【摘要】：藥品安全直接關(guān)系人類健康,是重大的民生和公共安全問題。注射劑作用迅速,是臨床應(yīng)用最廣泛、最重要的劑型之一,目前已大量入選國家基本藥物目錄。近年來,由于注射劑生產(chǎn)工藝以及滅菌工藝的不合理性引發(fā)的不良反應(yīng)事件時(shí)有發(fā)生。欣弗注射液不良反應(yīng)、刺五加注射液不良反應(yīng)等典型藥害事件,使患者對注射劑的安全性產(chǎn)生了質(zhì)疑。藥品中存在的各種雜質(zhì)特別是毒性雜質(zhì)與這些不良反應(yīng)的發(fā)生密切相關(guān)。鑒于注射劑原料合成工藝、處方組成以及滅菌工藝的復(fù)雜性,雜質(zhì)來源各異、種類眾多、成份復(fù)雜,而僅依靠傳統(tǒng)單一色譜分析方法很難對雜質(zhì)信息作出準(zhǔn)確、客觀、完整的判斷。因此,亟需建立一套全面、系統(tǒng)、準(zhǔn)確的注射劑雜質(zhì)分析方法。目前,藥物雜質(zhì)研究普遍采用"雜質(zhì)譜控制"理念,雜質(zhì)譜分析技術(shù)是針對藥品中的每一個(gè)雜質(zhì),依據(jù)其生理活性制定相應(yīng)的質(zhì)控限度,即藥品中的所有雜質(zhì)都能被有效的分離,每一個(gè)雜質(zhì)的來源與結(jié)構(gòu)已知,每一個(gè)雜質(zhì)的生理活性清楚,且質(zhì)控分析方法具有良好的粗放性(ruggedness)。涉及的科學(xué)問題可簡單概括為:復(fù)雜體系樣本的分離分析、微量組分的結(jié)構(gòu)分析和微量組分的毒性評價(jià)三方面問題。然而,當(dāng)前多數(shù)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)質(zhì)量控制方法、特定雜質(zhì)和雜質(zhì)的控制限度遠(yuǎn)不能有效控制產(chǎn)品的安全性,亟需進(jìn)一步提升標(biāo)準(zhǔn)。本論文以國家藥品安全"十二五"規(guī)劃為依托,利用雜質(zhì)譜分析技術(shù),通過與其它化學(xué)、生物技術(shù)的交叉結(jié)合,開展從工藝分析、雜質(zhì)篩查到雜質(zhì)定向合成、結(jié)構(gòu)確認(rèn)、分離測定,再到藥理毒性評價(jià)的系列研究,力圖對注射劑中的雜質(zhì)組成以及其毒性、藥效關(guān)系進(jìn)行全面深入地分析,為提高注射劑的質(zhì)量及臨床用藥安全提供依據(jù)。本論文研究和發(fā)展了傳統(tǒng)的雜質(zhì)譜分析技術(shù),以液相分離技術(shù)為基礎(chǔ),建立和優(yōu)化高效液相色譜方法,有效結(jié)合二維液相串聯(lián)四級桿軌道阱質(zhì)譜(2D LC-QE MS)、Mass Frontier化合物結(jié)構(gòu)解析技術(shù),將之應(yīng)用于注射劑的雜質(zhì)分離和分析中,采用Derek軟件和Sarah軟件并結(jié)合Ames試驗(yàn)方法對新發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)的生物特性,尤其是基因毒性開展了進(jìn)一步的研究,為多種注射劑雜質(zhì)的國家標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供了依據(jù),同時(shí),也為雜質(zhì)譜分析技術(shù)中關(guān)鍵技術(shù)的發(fā)展和完善提供了新思路、新方法,為化學(xué)藥品的雜質(zhì)研究提供了全新的分析技術(shù)方法。第一部分緒論介紹了本研究課題的背景以及雜質(zhì)對藥物安全性的影響,并對雜質(zhì)分析的常規(guī)方法進(jìn)行了總結(jié)分析與概括,綜述了當(dāng)前雜質(zhì)研究現(xiàn)狀及雜質(zhì)譜分析技術(shù)的研究進(jìn)展,闡述了本論文的研究意義和通用方法思路。第二部分米力農(nóng)注射液的雜質(zhì)研究以國家藥品抽驗(yàn)平臺為依托,通過比較分析全國范圍內(nèi)米力農(nóng)注射液質(zhì)量差異,結(jié)合米力農(nóng)注射液的生產(chǎn)工藝及影響因素試驗(yàn),采用新建立的液相色譜方法全面分析米力農(nóng)注射液的雜質(zhì),建立了米力農(nóng)注射液的雜質(zhì)譜;采用液相制備、LC-MS、化學(xué)合成以及1HMR和MS等方法對雜質(zhì)譜中的主要雜質(zhì)進(jìn)行定性,分離確證了 2個(gè)雜質(zhì),其中雜質(zhì)B為全新結(jié)構(gòu)化合物,并采用Derek軟件和Sarah軟件對新發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)的生物特性尤其是其基因毒性進(jìn)行了評價(jià),雜質(zhì)B無遺傳毒性,但存在皮膚刺激性,與米力農(nóng)注射液臨床不良反應(yīng)中的過敏反應(yīng)、皮疹等不良反應(yīng)相關(guān),為降低這些不良反應(yīng)的發(fā)生,將雜質(zhì)B作為風(fēng)險(xiǎn)雜質(zhì)進(jìn)行控制,并根據(jù)ICH雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則并結(jié)合現(xiàn)有的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)修訂了米力農(nóng)及米力農(nóng)注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),已被《中國藥典》2015年版收錄為法定標(biāo)準(zhǔn),用于全國米力農(nóng)注射液的質(zhì)量控制。同時(shí),雜質(zhì)B已獲得國家發(fā)明專利授權(quán),研究成果已被中國食品藥品檢定研究院應(yīng)用,發(fā)行的雜質(zhì)B對照品用于全國米力農(nóng)注射液的質(zhì)量控制。第三部分氨酪酸注射液的雜質(zhì)研究本研究采用雜質(zhì)譜分析技術(shù)對氨酪酸及氨酪酸注射液中的雜質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)的分析與研究,通過制備工藝的比較分析并結(jié)合國內(nèi)不同地域來源樣品的測定結(jié)果,確定了氨酪酸樣品中存在的雜質(zhì),進(jìn)而采用2D-LC-QE MS和Mass Frontier推測出雜質(zhì)的結(jié)構(gòu),采用化學(xué)合成及UV、IR、MS、1H-NMR及LC-MS對未知雜質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證和一致性確認(rèn)。雜質(zhì)II作為氨酪酸雜質(zhì)采用創(chuàng)新性的合成方法進(jìn)行制備,解決了氨酪酸質(zhì)量控制的關(guān)鍵性問題,目前該合成工藝已獲得國家發(fā)明專利授權(quán),專利號ZL 2015 1 0077458.1。采用Derek軟件和Sarah軟件對雜質(zhì)II的生物特性,尤其是基因毒性進(jìn)行了評價(jià),基于統(tǒng)計(jì)的QSAR模型的Sarah軟件結(jié)果呈疑似陽性(17%);通過Ames試驗(yàn)對雜質(zhì)II遺傳毒性進(jìn)行了深入的研究,證實(shí)雜質(zhì)II無遺傳毒性,但因雜質(zhì)II在氨酪酸注射液中表觀含量較高,且為GABA二聚體結(jié)構(gòu),可能是引起頭暈、失眠等中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)的主要原因,因此,將雜質(zhì)II作為風(fēng)險(xiǎn)雜質(zhì)進(jìn)行了控制。提出了氨酪酸及氨酪酸注射液雜質(zhì)檢查的國家標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)已被國家藥典委員會采納,同時(shí)研究成果還被東北制藥集團(tuán)有限公司應(yīng)用于日常的質(zhì)量控制,使我國氨酪酸及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)處于國際領(lǐng)先水平。第四部分注射用BC-02的雜質(zhì)研究BC-02作為一種全新的抗腫瘤藥物,雜質(zhì)研究方法未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究從雜質(zhì)分離分析方法的篩選建立、雜質(zhì)的定性分析以及雜質(zhì)的毒性評價(jià)三個(gè)關(guān)鍵的技術(shù)層面,對創(chuàng)新藥物BC-02及其制劑的雜質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)的分析與研究。探索研究了一種適合于BC-02及其相關(guān)雜質(zhì)分離分析的液相色譜方法,建立了能夠全面反映BC-02相關(guān)工藝與影響因素的雜質(zhì)譜,建立的BC-02雜質(zhì)分析方法已獲得國家知識產(chǎn)權(quán)局的發(fā)明專利授權(quán)(BC-02的液相色譜檢測方法專利號ZL201510077487.8)。采用二維色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜(2D-HPLC-QE plus)和Mass Frontier軟件推測出7個(gè)雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu),采用化學(xué)合成的方法對其中的4個(gè)雜質(zhì)進(jìn)行全合成,采用液相制備的方法對個(gè)雜質(zhì)e、雜質(zhì)f進(jìn)行了制備,通過質(zhì)譜和元素分析方法進(jìn)行了確證。經(jīng)Scifinder化合物庫檢索,雜質(zhì)e和雜質(zhì)f為全新的化合物。采用Derek和Sarah軟件對BC-02的7種雜質(zhì)的遺傳毒性進(jìn)行了評價(jià),除雜質(zhì)g(羥甲基-5Fu)為疑似遺傳毒性外,其余6個(gè)雜質(zhì)的遺傳毒性均為陰性。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),羥甲基5-Fu本身極不穩(wěn)定,且在樣品中未被檢出,不予控制;其他6種雜質(zhì)具有肝毒性、眼毒性、皮膚過敏性等副作用,作為風(fēng)險(xiǎn)雜質(zhì)控制。按照ICH指導(dǎo)原則和國家局CDE的要求,結(jié)合雜質(zhì)譜分析理念的關(guān)鍵技術(shù),提出并制定了 BC-02雜質(zhì)控制的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),使新藥BC-02質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制達(dá)到了國際領(lǐng)先水平,為雜質(zhì)譜分析技術(shù)在新藥研究中的拓展應(yīng)用提供了良好的示范平臺。第五部分總結(jié)與展望對雜質(zhì)譜分析技術(shù)的新發(fā)展和系統(tǒng)分析方法進(jìn)行了總結(jié),該方法可作為化學(xué)藥品雜質(zhì)分析的通用技術(shù)方法;同時(shí)對米力農(nóng)注射液、氨酪酸注射液以及注射用BC-02的雜質(zhì)研究過程和研究成果進(jìn)行了匯總,并對本研究存在的技術(shù)問題和不足進(jìn)行了分析,為進(jìn)一步開展后續(xù)研究工作指明了方向。本論文以分析研究發(fā)現(xiàn)的藥品中潛在雜質(zhì)出發(fā),通過結(jié)合工藝分析與實(shí)驗(yàn)篩查的發(fā)現(xiàn)途徑,采用現(xiàn)代色譜及聯(lián)用技術(shù)的分析手段,以軟件預(yù)測毒性評價(jià)技術(shù)和Ames試驗(yàn)相結(jié)合的生物特性評價(jià)方式,為藥品中雜質(zhì)的發(fā)現(xiàn)、分離和鑒定、測定提供了較為全面、系統(tǒng)的研究思路和方法。并對米力農(nóng)注射液、氨酪酸注射液以及注射用BC-02的雜質(zhì)研究過程和研究成果進(jìn)行了匯總,為進(jìn)一步開展后續(xù)研究工作指明了方向。本論文雜質(zhì)分析通用技術(shù)方法的研究與應(yīng)用,為推動我國化學(xué)藥品內(nèi)在質(zhì)量的提高和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升具有十分重要的意義。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O657.63;TQ460.72
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本文編號：2474257