本文關(guān)鍵詞：3個罌粟SSR基因座熒光復(fù)合擴增體系的構(gòu)建及應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:罌粟(Papaver somniferum L)屬—年生草本植物,是世界三大毒品原植物之一。由于其提取物能制成鴉片類毒品(包括鴉片、嗎啡、海洛因等),具有強烈成癮性和毒性,給個人和社會造成嚴重危害,因此罌粟的非法種植買賣以及在食品中添加都被國家法律明令禁止(全國多地現(xiàn)罌粟殼入食品調(diào)料事件),然而在高額的利潤驅(qū)使下,世界范圍內(nèi)違禁種植罌粟的活動仍舊猖獗,手段更加隱蔽和高明,由于罌粟的花瓣、顏色及果實與觀賞植物虞美人(麗春花果)等近緣種植物非常相似,增加了罌粟鑒別的困難,給禁毒鏟毒工作帶來挑戰(zhàn)。在法庭科學(xué)中,傳統(tǒng)檢驗主要是通過生物形態(tài)學(xué)和化學(xué)的方法,這些方法雖然適用范圍比較廣,但不能對罌粟幼苗、種籽及植株物種來源進行明確的定性和推斷,為了更好的達到罌粟種屬鑒定的目的,需要嘗試尋求新的更好的方法來解決這一問題。微衛(wèi)星STR是由1~6個核苷酸為重復(fù)單位組成的串聯(lián)重復(fù)序列,廣泛分布于人類、動物和植物的基因組中,是人類DNA分析中最常用的分子標記,植物的STR標記稱SSR標記,目前多應(yīng)用于植物遺傳多樣性分析、種屬鑒定、個體識別、遺傳圖譜構(gòu)建等方面。罌粟由于獲取受限,國內(nèi)外對其DNA分子生物學(xué)遺傳標記的研究不多。本實驗研究旨在開發(fā)并構(gòu)建罌粟3個SSR基因座的熒光復(fù)合擴增體系,運用該體系準確將罌粟與其近緣種植物進行區(qū)分,為公安機關(guān)辦理涉毒案件中罌粟的種屬鑒別提供簡便、快速、準確的方法。方法:1)分別采用公安部物證鑒定中心實驗室優(yōu)化的硅珠提取法和商業(yè)試劑盒兩種植物DNA提取方法提取已知罌粟植物樣本的DNA;2)通過反復(fù)擴增實驗對本實驗室前期自行設(shè)計的多條EST-SSR和基因組SSR引物進行篩選;3)構(gòu)建包含3個SSR基因座的復(fù)合擴增體系,通過調(diào)整酶濃度、引物濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度、退火溫度、循環(huán)次數(shù)對復(fù)合擴增體系進行優(yōu)化;4)對該熒光復(fù)合擴增體系的靈敏度、組織同一性、種屬特異性、可重復(fù)性進行驗證;5)將該復(fù)合擴增體系應(yīng)用于實際案例,通過對5個公安系統(tǒng)辦理的涉毒案件中疑似罌粟樣本進行檢測,進一步驗證該體系的有效性。結(jié)果:1)采用兩種植物DNA提取方法提取了罌粟DNA,從自行設(shè)計的引物中篩選出2條引物P12、P13,開發(fā)了2個罌粟特異性SSR位點,結(jié)合此前已有的1個SSR位點,成功構(gòu)建了包含3個SSR位點的熒光復(fù)合擴增檢驗體系;2)在種屬特異性研究中,用該復(fù)合擴增體系分別對罌粟、白屈菜、東方罌粟、虞美人、冰島虞美人、大麻以及其他普通植物等10余種植物樣本進行檢測,結(jié)果顯示,罌粟的擴增產(chǎn)物含有大小分別243bp(±1bp)、183bp(±1bp)、211bp(±1bp)和223bp(±1bp)的基因片段;東方罌粟的擴增產(chǎn)物含有大小為205bp(±1bp)的基因片段;虞美人和冰島虞美人的擴增產(chǎn)物中含有大小為208bp(±1bp)的基因片段;大麻、煙草以及其他普通植物樣本未出現(xiàn)任何擴增產(chǎn)物;3)在靈敏度檢測中,該體系的最小檢出量為0.1ng/u L;4)用該熒光復(fù)合擴增體系對不同來源的5個實際案件中疑似罌粟樣本進行檢測,成功檢驗出罌粟,結(jié)果與原鑒定結(jié)論一致,證實可應(yīng)用于法醫(yī)實踐。結(jié)論:本研究成功構(gòu)建了包含3個SSR位點的罌粟熒光復(fù)合擴增檢驗體系,該體系易于優(yōu)化、靈敏度高、結(jié)果穩(wěn)定,能將罌粟與其近緣種植物、大麻、其他普通植物有效區(qū)分,實現(xiàn)了在分子生物學(xué)水平上的特異性檢測,為毒品原植物罌粟的檢驗鑒別提供了準確可靠的新方法,是傳統(tǒng)生物形態(tài)學(xué)及化學(xué)檢驗方法的豐富和補充,對于公安機關(guān)查處罌粟非法種植,打擊毒品犯罪有重大意義。
【關(guān)鍵詞】：SSR位點 復(fù)合擴增 罌粟 毒品原植物
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：D919
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-17
• 結(jié)果17-21
• 附圖21-46
• 附表46-47
• 討論47-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻54-56
• 附錄56-58
• 綜述 毒品原植物DNA分子遺傳學(xué)標記研究58-71
• 參考文獻67-71
• 致謝71-72
• 個人簡歷72

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