目的本課題擬通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)松果菊苷抗乳腺腫瘤的能力,并探究其可能的作用機(jī)制。方法首先,通過(guò)采用MTT試驗(yàn),克隆形成試驗(yàn),劃痕試驗(yàn),侵襲以及遷移試驗(yàn),以不同濃度的松果菊苷處理乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468,綜合判斷松果菊苷的抗乳腺腫瘤能力。然后,通過(guò)采用熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng),檢測(cè)松果菊苷對(duì)不同信號(hào)通路的抑制或激活效應(yīng)。并在此結(jié)果基礎(chǔ)上,我們以不同濃度的松果菊苷處理MDA-MB-231和MDA-MB-468細(xì)胞,收集細(xì)胞并提取蛋白,western blotting檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá);同時(shí)收集細(xì)胞提取RNA,并反轉(zhuǎn)錄后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)相關(guān)靶基因的表達(dá),綜合判斷松果菊苷對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的抑制效果。進(jìn)一步,我們以MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型評(píng)估松果菊苷的體內(nèi)抗腫瘤能力,并驗(yàn)證了其對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的抑制效果。結(jié)果通過(guò)采用MTT試驗(yàn),克隆形成試驗(yàn),劃痕試驗(yàn),侵襲以及遷移試驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)松果菊苷能呈濃度依賴性的抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468細(xì)胞系細(xì)胞增殖能力,細(xì)胞侵襲以... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

松果菊苷抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞系細(xì)胞活力

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文16力，結(jié)果如圖5C、5D所示。因此我們得到結(jié)論，松果菊苷能在體外顯著抑制乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力。圖2.松果菊苷抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖能力。分別于96孔板接種MDA-MB-231和MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞（3×103個(gè)細(xì)胞每孔），按圖示濃度松果菊苷處理24h或48h（n=4），并于收集細(xì)胞前4h加入EdU，收集細(xì)胞檢測(cè)EdU含量。A.松果菊苷處理MDA-MB-231細(xì)胞24h；B.松果菊苷處理MDA-MB-468細(xì)胞24h。C.松果菊苷處理MDA-MB-231細(xì)胞48h。D.松果菊苷處理MDA-MB-468細(xì)胞48h。p*<0.05。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文17圖3.松果菊苷抑制MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞系克隆形成。A．于6孔板中每孔加入1×103MDA-MB-231細(xì)胞，同時(shí)加入0、50、100μM松果菊苷處理8天，撤去培養(yǎng)基，多聚甲醛固定細(xì)胞后，用0.1%結(jié)晶紫染色，并拍照。B.統(tǒng)計(jì)細(xì)胞個(gè)數(shù)大于50的克隆數(shù)，并計(jì)算相對(duì)克隆形成比例。n=6，p*<0.05。2.4松果菊苷促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468細(xì)胞凋亡相比于正常細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞往往更容易耐受凋亡，而通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡對(duì)抑制腫瘤生長(zhǎng)具有十分重要的意義。Caspase-3是一種介導(dǎo)細(xì)胞凋亡十分重要的蛋白分子。在發(fā)生凋亡時(shí)，Caspase-3會(huì)發(fā)生切割，生成Cleavedcaspase-3，因此Cleavedcaspase-3常用于評(píng)判細(xì)胞凋亡水平[63,64]。已有研究表明，松果菊苷能促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡發(fā)生[19]，而松果菊苷能否引起乳腺癌細(xì)胞凋亡發(fā)生尚未報(bào)道。因此，我們?cè)u(píng)估了松果菊苷是否具有促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡的能力，通過(guò)采用不同濃度的松果菊苷分別處理乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468，24h

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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