本文關(guān)鍵詞：王不留行、桃仁和郁金中抑制FXa活性成分研究

  更多相關(guān)文章： 抗凝藥 FXa抑制劑 王不留行 桃仁 郁金 協(xié)同作用

【摘要】：血栓性疾病嚴(yán)重危害人類健康,而傳統(tǒng)抗凝藥又存在許多局限。新一代抗凝藥的研發(fā)成為全球抗凝藥研究的熱點(diǎn)�，F(xiàn)代研究表明顯著抑制活化的凝血因子Xa(FXa)可有效抗凝而不影響基本的止血,這使FXa抑制劑成為理想的抗凝藥物。抑制FXa的新結(jié)構(gòu)類型活性化合物的發(fā)現(xiàn)對(duì)新一代抗凝藥的研究至關(guān)重要�；钛鲱愔兴幱糜谥委熝鲎C具有悠久的歷史,現(xiàn)代藥理研究也表明,部分活血化瘀中藥具有一定的抗凝活性。課題組前期對(duì)常用活血化瘀藥抑制FXa的活性進(jìn)行了篩選,結(jié)果顯示王不留行、桃仁和郁金85%醇提取物對(duì)FXa具有較好的抑制活性。本文對(duì)這三種中藥抑制FXa的活性部位進(jìn)行了分離純化,以期找到活性成分,為研發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新穎抗凝藥物提供科學(xué)依據(jù),奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容如下：1.中藥王不留行中抑制FXa活性成分研究利用各種柱色譜技術(shù)從王不留行抑制FXa的活性部位中分離純化了13個(gè)化合物,利用1H-NMR、13C-NMR、MS、BC、DEPT等波譜技術(shù)分別鑒定為α-波甾醇、豆甾-7,22-二烯-3-酮、豆甾-1,5-二烯-3-醇、N-(3-甲氧基-4-羥基苯乙基)正二十四烷酸酰胺、N-(3,4-二羥基苯乙基)正二十四烷酸酰胺、絲石竹酸、16-羥基絲石竹酸、原兒茶酸、王不留行環(huán)肽A、王不留行環(huán)肽B、腺苷、牡蠣素和pinnatifin E,其中化合物N-(3-甲氧基-4-羥基苯乙基)正二十四烷酸酰胺、N-(3,4-二羥基苯乙基)正二十四烷酸酰胺和pinnatifin E為3個(gè)新化合物。對(duì)各單體化合物進(jìn)行了FXa抑制率測定,IC50分別為279.55,286.98,307.54,210.57,222.67,165.23,293.67,654.65,198.18,249.30,380.71,221.83,278.17μmol/L,其中化合物絲石竹酸和王不留行環(huán)肽A對(duì)FXa具有一定的抑制活性。2.中藥桃仁中抑制FXa活性成分研究利用各種柱色譜技術(shù)從桃仁抑制FXa的活性部位中分離純化了10個(gè)化合物,利用1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜技術(shù)分別鑒定為9-十八碳烯酸-2',3'-二羥基丙酯、胡蘿卜苷、扁桃酰胺、苯甲酸、2-羥基-9-十八碳烯酸、正十七烷酸、9-十八碳烯酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸、正十六烷酸、苦杏仁苷。對(duì)各單體化合物進(jìn)行了FXa抑制率測定,ICso分別為265.80,187.25,565.46,850.54,454.06,303.52,440.56,691.75,373.58,220.12μumol/L,其中化合物胡蘿卜苷具有一定的FXa抑制活性。3.中藥郁金中抑制FXa活性成分研究利用各種柱色譜技術(shù)從郁金抑制FXa的活性部位中分離純化了10個(gè)化合物,利用1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜技術(shù)分別鑒定為桂莪術(shù)內(nèi)酯、a-epoxide、正十六烷酸、鄰苯二甲酸二丁酯、莪術(shù)烯醇、二十二烷醇、甘油三亞油酸酯、β-谷甾醇、5-羥甲基-糠醛、雙[5-甲�；坊鵠醚。對(duì)各單體化合物進(jìn)行了FXa抑制率測定,IC50分別為287.31,233.78,303.55,376.83,402.31,301.20,202.39,255.90,173.61,166.88μmol/L其中化合物5-羥甲基-糠醛和雙[5-甲�；坊鵠醚具有一定的FXa抑制活性。4.FXa抑制劑-甘草次酸與天然抗血小板聚集活性成分的協(xié)同抗凝血作用研究體外采用試劑盒法測定了FXa抑制劑甘草次酸與天然抗血小板聚集活性成分對(duì)APTT、TT的延長作用,按Berenbaum法公式評(píng)價(jià)兩藥合用時(shí)效應(yīng),其中甘草次酸和川芎嗪合用時(shí)Y值小于1,表明甘草次酸與川芎嗪體外具有協(xié)同抗凝作用。體內(nèi)采用玻片法證明甘草次酸與川芎嗪聯(lián)合用藥比單用顯著延長大鼠凝血時(shí)間,斷尾法證明甘草次酸和川芎嗪聯(lián)合用藥不顯著延長大鼠出血時(shí)間,不會(huì)引起體內(nèi)大出血。因此,甘草次酸和川芎嗪聯(lián)合用藥能增強(qiáng)彼此的抗凝作用且不會(huì)增加出血風(fēng)險(xiǎn)。綜上,本文研究了王不留行、桃仁和郁金的FXa抑制活性,對(duì)主要活性部位進(jìn)行了分離純化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物絲石竹酸、王不留行環(huán)肽A、胡蘿卜苷、5-羥甲基-糠醛和雙[5-甲�；坊鵠醚對(duì)FXa具有一定的抑制活性。并對(duì)FXa抑制劑甘草次酸與抗血小板聚集藥物的協(xié)同抗凝作用進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)甘草次酸與川芎嗪聯(lián)合用藥可顯著延長APTT、TT時(shí)間及大鼠凝血時(shí)間,表明甘草次酸與川芎嗪聯(lián)合用藥體外體內(nèi)均具有協(xié)同抗凝作用,且不會(huì)引起體內(nèi)大出血。雖然這些化合物的活性與已上市藥物相比較弱,但它們不同的結(jié)構(gòu)類型也可為FXa抑制劑的研究提供了新的啟示。
【關(guān)鍵詞】：抗凝藥 FXa抑制劑 王不留行 桃仁 郁金 協(xié)同作用
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R284
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 符號(hào)及縮略語說明12-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述—FXa抑制劑的研究進(jìn)展13-20
• 1. 人工合成的FXa抑制劑13-16
• 1.1 直接FXa因子抑制劑13-15
• 1.2 間接FXa因子抑制劑15-16
• 2. 天然產(chǎn)物FXa抑制劑16-19
• 2.1 從動(dòng)物體中分離的天然FXa抑制劑16-18
• 2.2 從植物中分離得的天然FXa抑制劑18-19
• 3. 總結(jié)19-20
• 第二章 王不留行中抑制FXa活性成分研究20-29
• 1. 材料和方法20-21
• 1.1 儀器及試劑20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 1.3 體外FXa活性測定的方法21
• 1.4 王不留行飲片的提取和萃取21
• 1.5 王不留行中FXa抑制成分活性部位的分離純化21
• 2. 結(jié)果與討論21-29
• 2.1 王不留行醇提物中抑制FXa活性部位的研究21-22
• 2.2 抑制FXa活性部位分離得到的各單體化合物的FXa活性測定22-23
• 2.3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定23-28
• 2.4 討論28-29
• 第三章 桃仁中抑制FXa活性成分的研究29-36
• 1. 材料和方法29-30
• 1.1 儀器及試劑29
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 1.3 體外FXa活性測定的方法30
• 1.4 桃仁飲片的提取和萃取30
• 1.5 桃仁中FXa抑制成分活性部位的分離純化30
• 2. 結(jié)果與討論30-36
• 2.1 桃仁提取物中FXa抑制成分活性部位的研究30-31
• 2.2 抑制FXa活性部位分離得到的各單體化合物的FXa活性測定31-32
• 2.3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定32-35
• 2.4 討論35-36
• 第四章 郁金中抑制FXa活性成分的研究36-43
• 1. 材料和方法36-38
• 1.1 儀器及試劑36
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料36-37
• 1.3 體外FXa活性測定的方法37
• 1.4 郁金飲片的提取和萃取37
• 1.5 郁金中FXa抑制成分活性部位的分離純化37-38
• 2. 結(jié)果與討論38-43
• 2.1 郁金提取物中FXa抑制成分活性部位的研究38
• 2.2 抑制FXa活性部位分離得到的各單體化合物的FXa活性測定38-39
• 2.3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定39-42
• 2.4 討論42-43
• 第五章 甘草次酸與抗血小板聚集活性成分對(duì)大鼠的協(xié)同抗凝血作用研究43-50
• 1. 材料與儀器43-44
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物43
• 1.2 藥物和試劑43-44
• 1.3 主要儀器44
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法44-45
• 2.1 體外抗凝血實(shí)驗(yàn)44
• 2.2 體內(nèi)抗凝血活性評(píng)價(jià)44-45
• 2.3 結(jié)果判定方法45
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論45-50
• 3.1 體外抗凝血實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-47
• 3.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-49
• 3.3 討論49-50
• 第六章 結(jié)語50-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 附圖59-97
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果97-98
• 致謝98

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1014263