【摘要】：尼羅羅非魚是我國最重要的養(yǎng)殖魚類之一�！靶录弧蹦崃_羅非魚是在吉富羅非魚的基礎(chǔ)上研發(fā)的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新品種,因具有卓越的生長優(yōu)勢被農(nóng)業(yè)部在全國范圍內(nèi)推廣。本論文對該魚N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的性質(zhì)進行了描述,并研究了外界環(huán)境條件對該酶性質(zhì)的影響。 經(jīng)40%～55%的硫酸銨分級沉淀、DEAE纖維素(DE-32)離子交換層析、Sephadex G-200凝膠過濾層析、DEAE-Sephadex(A-50)層析柱從“新吉富”尼羅羅非魚精巢組織分離純化得到比活力為4100U·mg-1的NAGase,經(jīng)電泳檢測為單一純。該酶的分子量為118.0kD,水解底物對-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)的最適pH和最適溫度分別為pH5.7和55℃。37℃條件下該酶的pH穩(wěn)定范圍為3.3-8.1,當溫度高于45℃時該酶開始失活。該酶水解底物pNP-NAG遵循米氏方程,米氏常數(shù)(Km)和最大反應(yīng)速度(Vm)分別為0.67mm01·L-1和23.26μm01-L-1·min-1。 金屬離子對“新吉富”尼羅羅非魚NAGase的活力影響實驗表明：Li+,Na+,K+,Mg2+和Ca2+等金屬離子對該酶活力基本沒有影響,重金屬離子對該酶的抑制強弱順序為Hg2+Zn2+Cu2+Pb2+Mn2+.Cu2+和Zn2+對該酶抑制的IC50分別為1.23和0.28mm01·L-1,其抑制機理均為可逆抑制,其中Cu2+的抑制類型為非競爭型,Zn2+的抑制類型為競爭型。這兩種金屬離子均能明顯影響該酶的pH穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性,也都能改變酶的構(gòu)象從而影響到其內(nèi)源熒光的發(fā)射。 Hg2+對該酶呈強烈的不可逆抑制作用,IC50值僅為2.70μm01·L-1,而且Hg2+也能明顯縮短該酶的熱穩(wěn)定和pH穩(wěn)定范圍。進一步通過底物反應(yīng)的動力學(xué)方法研究了Hg2+對該酶的抑制動力學(xué),建立了相應(yīng)的動力學(xué)模型,經(jīng)測定Hg2+對自由酶和酶與底物復(fù)合物的微觀抑制速度常數(shù)k1和k’2分別為4.42×10-4mmol·L-1.s.-1and7.06×10-5mm01·L-1·s-1.說明在Hg2+的抑制作用下,底物的存在對于該酶有明顯的保護作用。 本文還測定了羅非魚養(yǎng)殖過程中的一些常用藥物對該酶活力的影響,在測定濃度范圍內(nèi)內(nèi)服藥物對羅非魚NAGase的活力影響不大,鹽酸強力霉素卻對該酶有強烈的激活作用。而常用消毒劑強氯精和甲醛則對酶活力有明顯的抑制作用,其IC50值分別為0.25mg.mL-1和3.2%。強氯精對該酶呈反競爭性可逆抑制作用,而甲醛呈競爭性可逆抑制。兩種消毒劑均能明顯縮短該酶的熱穩(wěn)定和pH穩(wěn)定性。進一步建立了該酶在這兩種消毒劑中的失活動力學(xué)模型,測定了其抑制速度常數(shù)。 用嗜水氣單胞菌322A腹腔感染健康“新吉富”尼羅羅非魚,測定其內(nèi)臟和血清NAGase比活力的變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)感染后第1,3,5,9,13,17,21d注射組的肝臟NAGase比活力明顯高于對照組,呈極顯著性差異(P0.01)；腎臟NAGase比活力只在第1d和第3d極顯著性高于對照組(P0.01)；脾臟NAGase比活力與對照組沒有顯著性差異；血清中沒有檢測到NAGase活力。
[Abstract]:Nile tilapia is one of the most important cultured fish in China. "New Gifu" Nile tilapia is a new species with independent intellectual property rights developed on the basis of Geoffrey tilapia. It has been promoted by the Ministry of Agriculture all over the country because of its excellent growth advantage. The properties of N-acetyl-尾-D-glucosaminidase (NAGase) were described in this paper, and the effects of environmental conditions on the properties of Nacetyl-尾-D-glucosaminidase were studied. DEAE cellulose (DE-32) ion exchange chromatography and Sephadex G ~ (2 +) 200 gel filtration chromatography were carried out by precipitation with ammonium sulfate of 50% and ammonium sulfate of 55%. The NAGase, with a specific activity of 4100U / mg-1 was isolated and purified from the testis of Nile tilapia (Tilapia niloticus) by DEAE-Sephadex (Am _ (50) column, which was isolated and purified from the testis of Nilochromis niloticus. The molecular weight of the enzyme is 118.0 KD. The optimal pH and temperature of hydrolysis substrate p-nitrobenzene-N-acetyl-尾-D-glucosaminoglycoside (pNP-NAG) were pH5.7 and 55 鈩，

本文編號：2461332