本文關(guān)鍵詞： 青蒿素衍生物 SM934 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 B 淋巴細胞 Toll 樣受體　出處：《中國科學(xué)院上海藥物研究所》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是以B淋巴細胞過度活化、大量自身抗體產(chǎn)生為主要免疫學(xué)特征的自身免疫性疾病。狼瘡患者多為多系統(tǒng)、多器官累及,嚴(yán)重者可出現(xiàn)狼瘡性腎炎(lupus nephritis)乃至死亡。據(jù)WHO統(tǒng)計,全球約有5,000,000名狼瘡患者,而在我國患者人數(shù)就近百萬。且其病理機制復(fù)雜,靶標(biāo)不明確。因此,探究SLE的發(fā)病機制、研制高效低毒的狼瘡治療藥物已成為醫(yī)學(xué)和藥學(xué)領(lǐng)域的重要課題。對SLE動物模型的深入研究對于闡明狼瘡的發(fā)病機制及尋找新的藥物作用靶點有著極為重要的意義。目前國際上最常用的狼瘡動物模型是雌性MRL/lpr小鼠,它是以MRL品系小鼠為背景的Fas基因缺失小鼠,由于其自身反應(yīng)性淋巴細胞不能通過凋亡途徑清除而出現(xiàn)自身免疫疾病癥狀。我們的研究基本明確了MRL/lpr小鼠的發(fā)病進程、病理特征及免疫功能變化。結(jié)果表明:雌性MRL/lpr小鼠通常從8~12周齡開始發(fā)病;14周齡即可觀察到掉毛及皮損現(xiàn)象,此時還可觀察到明顯的全身淋巴結(jié)腫大;16周齡開始出現(xiàn)較高蛋白尿;20周齡時發(fā)展為嚴(yán)重狼瘡,20~24周齡為死亡集中時間段,24周齡時死亡率達到50%。此外,約10%的MRL/lpr小鼠可出現(xiàn)類似人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的癥狀:關(guān)節(jié)紅腫,嚴(yán)重者出現(xiàn)癱瘓。且隨著周齡增加,MRL/lpr小鼠血清抗核抗體(ANA)水平不斷增加。進一步對MRL/lpr小鼠脾臟、淋巴結(jié)、腎臟等器官中的淋巴細胞亞群進行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):隨著周齡增加,MRL/lpr小鼠脾臟中CD4+T細胞及CD8+T細胞均不斷降低,而DN(Double Negative)T細胞則大量積聚。此外,脾臟中na?ve B細胞、生發(fā)中心(germinal center)B細胞數(shù)量均不斷降低,而活化B細胞以及具有抗體分泌功能的漿細胞不斷增加。與脾臟中結(jié)果相反,隨著發(fā)病,腎臟浸潤的CD4+T細胞和CD8+T細胞均不斷增加,而DN T細胞比例則不斷減少。腎臟中B細胞的比例則是隨著發(fā)病先升高后降低。另外,狼瘡發(fā)病過程中Th細胞各亞群比例失衡:隨著周齡增加,MRL/lpr小鼠脾臟及淋巴結(jié)中Th1、Th17細胞比例不斷增加,而脾臟中Treg細胞比例不斷減少。γδT細胞作為IFN-γ和IL-17的主要來源細胞,隨著狼瘡發(fā)病,雖然其細胞比例不斷下降,但其分泌細胞因子的能力不斷增強。通過了解mrl/lpr小鼠發(fā)病進程、病理特征及免疫功能變化,我們對狼瘡的發(fā)病機制有了進一步的認(rèn)識,也為后期相關(guān)治療藥物的藥效學(xué)評價和機理研究提供了指導(dǎo)。目前,關(guān)于sle治療藥物的研究很多,但進展緩慢,50年來一直未有行之有效的小分子藥物上市。近年來發(fā)現(xiàn),青蒿素類藥物不僅在抗瘧方面有著出色的表現(xiàn),同時也具有一定的免疫抑制活性。但傳統(tǒng)青蒿素類抗瘧藥物的溶解度差、口服生物利用度低等問題始終限制了該類藥物在自身免疫性疾病治療領(lǐng)域的應(yīng)用推廣。通過長期努力,本課題組合成了一系列具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新型青蒿素類衍生物,不僅具有更強的免疫抑制活性和更好的治療安全性,也突破了傳統(tǒng)青蒿素類藥物在溶解度、生物利用度方面的瓶頸,更適用于慢性自身免疫性疾病的口服治療。通過成藥性評價,我們最終確定了水溶性青蒿素衍生物馬來酸蒿乙醚胺(sm934)作為治療sle的候選新藥。我們前期的工作證實sm934具有較強的體內(nèi)外免疫抑制活性,且可通過調(diào)節(jié)t細胞功能對sle起到保護作用。本研究考察優(yōu)化劑量的sm934對mrl/lpr狼瘡小鼠的療效作用,并圍繞b細胞進行機制探討。我們采用雌性mrl/lpr小鼠,從其9周齡時開始給予sm934,一天兩次灌胃給藥(高劑量5mg/kg、中劑量2.5mg/kg、低劑量1.25mg/kg)至其27周齡,實驗終點時檢測藥物對mrl/lpr小鼠狼瘡性腎炎、脾臟及淋巴結(jié)腫大、血清細胞因子及自身抗體、脾臟淋巴細胞分群等指標(biāo)的影響。結(jié)果顯示:(1)sm934改善mrl/lpr小鼠的狼瘡性腎炎:提高生存率、改善蛋白尿,升高血清白蛋白、降低血清尿素氮、肌酐水平,減輕腎臟損傷及免疫復(fù)合物沉積;(2)sm934減輕mrl/lpr小鼠脾臟及淋巴結(jié)腫大癥狀;(3)sm934降低血清抗核抗體水平、抑制抗體的類別轉(zhuǎn)換,并降低血清中體液免疫相關(guān)細胞因子il-6、il-10、il-21水平;(4)sm934能延緩mrl/lpr小鼠的疾病進程,提高靜息態(tài)b細胞及生發(fā)中心b細胞數(shù)量,降低活化b細胞及漿細胞數(shù)量。exvivo,考察sm934對tlr7/9激動劑誘導(dǎo)的b細胞的活化、增殖、分化及抗體分泌功能的影響。結(jié)果顯示:sm934通過抑制b細胞中tlr7/9mrna的表達、myd88蛋白表達及nf-κb蛋白的磷酸化,從而抑制mrl/lpr小鼠b細胞的活化、增殖、il-6、il-10的產(chǎn)生以及抗體的分泌,且sm934上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子BCL6的表達而下調(diào)Blimp-1的表達。接著,我們采用正常人外周血單個核細胞(PBMC)對SM934的作用進行驗證。與MRL/lpr小鼠中的結(jié)果一致,SM934抑制TLR7/9信號介導(dǎo)的人PBMC中B細胞的活化、增殖,并抑制漿細胞的形成及抗體IgG和IgM的釋放。綜上所述,本研究考察了MRL/lpr狼瘡小鼠發(fā)病過程中一系列的病理學(xué)變化,證實了SM934對該模型小鼠的治療作用,且一天兩次的給藥策略為SM934的臨床實驗設(shè)計提供了重要參考。隨后,我們闡明了SM934通過抑制MyD88依賴的TLR7/9信號介導(dǎo)的B細胞的活化、漿細胞的形成及自身抗體的分泌從而治療狼瘡的作用機制。本研究將有助于進一步了解狼瘡疾病的發(fā)病機制,為藥物干預(yù)提供可能的新靶點,也將為青蒿素類化合物治療自身免疫疾病的研究提供新的證據(jù)和思路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院上海藥物研究所
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R965

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本文編號：1500928