【摘要】：高尿酸血癥是嘌呤代謝紊亂導(dǎo)致體內(nèi)尿酸過多或(和)尿酸排泄減少所引起的一組異質(zhì)性疾病,可引起痛風(fēng),引發(fā)心血管疾病、代謝綜合征及慢性腎臟病等一系列危害人類身心健康的疾病。高尿酸血癥主要通過兩條途徑來控制,一是降低尿酸生成,二是促進(jìn)尿酸排泄,黃嘌呤氧化酶是尿酸生成關(guān)鍵酶,能催化次黃嘌呤和黃嘌呤生成尿酸,因此是降低尿酸藥物的作用靶點(diǎn),研制高效、低毒和作用機(jī)制明確的抗高尿酸血癥藥物已成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。經(jīng)課題組前期研究發(fā)現(xiàn),虎杖提取物具有一定的抑制活性,對其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制進(jìn)行研究后,首次發(fā)現(xiàn)決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷可顯著地作用于黃嘌呤氧化酶靶點(diǎn)發(fā)揮抗高尿酸血癥作用,同時(shí)發(fā)現(xiàn)大黃素-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷具有潛在抑制黃嘌呤氧化酶作用,虎杖苷和白藜蘆醇通過促進(jìn)尿酸排泄發(fā)揮降尿酸作用。在前期研究工作的基礎(chǔ)上,本研究在明確物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制的基礎(chǔ)上制備虎杖抗高尿酸血癥有效成分群,為高尿酸血癥的治療提供新思路。根據(jù)新藥管理辦法的要求,需要對有效成分進(jìn)行含量測定,必須有各個(gè)組分的對照品,經(jīng)市場調(diào)研發(fā)現(xiàn)目前決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對照品是難以買到的,因此對這兩種對照品進(jìn)行了制備,以用于工藝的研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。綜合運(yùn)用大孔吸附樹脂柱色譜、十八烷基硅烷鍵合硅膠柱色譜、高效液相色譜及高速逆流色譜等手段從虎杖50%大孔洗脫部位制得兩個(gè)對照品,采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器(HPLC-DAD)法對其進(jìn)行了純度測定,經(jīng)不同色譜柱和洗脫梯度檢測結(jié)果表明各對照品均為一個(gè)主色譜峰,均未出現(xiàn)異常峰;以不加校正因子的主成分自身對照法測定各對照品的純度,質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%,符合含量測定用對照品要求。根據(jù)新藥審批管理辦法的規(guī)定,需要對原料、有效部位和制劑分別建立含量的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),在中國藥典中對虎杖藥材的質(zhì)量控制是對虎杖苷與大黃素的水解產(chǎn)物進(jìn)行了測定,這一標(biāo)準(zhǔn)難以滿足虎杖有效成分群新藥研發(fā)的質(zhì)量控制要求,因此建立了虎杖藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),在建立的過程中應(yīng)用了綠色溶劑聚乙二醇作為提取溶劑并對不同產(chǎn)地不同批次虎杖藥材中降尿酸有效成分的含量進(jìn)行了測定。采用微波輔助提取法,對提取溶劑、提取溫度、提取時(shí)間、提取功率等條件對提取的影響進(jìn)行了考察研究,結(jié)果表明,聚乙二醇200濃度為60%,提取溫度為80℃,提取時(shí)間為10 min,提取功率為700 W時(shí)效果最佳,并進(jìn)行了線性關(guān)系、重復(fù)性、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性等方法學(xué)考察,均符合要求。在制備工藝的研究中已確立了抗高尿酸血癥的有效組分,為了最大限度地保留有效成分,得到雜質(zhì)少且純度更高的有效成分群,對大孔樹脂分離工藝的相關(guān)參數(shù)進(jìn)樣了研究。以樹脂的最大吸附量和解吸率為考察指標(biāo),對靜態(tài)吸附與解吸,動(dòng)態(tài)吸附與解吸過程中的重要參數(shù)進(jìn)行了研究,最終得到最佳的分離純化工藝。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)HPD-600樹脂效果較好,其最佳的工藝條件為:裝柱體積60 m L(1 BV),虎杖樣品溶液(虎杖苷、白藜蘆醇、決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素的的質(zhì)量濃度分別為0.7477,0.0688,0.0437,0.2763和0.1343mg·m L-1)上樣量2 BV,上樣流速1 BV·h-1,吸附平衡后先用去離子水(4 BV)和10%乙醇(4 BV)去除部分雜質(zhì),再以1 BV·h-1的流速用90%(10 BV)的乙醇溶液進(jìn)行洗脫,最終得到虎杖降尿酸有效成分群,其含量可由21.46%提高至31.34%,回收率為86.59%。應(yīng)用HPD-600樹脂對虎杖中的降尿酸有效成分群進(jìn)行純化,其工藝穩(wěn)定可行,具有高效、低毒、吸附與解吸性能良好的特點(diǎn),并且應(yīng)用價(jià)值較高。本論文研究結(jié)果為虎杖抗高尿酸血癥藥物研究提供科學(xué)依據(jù),為開發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的創(chuàng)新藥物奠定基礎(chǔ),具有重要的學(xué)術(shù)意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2424892