目的本課題擬通過體內(nèi)、體外實驗證實松果菊苷抗乳腺腫瘤的能力,并探究其可能的作用機制。方法首先,通過采用MTT試驗,克隆形成試驗,劃痕試驗,侵襲以及遷移試驗,以不同濃度的松果菊苷處理乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468,綜合判斷松果菊苷的抗乳腺腫瘤能力。然后,通過采用熒光素酶報告基因系統(tǒng),檢測松果菊苷對不同信號通路的抑制或激活效應(yīng)。并在此結(jié)果基礎(chǔ)上,我們以不同濃度的松果菊苷處理MDA-MB-231和MDA-MB-468細(xì)胞,收集細(xì)胞并提取蛋白,western blotting檢測Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵蛋白表達(dá);同時收集細(xì)胞提取RNA,并反轉(zhuǎn)錄后采用實時熒光定量PCR檢測相關(guān)靶基因的表達(dá),綜合判斷松果菊苷對Wnt/β-catenin信號通路的抑制效果。進一步,我們以MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型評估松果菊苷的體內(nèi)抗腫瘤能力,并驗證了其對Wnt/β-catenin信號通路的抑制效果。結(jié)果通過采用MTT試驗,克隆形成試驗,劃痕試驗,侵襲以及遷移試驗,我們發(fā)現(xiàn)松果菊苷能呈濃度依賴性的抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468細(xì)胞系細(xì)胞增殖能力,細(xì)胞侵襲以... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

松果菊苷抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞系細(xì)胞活力

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文16力，結(jié)果如圖5C、5D所示。因此我們得到結(jié)論，松果菊苷能在體外顯著抑制乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力。圖2.松果菊苷抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖能力。分別于96孔板接種MDA-MB-231和MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞（3×103個細(xì)胞每孔），按圖示濃度松果菊苷處理24h或48h（n=4），并于收集細(xì)胞前4h加入EdU，收集細(xì)胞檢測EdU含量。A.松果菊苷處理MDA-MB-231細(xì)胞24h；B.松果菊苷處理MDA-MB-468細(xì)胞24h。C.松果菊苷處理MDA-MB-231細(xì)胞48h。D.松果菊苷處理MDA-MB-468細(xì)胞48h。p*<0.05。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文17圖3.松果菊苷抑制MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞系克隆形成。A．于6孔板中每孔加入1×103MDA-MB-231細(xì)胞，同時加入0、50、100μM松果菊苷處理8天，撤去培養(yǎng)基，多聚甲醛固定細(xì)胞后，用0.1%結(jié)晶紫染色，并拍照。B.統(tǒng)計細(xì)胞個數(shù)大于50的克隆數(shù)，并計算相對克隆形成比例。n=6，p*<0.05。2.4松果菊苷促進乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468細(xì)胞凋亡相比于正常細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞往往更容易耐受凋亡，而通過促進腫瘤細(xì)胞凋亡對抑制腫瘤生長具有十分重要的意義。Caspase-3是一種介導(dǎo)細(xì)胞凋亡十分重要的蛋白分子。在發(fā)生凋亡時，Caspase-3會發(fā)生切割，生成Cleavedcaspase-3，因此Cleavedcaspase-3常用于評判細(xì)胞凋亡水平[63,64]。已有研究表明，松果菊苷能促進結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡發(fā)生[19]，而松果菊苷能否引起乳腺癌細(xì)胞凋亡發(fā)生尚未報道。因此，我們評估了松果菊苷是否具有促進乳腺癌細(xì)胞凋亡的能力，通過采用不同濃度的松果菊苷分別處理乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468，24h

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Garlic-derived compound S-allylmercaptocysteine inhibits hepatocarcinogenesis through targeting LRP6/Wnt pathway[J]. Jia Xiao,Feiyue Xing,Yingxia Liu,Yi Lv,Xiaogang Wang,Ming-Tat Ling,Hao Gao,Songying Ouyang,Min Yang,Jiang Zhu,Yu Xia,Kwok-Fai So,George L.Tipoe.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2018(04)
[2]松果菊苷通過上調(diào)miR-34a減輕心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷[J]. 蔡華,張領(lǐng),李滿生,李新峰.  中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志. 2018(06)
[3]松果菊苷對醋酸鉛致生精功能損傷小鼠的治療作用[J]. 趙東海,趙貴芳,馬帥,陳雪,王鶯,康晶.  上海中醫(yī)藥雜志. 2018(06)
[4]松果菊苷對2型糖尿病小鼠血脂代謝的影響[J]. 張雪,郝亞榮,唐鳳娟.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2018(03)
[5]松果菊苷對低氧性肺動脈高壓大鼠血管生長因子的影響[J]. 劉洋,羅蘭,代紅燕,屠鵬飛,陶義存.  中南藥學(xué). 2016(03)
[6]松果菊苷對魚藤酮誘導(dǎo)的大鼠帕金森病模型黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的選擇性保護作用(英文)[J]. 封新影,朱敏,張琦琪,陳依萍,李文偉.  中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報. 2012(07)
[7]松果菊苷對帕金森病模型小鼠黑質(zhì)紋狀體蛋白表達(dá)影響的雙向電泳分析[J]. 趙欣,蒲小平,耿興超.  中國藥理學(xué)通報. 2008(01)
[8]松果菊苷改善SAM-P/8小鼠學(xué)習(xí)記憶能力作用機制初探[J]. 田楓,張闊,康愛君,姜勇,周淑佩,鄭振輝.  實驗動物科學(xué)與管理. 2006(02)
[9]松果菊苷抗衰老作用機理研究[J]. 古力努爾·木特列夫,雷麗,屠鵬飛,果德安,盧景芬.  生物物理學(xué)報. 2004(03)
[10]用脈沖輻解法研究海膽苷對DNA堿基損傷的修復(fù)作用[J]. 鄭榮梁,李雯艷,姜岳,林念蕓.  中國科學(xué)C輯:生命科學(xué). 1996(06)

碩士論文
[1]松果菊苷抑制蛋白質(zhì)淀粉樣纖維化及對UVB所致皮膚損傷的保護作用研究[D]. 張迪.第四軍醫(yī)大學(xué) 2015



本文編號：3058712