本文選題：枯草芽孢桿菌 + 黃曲霉毒素�。� 參考：《哈爾濱工業(yè)大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：黃曲霉毒素是一類由真菌代謝產(chǎn)生的有毒化合物，存在于土壤及花生、玉米等農(nóng)作物中，不但對(duì)環(huán)境造成污染，人或動(dòng)物若食用了受黃曲霉毒素污染的食品或飼料后會(huì)導(dǎo)致機(jī)體病變甚至死亡。因此，如何快速有效的抑制黃曲霉毒素對(duì)農(nóng)作物、人畜及環(huán)境的污染是急需解決的問題，也是國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。本研究采用微生物源天然產(chǎn)物中具有抑黃曲霉毒素活性的物質(zhì)作用于易感染農(nóng)產(chǎn)品，，提高農(nóng)產(chǎn)品的防霉抑毒能力，從污染源頭有效阻止霉菌侵染，減少毒素產(chǎn)生，為減少化學(xué)防腐劑對(duì)環(huán)境和人體的危害起到重要作用。 以本實(shí)驗(yàn)室分離獲得的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的枯草芽孢桿菌新菌株Hitwh-B05為主要研究對(duì)象，對(duì)其代謝產(chǎn)生的抑黃曲霉毒素有效成分的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化；從多角度建立抑黃曲霉毒素有效成分的分離方法；對(duì)分離得到的抑黃曲霉毒素有效成分進(jìn)行鑒定；初步探討其抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的機(jī)制。本研究在國(guó)內(nèi)率先采用tip culture方法研究枯草芽孢桿菌Hitwh-B05的抑黃曲霉毒素能力，其代謝產(chǎn)生的抑黃曲霉毒素有效成分能夠有效抑制寄生曲霉菌絲生長(zhǎng)及黃曲霉毒素合成途徑中第一個(gè)穩(wěn)定、且呈現(xiàn)橘紅色的前體物質(zhì)—NorsolorinicAcid（NA）的產(chǎn)生，進(jìn)而抑制了黃曲霉毒素的產(chǎn)生，并且對(duì)黃曲霉毒素的抑制具有廣譜性。Tip culture方法特點(diǎn)是直觀，操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)周期短，能夠進(jìn)行定量分析，研究結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。與以往使用的產(chǎn)黃曲霉毒素菌株相比，無(wú)毒害作用，減少了對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的危害和對(duì)環(huán)境的污染。 利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法優(yōu)化了Hitwh-B05菌株抑黃曲霉毒素有效成分產(chǎn)生的條件，使其產(chǎn)量得到顯著提高。抑黃曲霉毒素有效成分產(chǎn)生的適宜條件為溫度35℃、培養(yǎng)時(shí)間6d、培養(yǎng)基初始pH值為6.00，培養(yǎng)基配方為硫酸錳0.04g/L、酵母粉10g/L、牛肉膏12g/L、葡萄糖40g/L、大豆蛋白胨10g/L、硫酸鎂4g/L、磷酸氫二鉀4g/L。使用優(yōu)化培養(yǎng)基獲得的Hitwh-B05菌株發(fā)酵上清液對(duì)NA積累的抑制率是優(yōu)化前的GY液體培養(yǎng)基的2.98倍，對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的抑制率是優(yōu)化前的GY液體培養(yǎng)基的5.21倍，菌株代謝產(chǎn)生的脂肽產(chǎn)量是優(yōu)化前的GY液體培養(yǎng)基的2.16倍。 大孔樹脂富集法可作為實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中快速有效的分離枯草芽孢桿菌Hitwh-B05代謝產(chǎn)生的抑黃曲霉毒素有效成分的方法。篩選出大孔弱極性樹脂DM130能夠吸附大量抑黃曲霉毒素有效成分且不易吸收色素雜質(zhì)，有效成分總回收率達(dá)到69.43%，色素去除率在96%以上。 通過分子生物學(xué)手段鑒定Hitwh-B05菌株含有的脂肽編碼基因合成的脂肽包括bacillomycin、bacilysin、ericin、fengycin、mersacidin、mycosubntilin、iturinA、surfactin和sublancin，表明Hitwh-B05菌株在適宜的條件下可產(chǎn)生的脂肽種類比較廣泛。MALDI/TOF/MS分析Hitwh-B05菌株發(fā)酵上清液分離得到的抑黃曲霉毒素有效成分主要為脂肽類物質(zhì)iturin A、bacillomycin D、surfactin和fengycin A。結(jié)果表明枯草芽孢桿菌Hitwh-B05產(chǎn)生的脂肽種類比較廣泛，國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究報(bào)道中，通過MALDI/TOF/MS方法在同一菌株中同時(shí)檢測(cè)到4種不同種類的脂肽鮮有報(bào)道，多數(shù)僅檢測(cè)到了1~3種脂肽。 Hitwh-B05菌株分離得到的抑黃曲霉毒素有效成分抗寄生曲霉侵染花生能力顯著高于常用的化學(xué)合成防腐劑雙乙酸鈉（SDA），具有較大的應(yīng)用潛力，為開發(fā)具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的、并能夠有效抑制黃曲霉毒素合成的生物新農(nóng)藥提供理論和技術(shù)支持，使我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的利用更加優(yōu)質(zhì)可靠。在抑黃曲霉毒素有效成分作用下，寄生曲霉孢子延遲萌發(fā)，菌絲體出現(xiàn)較多分節(jié)，干癟、表面粗糙、失水嚴(yán)重，并且斷裂成碎片。原因可能是在抑黃曲霉毒素有效成分作用下，寄生曲霉細(xì)胞膜中的磷脂雙分子層產(chǎn)生孔隙，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)被破壞而破裂，細(xì)胞無(wú)法正常吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致菌絲體斷裂，影響黃曲霉毒素合成。
[Abstract]:The aflatoxin is a kind of toxic compound produced by fungus metabolism , which is found in soil , peanut , corn and other crops , which not only causes pollution to the environment , human or animal causes body disease or even death after eating food or feed contaminated with aflatoxin . Therefore , it is an important research hotspot for scholars at home and abroad . Therefore , it is important to prevent mold infection and reduce toxin production from pollution source , and to reduce the harm of chemical preservative to environment and human body .

The new strain HitWh - B05 of Bacillus subtilis with independent intellectual property isolated from the laboratory was used as the main research object , and the fermentation conditions of the effective components of aflatoxin B1 were optimized .
The invention relates to a method for separating effective components of aflatoxin B1 from a plurality of angles ;
Identification of the effective components of the aflatoxins obtained by separation ;
This study is the first to study the mechanism of aflatoxin production . This study is the first to use tip culture method to study the ability of Bacillus subtilis to study the aflatoxin - inhibiting ability of Bacillus subtilis HitWh - B05 , which can effectively inhibit the production of aflatoxin . The method is simple in operation , short in experiment period and can be used for quantitative analysis .

The optimum conditions for the effective components of the strain of the strain were optimized by using the statistical method . The optimum conditions for the effective components of the strain were as follows : temperature 35 鈩

本文編號(hào)：1915536