發(fā)布時間：2017-05-11 04:01

  本文關鍵詞：C-jun基因與caspase-8基因在海洛因致小腦顆粒神經(jīng)元細胞凋亡中的作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究c-jun基因和caspase-8基因在海洛因誘導小腦顆粒神經(jīng)元細胞發(fā)生凋亡中的作用及意義。方法:離體培養(yǎng)原代小腦顆粒神經(jīng)元細胞,采用Hoechst 33258核染色觀察海洛因在同一時間不同濃度及同一濃度不同時間點下對小腦顆粒神經(jīng)元細胞核形態(tài)的影響。將人工合成沉默c-jun基因的miRNA干擾載體病毒轉(zhuǎn)染至小腦顆粒細胞72 h,以濃度為80 ug/ml的海洛因作用于小腦顆粒細胞24 h,實驗分3組:對照組、海洛因組、海洛因+慢病毒組,用流式細胞技術檢測各組細胞的凋亡率,并采用免疫熒光技術對各組細胞中的c-jun蛋白和caspase-8蛋白熒光強度的表達情況進行檢測。通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)檢測各組細胞中的c-jun mRNA和caspase-8 mRNA的相對表達量,蛋白印跡(Western blot)法檢測p-c-jun、c-jun和caspase-8因子在各組細胞中蛋白水平上的相對表達量。結(jié)果:隨著海洛因作用小腦顆粒細胞的濃度增加和時間延長,神經(jīng)元細胞凋亡數(shù)量逐漸增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P濃度=0.006,P時間=0.005)。C-jun基因表達沉默后,海洛因干預小腦顆粒神經(jīng)元細胞24h,海洛因組細胞凋亡率為46.50±4.39%,明顯高于海洛因+慢病毒組細胞凋亡率(6.06±3.31%)和對照組細胞凋亡率(7.93±3.68%),差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.012,P=0.009)(P0.05)。免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn),80ug/ml的海洛因作用小腦顆粒神經(jīng)元細胞24 h后c-jun蛋白呈現(xiàn)高表達狀態(tài),與對照組和海洛因+慢病毒組相比結(jié)果具有差異性(P=0.041,P=0.010),結(jié)果顯示有統(tǒng)計學意義(P0.05);Caspase-8蛋白在海洛因組高表達,較對照組和海洛因+慢病毒組明顯增高,結(jié)果具有差異性(P=0.027,P=0.018),有統(tǒng)計學意義(P0.05)。通過qRT-PCR檢測3組中c-jun和caspase-8兩因子的mRNA水平表達量結(jié)果顯示:海洛因組與正常對照組相比,c-jun和caspase-8 mRNA相對表達量明顯增高(P=0.007,p=0.036),和海洛因+慢病毒組的相對表達量比較,結(jié)果有差異(P=0.001,P=0.017),有統(tǒng)計學意義(P0.05);另外海洛因+慢病毒組與對照組進行比較發(fā)現(xiàn),c-jun的mRNA水平表達量降低明顯,結(jié)果有統(tǒng)計學意義(P=0.006),caspase-8 mRNA水平表達量在海洛因+慢病毒和對照組兩組比較無明顯差異,無統(tǒng)計學意義(P=0.088)。采用Western blot法檢測了海洛因組中的3個蛋白,p-c-jun,c-jun和caspase-8蛋白水平表達量,結(jié)果較對照組明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.018,P=0.013,P=0.017);較海洛因+慢病毒組(P=0.002,P=0.002,P=0.004)蛋白相對表達量亦明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);海洛因+慢病毒組與對照組中的p-c-jun,c-jun和caspase-8蛋白水平相對表達量明顯降低(P=0.005,P=0.007,P=0.027),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:海洛因致小腦顆粒神經(jīng)元細胞凋亡比率隨海洛因濃度和作用時間的增加而上升,海洛因致CGC細胞凋亡呈時間和濃度正比例依賴關系。C-jun、caspase-8蛋白參與促進了海洛因致小腦顆粒神經(jīng)元細胞凋亡,同時caspase-8蛋白是重要的c-jun轉(zhuǎn)錄信號通路的促凋亡候選靶基因。
【關鍵詞】：海洛因綿狀白質(zhì)腦病 海洛因 凋亡 c-jun caspase-8
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.64;D919

  本文關鍵詞：C-jun基因與caspase-8基因在海洛因致小腦顆粒神經(jīng)元細胞凋亡中的作用機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：356165