本文關(guān)鍵詞：C-jun基因與caspase-8基因在海洛因致小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究c-jun基因和caspase-8基因在海洛因誘導(dǎo)小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞發(fā)生凋亡中的作用及意義。方法:離體培養(yǎng)原代小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞,采用Hoechst 33258核染色觀察海洛因在同一時(shí)間不同濃度及同一濃度不同時(shí)間點(diǎn)下對(duì)小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞核形態(tài)的影響。將人工合成沉默c-jun基因的miRNA干擾載體病毒轉(zhuǎn)染至小腦顆粒細(xì)胞72 h,以濃度為80 ug/ml的海洛因作用于小腦顆粒細(xì)胞24 h,實(shí)驗(yàn)分3組:對(duì)照組、海洛因組、海洛因+慢病毒組,用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率,并采用免疫熒光技術(shù)對(duì)各組細(xì)胞中的c-jun蛋白和caspase-8蛋白熒光強(qiáng)度的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)檢測(cè)各組細(xì)胞中的c-jun mRNA和caspase-8 mRNA的相對(duì)表達(dá)量,蛋白印跡(Western blot)法檢測(cè)p-c-jun、c-jun和caspase-8因子在各組細(xì)胞中蛋白水平上的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:隨著海洛因作用小腦顆粒細(xì)胞的濃度增加和時(shí)間延長(zhǎng),神經(jīng)元細(xì)胞凋亡數(shù)量逐漸增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P濃度=0.006,P時(shí)間=0.005)。C-jun基因表達(dá)沉默后,海洛因干預(yù)小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞24h,海洛因組細(xì)胞凋亡率為46.50±4.39%,明顯高于海洛因+慢病毒組細(xì)胞凋亡率(6.06±3.31%)和對(duì)照組細(xì)胞凋亡率(7.93±3.68%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.012,P=0.009)(P0.05)。免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn),80ug/ml的海洛因作用小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞24 h后c-jun蛋白呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài),與對(duì)照組和海洛因+慢病毒組相比結(jié)果具有差異性(P=0.041,P=0.010),結(jié)果顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Caspase-8蛋白在海洛因組高表達(dá),較對(duì)照組和海洛因+慢病毒組明顯增高,結(jié)果具有差異性(P=0.027,P=0.018),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)3組中c-jun和caspase-8兩因子的mRNA水平表達(dá)量結(jié)果顯示:海洛因組與正常對(duì)照組相比,c-jun和caspase-8 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯增高(P=0.007,p=0.036),和海洛因+慢病毒組的相對(duì)表達(dá)量比較,結(jié)果有差異(P=0.001,P=0.017),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);另外海洛因+慢病毒組與對(duì)照組進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),c-jun的mRNA水平表達(dá)量降低明顯,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.006),caspase-8 mRNA水平表達(dá)量在海洛因+慢病毒和對(duì)照組兩組比較無(wú)明顯差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.088)。采用Western blot法檢測(cè)了海洛因組中的3個(gè)蛋白,p-c-jun,c-jun和caspase-8蛋白水平表達(dá)量,結(jié)果較對(duì)照組明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018,P=0.013,P=0.017);較海洛因+慢病毒組(P=0.002,P=0.002,P=0.004)蛋白相對(duì)表達(dá)量亦明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);海洛因+慢病毒組與對(duì)照組中的p-c-jun,c-jun和caspase-8蛋白水平相對(duì)表達(dá)量明顯降低(P=0.005,P=0.007,P=0.027),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:海洛因致小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞凋亡比率隨海洛因濃度和作用時(shí)間的增加而上升,海洛因致CGC細(xì)胞凋亡呈時(shí)間和濃度正比例依賴關(guān)系。C-jun、caspase-8蛋白參與促進(jìn)了海洛因致小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞凋亡,同時(shí)caspase-8蛋白是重要的c-jun轉(zhuǎn)錄信號(hào)通路的促凋亡候選靶基因。
【關(guān)鍵詞】：海洛因綿狀白質(zhì)腦病 海洛因 凋亡 c-jun caspase-8
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R749.64;D919

  本文關(guān)鍵詞：C-jun基因與caspase-8基因在海洛因致小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：356165