h-48 h下降速度明顯減慢。蜂蜜中煙曲霉素在70℃、有光條件下降解最快,3h-6 h即可下降到10μg/kg以下,18 h后低于檢測(cè)限(2μg/kg);在60℃、有光條件下經(jīng)過18 h降解,也可達(dá)到10μg/kg以下;而在避光和溫度較低時(shí)降解緩慢(25℃避光條件下降約50%)。說明煙曲霉素的降解受光照和溫度的共同影響,溫度越高,降解越快,光照促進(jìn)煙曲霉素降解。因而即使原料蜜中含有超標(biāo)的煙曲霉素也可以在后期的蜂蜜融結(jié)晶過程中降解,使其符合標(biāo)準(zhǔn)。
【關(guān)鍵詞】：煙曲霉素 蜜蜂 微孢子蟲 殘留降解規(guī)律
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O657.63;S896.1
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-13
• 第一章 引言13-24
• 1.1 我國(guó)養(yǎng)蜂業(yè)獸藥使用現(xiàn)狀13-14
• 1.1.1 抗生素濫用對(duì)蜜蜂和消費(fèi)者健康的威脅13
• 1.1.2 蜂產(chǎn)品獸藥殘留對(duì)我國(guó)蜂產(chǎn)業(yè)的影響13-14
• 1.1.3 蜂產(chǎn)品獸藥殘留超標(biāo)的原因14
• 1.1.4 甲硝唑超標(biāo)與蜜蜂微孢子蟲病14
• 1.2 蜜蜂微孢子蟲病概述14-16
• 1.2.1 蜜蜂微孢子蟲病的病原體及發(fā)病特征14-15
• 1.2.3 蜜蜂微孢子蟲的發(fā)現(xiàn)與分布15
• 1.2.4 蜜蜂微孢子蟲與CCD15-16
• 1.2.5 蜜蜂微孢子蟲與爬蜂病16
• 1.2.6 蜜蜂微孢子蟲與蜜蜂越冬及春繁16
• 1.2.7 蜜蜂微孢子蟲的防治16
• 1.3 煙曲霉素概述16-21
• 1.3.1 煙曲霉素的發(fā)現(xiàn)16-17
• 1.3.2 煙曲霉素的結(jié)構(gòu)與生物活性17-18
• 1.3.3 煙曲霉素作用機(jī)理及其應(yīng)用18-20
• 1.3.4 煙曲霉素穩(wěn)定性及其殘留分析方法20-21
• 1.3.5 各個(gè)國(guó)家對(duì)煙曲霉素授權(quán)使用情況21
• 1.4 研究目的及意義21-22
• 1.5 研究?jī)?nèi)容及技術(shù)路線22-24
• 1.5.1 蜂蜜中煙曲霉素檢測(cè)方法的優(yōu)化22
• 1.5.2 煙曲霉素在蜂巢內(nèi)蜂蜜中殘留規(guī)律研究22
• 1.5.3 煙曲霉素在蜂蜜的加工過程中的降解規(guī)律研究22-24
• 第二章 蜂蜜中煙曲霉素殘留的分析方法的優(yōu)化24-32
• 2.1 材料、試劑與儀器24-25
• 2.1.1 主要材料及試劑24
• 2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品24
• 2.1.3 儀器與設(shè)備24-25
• 2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備25
• 2.3 色譜條件和質(zhì)譜條件25
• 2.3.1 色譜條件25
• 2.3.2 質(zhì)譜條件25
• 2.4 樣品處理方法25-26
• 2.5 結(jié)果和討論26-31
• 2.5.1 儀器條件的的優(yōu)化26-28
• 2.5.2 提取方法的優(yōu)化28-30
• 2.5.4 方法評(píng)價(jià)30-31
• 2.6 小結(jié)31-32
• 第三章 煙曲霉素在蜂巢內(nèi)蜂蜜中的殘留變化規(guī)律研究32-42
• 3.1 材料、試劑與儀器32-33
• 3.1.1 主要材料及試劑32-33
• 3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品33
• 3.1.3 儀器與設(shè)備33
• 3.2 試驗(yàn)樣品制備33-34
• 3.2.1 試驗(yàn)材料準(zhǔn)備33
• 3.2.2 飼喂與取樣33-34
• 3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備34
• 3.4 色譜條件與質(zhì)譜條件34-35
• 3.4.1 色譜條件34-35
• 3.4.2 質(zhì)譜條件35
• 3.5 樣品處理方法35
• 3.6 結(jié)果與討論35-41
• 3.6.1 蜂巢內(nèi)蜂蜜中煙曲霉素殘留量隨時(shí)間的變化規(guī)律35-36
• 3.6.2 不同喂藥濃度對(duì)煙曲霉素在蜂蜜中殘留的影響36-38
• 3.6.3 蜂巢繼箱中巢脾位置對(duì)其中蜂蜜煙曲霉素殘留量的影響38-39
• 3.6.4 巢脾吸附與反滲作用對(duì)蜂蜜中煙曲霉素殘留的影響39-41
• 3.7 小結(jié)41-42
• 第四章 煙曲霉素在蜂蜜加工過程中的降解規(guī)律研究42-51
• 4.1 材料、試劑與儀器42-43
• 4.1.1 主要材料及試劑42-43
• 4.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品43
• 4.1.3 儀器與設(shè)備43
• 4.2 試驗(yàn)樣品的制備43-44
• 4.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備44
• 4.4 色譜條件和質(zhì)譜條件44
• 4.4.1 色譜條件44
• 4.4.2 質(zhì)譜條件44
• 4.5 樣品處理方法44
• 4.6 結(jié)果與討論44-50
• 4.6.1 不同溫度對(duì)蜂蜜中煙曲霉素的降解的影響46-48
• 4.6.2 不同光照條件下煙曲霉素在蜂蜜中的降解規(guī)律48-50
• 4.7 小結(jié)50-51
• 第五章 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 致謝57-58
• 作者簡(jiǎn)歷58

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本文編號(hào)：827078