本文關(guān)鍵詞：3個(gè)罌粟SSR基因座熒光復(fù)合擴(kuò)增體系的構(gòu)建及應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:罌粟(Papaver somniferum L)屬—年生草本植物,是世界三大毒品原植物之一。由于其提取物能制成鴉片類(lèi)毒品(包括鴉片、嗎啡、海洛因等),具有強(qiáng)烈成癮性和毒性,給個(gè)人和社會(huì)造成嚴(yán)重危害,因此罌粟的非法種植買(mǎi)賣(mài)以及在食品中添加都被國(guó)家法律明令禁止(全國(guó)多地現(xiàn)罌粟殼入食品調(diào)料事件),然而在高額的利潤(rùn)驅(qū)使下,世界范圍內(nèi)違禁種植罌粟的活動(dòng)仍舊猖獗,手段更加隱蔽和高明,由于罌粟的花瓣、顏色及果實(shí)與觀賞植物虞美人(麗春花果)等近緣種植物非常相似,增加了罌粟鑒別的困難,給禁毒鏟毒工作帶來(lái)挑戰(zhàn)。在法庭科學(xué)中,傳統(tǒng)檢驗(yàn)主要是通過(guò)生物形態(tài)學(xué)和化學(xué)的方法,這些方法雖然適用范圍比較廣,但不能對(duì)罌粟幼苗、種籽及植株物種來(lái)源進(jìn)行明確的定性和推斷,為了更好的達(dá)到罌粟種屬鑒定的目的,需要嘗試尋求新的更好的方法來(lái)解決這一問(wèn)題。微衛(wèi)星STR是由1~6個(gè)核苷酸為重復(fù)單位組成的串聯(lián)重復(fù)序列,廣泛分布于人類(lèi)、動(dòng)物和植物的基因組中,是人類(lèi)DNA分析中最常用的分子標(biāo)記,植物的STR標(biāo)記稱(chēng)SSR標(biāo)記,目前多應(yīng)用于植物遺傳多樣性分析、種屬鑒定、個(gè)體識(shí)別、遺傳圖譜構(gòu)建等方面。罌粟由于獲取受限,國(guó)內(nèi)外對(duì)其DNA分子生物學(xué)遺傳標(biāo)記的研究不多。本實(shí)驗(yàn)研究旨在開(kāi)發(fā)并構(gòu)建罌粟3個(gè)SSR基因座的熒光復(fù)合擴(kuò)增體系,運(yùn)用該體系準(zhǔn)確將罌粟與其近緣種植物進(jìn)行區(qū)分,為公安機(jī)關(guān)辦理涉毒案件中罌粟的種屬鑒別提供簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的方法。方法:1)分別采用公安部物證鑒定中心實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化的硅珠提取法和商業(yè)試劑盒兩種植物DNA提取方法提取已知罌粟植物樣本的DNA;2)通過(guò)反復(fù)擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室前期自行設(shè)計(jì)的多條EST-SSR和基因組SSR引物進(jìn)行篩選;3)構(gòu)建包含3個(gè)SSR基因座的復(fù)合擴(kuò)增體系,通過(guò)調(diào)整酶濃度、引物濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度、退火溫度、循環(huán)次數(shù)對(duì)復(fù)合擴(kuò)增體系進(jìn)行優(yōu)化;4)對(duì)該熒光復(fù)合擴(kuò)增體系的靈敏度、組織同一性、種屬特異性、可重復(fù)性進(jìn)行驗(yàn)證;5)將該復(fù)合擴(kuò)增體系應(yīng)用于實(shí)際案例,通過(guò)對(duì)5個(gè)公安系統(tǒng)辦理的涉毒案件中疑似罌粟樣本進(jìn)行檢測(cè),進(jìn)一步驗(yàn)證該體系的有效性。結(jié)果:1)采用兩種植物DNA提取方法提取了罌粟DNA,從自行設(shè)計(jì)的引物中篩選出2條引物P12、P13,開(kāi)發(fā)了2個(gè)罌粟特異性SSR位點(diǎn),結(jié)合此前已有的1個(gè)SSR位點(diǎn),成功構(gòu)建了包含3個(gè)SSR位點(diǎn)的熒光復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)體系;2)在種屬特異性研究中,用該復(fù)合擴(kuò)增體系分別對(duì)罌粟、白屈菜、東方罌粟、虞美人、冰島虞美人、大麻以及其他普通植物等10余種植物樣本進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,罌粟的擴(kuò)增產(chǎn)物含有大小分別243bp(±1bp)、183bp(±1bp)、211bp(±1bp)和223bp(±1bp)的基因片段;東方罌粟的擴(kuò)增產(chǎn)物含有大小為205bp(±1bp)的基因片段;虞美人和冰島虞美人的擴(kuò)增產(chǎn)物中含有大小為208bp(±1bp)的基因片段;大麻、煙草以及其他普通植物樣本未出現(xiàn)任何擴(kuò)增產(chǎn)物;3)在靈敏度檢測(cè)中,該體系的最小檢出量為0.1ng/u L;4)用該熒光復(fù)合擴(kuò)增體系對(duì)不同來(lái)源的5個(gè)實(shí)際案件中疑似罌粟樣本進(jìn)行檢測(cè),成功檢驗(yàn)出罌粟,結(jié)果與原鑒定結(jié)論一致,證實(shí)可應(yīng)用于法醫(yī)實(shí)踐。結(jié)論:本研究成功構(gòu)建了包含3個(gè)SSR位點(diǎn)的罌粟熒光復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)體系,該體系易于優(yōu)化、靈敏度高、結(jié)果穩(wěn)定,能將罌粟與其近緣種植物、大麻、其他普通植物有效區(qū)分,實(shí)現(xiàn)了在分子生物學(xué)水平上的特異性檢測(cè),為毒品原植物罌粟的檢驗(yàn)鑒別提供了準(zhǔn)確可靠的新方法,是傳統(tǒng)生物形態(tài)學(xué)及化學(xué)檢驗(yàn)方法的豐富和補(bǔ)充,對(duì)于公安機(jī)關(guān)查處罌粟非法種植,打擊毒品犯罪有重大意義。
【關(guān)鍵詞】：SSR位點(diǎn) 復(fù)合擴(kuò)增 罌粟 毒品原植物
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：D919
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-17
• 結(jié)果17-21
• 附圖21-46
• 附表46-47
• 討論47-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 附錄56-58
• 綜述 毒品原植物DNA分子遺傳學(xué)標(biāo)記研究58-71
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 致謝71-72
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷72

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：3個(gè)罌粟SSR基因座熒光復(fù)合擴(kuò)增體系的構(gòu)建及應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：280380