【摘要】： 目的:應用熒光標記復合擴增技術檢測短串聯(lián)重復序列(short tandem repeats, STR)遺傳標記已經成為法醫(yī)學親權鑒定與個人識別的重要手段。目前,國內外法醫(yī)DNA實驗室應用的商品化STR復合分型試劑盒主要包括美國ABI公司的IdentifilerTM試劑盒和Promega公司PowerPlex?16 System試劑盒,基本能夠滿足大部分個體識別和三聯(lián)體親子鑒定案件的檢驗。但對于二聯(lián)體單親鑒定或其它一些疑難的親緣關系鑒定,二者的系統(tǒng)效能不能滿足其鑒定要求。因此,用于二聯(lián)體親子鑒定的試劑盒有待進一步完善。本研究根據(jù)文獻報道選出在中國漢族人群多態(tài)性良好的8個新的STR基因,包括D7S3048、D8S1132、D11S2368、D2S1772、D6S1043、D13S325、D12S391、GATA198B05,將其構建成STR熒光標記復合分型體系,對該體系的靈敏度及種屬特異性進行測試,并利用該分型體系調查中國漢族、土族、回族、藏族群體遺傳學參數(shù),將該體系與IdentifilerTM試劑盒或PowerPlex?16試劑盒聯(lián)合用于單親鑒定,評價該分型體系在單親鑒定中的應用價值。 方法:采用Chelex-100法提取無關健康個體FTA血卡DNA。利用熒光復合擴增技術,構建包括Amelogenin、D8S1132、D12S391、GATA198B05、D7S3048、D2S1772、D11S2368、D6S1043、D13S325基因座的復合擴增體系。將Amelogenin、D8S1132、D12S391三個基因座的上游引物5’端用6-FAM熒光標記,GATA198B05、D7S3048兩個基因座的上游引物5’端用HEX熒光標記,D2S1772、D11S2368兩個基因座的上游引物5’端用TAMRA熒光標記,D6S1043、D13S325兩個基因座的上游引物5’端用ROX熒光標記。調節(jié)各基因座引物濃度、Mg2+濃度、Taq酶濃度、退火溫度、循環(huán)次數(shù)、預變性時間、延伸時間等條件對復合體系進行優(yōu)化,得到最佳的反應條件。應用ABI310及ABI3130基因自動分析儀對擴增產物進行檢測,Genemapper 3.2軟件分析結果、對樣本進行檢測分型。每個基因座選取2個純合子進行測序,依據(jù)測序結果并根據(jù)國際法醫(yī)遺傳學會(international society of forensic genetics, ISFG)推薦的命名原則對各等位基因進行命名。利用該體系調查回族、土族、藏族各100個無關健康個體及200個漢族無關健康個體的遺傳學數(shù)據(jù)。分別計算各基因座的等位基因頻率及各法醫(yī)學參數(shù),并比較不同人群的等位基因分布情況。對該熒光標記復合擴增體系的靈敏度、種屬特異性進行研究。選取本法醫(yī)鑒定中心既往積累的單親鑒定的案例10例,應用本系統(tǒng)與商品化試劑盒聯(lián)合檢測,計算父權指數(shù)、評價該系統(tǒng)在單親鑒定中的應用價值。 結果: 1復合擴增體系的建立:成功構建包含8個STR基因座和1個牙釉質蛋白基因座的復合擴增體系。9個基因座都獲得了清晰的基因型分型結果,無干擾分型的非特異性擴增產物,可實現(xiàn)準確分型。 2群體遺傳學調查結果:應用該體系對回族、土族、藏族各100例及漢族無關健康個體200例進行群體遺傳學調查,基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡(P0.05)。在中國漢族、藏族、土族、回族人群,8個基因座的雜合度觀察值(Ho)的范圍分別為0.803~0.905、0.778~0.872、0.720~0.900、0.816~0.889 ;多態(tài)性信息含量(PIC)的范圍分別為0.770~0860、0.750~0.860、0.750~0.860、0.750~0.860;非父排除概率(PE)的范圍分別為0.605~0.806、0.558~0.739、0.460~0.795、0.630~0.773;個人識別率(DP)的范圍分別為0.927~0.967、0.906~0.964、0.913~963、0.909~0.964;匹配概率(Pm)的范圍分別為0.033~0.073、0.036~0.094、0.037~0.087、0.036~0.091;累積個人識別率分別為0.99999999998、0.99999999996、0.99999999996、0.99999999996;累積非父排除率分別為0.99989、0.99993、0.9998、0.99993。 3法醫(yī)學應用評估: 3.1系統(tǒng)靈敏度研究結果:在DNA含量為0.125ng時,應用STR復合擴增系統(tǒng)仍可以進行正確分型。 3.2種屬特異性研究結果:在所檢測的非靈長類動物(狗、兔、牛、魚、豬、雞)靈長類動物(猴)及實驗室常見的菌株(念珠菌、腸球菌、大腸桿菌)中,除猴在牙釉質蛋白基因座出現(xiàn)產物峰外,其余樣本的所有9個基因座均無特異性產物峰出現(xiàn)。 3.3在單親鑒定案件中,聯(lián)合應用本系統(tǒng)和IdentifilerTM試劑盒或與PowerPlex?16 System,二者的累積二聯(lián)體非父排除概率均達到0.9999以上,并使累積父權指數(shù)提高2~4個數(shù)量級,大大提高了單親鑒定結論的可靠性。 結論:本研究構建了包括D8S1132、D12S391、GATA198B05、D7S3048、D2S1772、D11S2368、D6S1043、D13S325八個STR基因座和1個牙釉質蛋白基因座在內的熒光標記復合擴增體系,分型結果準確、穩(wěn)定可靠,靈敏度達0.125ng,具有人類種屬特異性,在中國回族、藏族、土族及漢族群體中具有較好的遺傳多態(tài)性,補充了少數(shù)民族的遺傳學數(shù)據(jù),可作為常規(guī)STR試劑盒的有益補充,提高系統(tǒng)效能,更好地解決單親鑒定及疑難親子鑒定案件。
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【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：D919

【參考文獻】

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1 李志強,楊慶恩,余純應,陳慧;武漢漢族人群STR基因座D3S1358、D13S317、D12S391的多態(tài)性研究[J];法律與醫(yī)學雜志;2000年02期

2 呂德堅,劉秋玲,陸惠玲,陳麗嫻;15個STR在單親親子鑒定中的排除分析[J];中國法醫(yī)學雜志;2003年06期

3 金洪年;景鑫;王儉;黃力力;;人類線粒體DNA異質性研究進展及在法醫(yī)學中的應用[J];中國法醫(yī)學雜志;2007年05期

4 雷偉;朱金玲;羅佳濱;張玉萍;王長山;呂學詵;;印記基因KCNQ1的遺傳多態(tài)性及在親權鑒定中的應用[J];中國法醫(yī)學雜志;2008年06期

5 周雪平,張偉娟,賈振軍,吳謹,李英碧,侯一平;線粒體DNA的研究進展及其法醫(yī)學應用[J];法醫(yī)學雜志;2004年02期

6 張茂修;劉洋;孫善會;趙蔚明;汪運山;;Identifiler~TM系統(tǒng)在單親血緣關系鑒定中的突變觀察與分析[J];法醫(yī)學雜志;2008年03期

7 李成濤;郭宏;趙珍敏;李莉;;親權鑒定中常用STR基因座的基因組學和遺傳學分析[J];法醫(yī)學雜志;2008年03期

8 張文紅;黎青;李少英;王曉曼;孫筱放;;STR基因座在二聯(lián)體親子鑒定中的應用分析[J];法醫(yī)學雜志;2008年06期

9 張素華;暢晶晶;李莉;;Mentype~汶 Argus X-8試劑盒在親權鑒定中的應用價值[J];法醫(yī)學雜志;2009年03期

10 何瑋;夏云恩;李貌;翟滇;曾發(fā)明;程寶文;;多手段聯(lián)合親子鑒定1例[J];法醫(yī)學雜志;2009年03期

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本文編號：2349705