發(fā)布時間：2021-06-24 00:04

　　有毒植物及植物毒素種類繁多,由植物毒素中毒引發(fā)的案件和事故常有發(fā)生。在此類案事件中,血液、尿液、組織等生物樣品中植物毒素的檢測是中毒診斷或相關(guān)案事件認定的關(guān)鍵,因此,建立生物樣品中常見植物毒素快速靈敏的檢測方法具有重要意義。本文基于改進的QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）前處理方法,結(jié)合高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS/MS）,分析血液、肝臟、尿液中常見的24種植物毒素,即金雀花堿、毒扁豆堿、莨菪堿、東莨菪堿、山莨菪堿、鉤吻素子、鉤吻素甲、鉤吻素己、歐夾竹桃甙乙、歐夾竹桃甙、雪上一枝蒿甲素、秋水仙堿、次烏頭堿、新烏頭堿、烏頭堿、顛烏頭堿、卡茄堿、茄堿、雷公藤吉堿、雷公藤次堿、雷公藤春堿、雷公藤定堿、士的寧、馬錢子堿。試驗工作及其結(jié)果如下:1.本文建立了可同時一次性進樣并分析上述24種植物毒素的HPLC-MS/MS方法,采用多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）掃描,離子對定性,標準曲線法定量。2.本文建立了針對常見三種生物樣品（血液、尿液、肝臟）的QuEChERS樣品前處理方法,可有針對性的處理上述三種生物樣品,提取并分析上述2... 

【文章來源】：中國人民公安大學北京市

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

24種植物毒素的提取離子色譜圖

在乙腈中分別添加體積分數(shù)為0.1%、0.2%的甲酸或乙酸后,經(jīng)過震蕩離心后上層清液泛紅且渾濁,即對血液檢材的凈化并不理想,難以沉淀血液中的色素蛋白,見下圖3.1。分析其原因可以發(fā)現(xiàn),血液中細胞較多,且有大量如紅細胞這類含有色素的體細胞,在加入含有有機酸的萃取劑后,機體細胞膜以及細胞器膜會被有機酸破壞,其內(nèi)部的色素蛋白等會滲透到基質(zhì)液中,使基質(zhì)產(chǎn)生變色,對儀器分析不利。進一步實驗發(fā)現(xiàn),相比與乙腈離心后沉淀結(jié)塊,當使用萃取劑為甲醇或丙酮時,血液離心后的沉淀物更加細膩和均勻,但各種植物毒素回收率均不高,可能是由于多數(shù)植物毒素在乙腈和血液的分配情況優(yōu)于甲醇、丙酮和血液中的分配情況,由于丙酮會影響液相色譜中的連接塑膠管,使其老化變脆,不利于儀器的維護,因此本實驗嘗試考察乙腈和甲醇組合作為提取劑的提取回收率情況,分別考察φ5%、φ10%、φ15%、φ20%甲醇乙腈溶液,但結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取回收率并無明顯提升,且配制溶液較為費時費力。因此,本實驗最終選擇提取回收率較高,且沉淀蛋白效果最好的乙腈作為DLLME階段的萃取劑。

僅通過甲醇進行提取的肝臟上清液雖較為澄清無明顯渾濁,但清液顯黃色且有氣味。但在甲醇中加入0.1%（體積比）的甲酸后,上清液變得稍有渾濁混濁,顏色成棕紅色,見圖3.2。而在甲醇中加入0.1%（體積比）的乙酸后,上清液雖然未變渾濁,但上清液顏色成淺紅色,見圖3.3。原因為肝臟細胞數(shù)量大,酸性條件下,肝臟組織被酸溶解,細胞膜、細胞器膜與細胞器被酸破壞,大量破碎的細胞器、色素、蛋白質(zhì)等物質(zhì)流入基質(zhì)液,導(dǎo)致基質(zhì)更為復(fù)雜,甚至變得渾濁,不利于凈化[111],其中肝臟中的血紅蛋白因為細胞被破壞也釋放到基質(zhì)之中,這是加入兩種有機酸后上層液體變?yōu)樽丶t色或紅色的原因。圖3.3肝臟經(jīng)乙酸提取劑提取后離心效果圖


本文編號：3245930