【摘要】： 目的:應(yīng)用熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeats, STR)遺傳標(biāo)記已經(jīng)成為法醫(yī)學(xué)親權(quán)鑒定與個(gè)人識(shí)別的重要手段。目前,國(guó)內(nèi)外法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的商品化STR復(fù)合分型試劑盒主要包括美國(guó)ABI公司的IdentifilerTM試劑盒和Promega公司PowerPlex?16 System試劑盒,基本能夠滿(mǎn)足大部分個(gè)體識(shí)別和三聯(lián)體親子鑒定案件的檢驗(yàn)。但對(duì)于二聯(lián)體單親鑒定或其它一些疑難的親緣關(guān)系鑒定,二者的系統(tǒng)效能不能滿(mǎn)足其鑒定要求。因此,用于二聯(lián)體親子鑒定的試劑盒有待進(jìn)一步完善。本研究根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道選出在中國(guó)漢族人群多態(tài)性良好的8個(gè)新的STR基因,包括D7S3048、D8S1132、D11S2368、D2S1772、D6S1043、D13S325、D12S391、GATA198B05,將其構(gòu)建成STR熒光標(biāo)記復(fù)合分型體系,對(duì)該體系的靈敏度及種屬特異性進(jìn)行測(cè)試,并利用該分型體系調(diào)查中國(guó)漢族、土族、回族、藏族群體遺傳學(xué)參數(shù),將該體系與IdentifilerTM試劑盒或PowerPlex?16試劑盒聯(lián)合用于單親鑒定,評(píng)價(jià)該分型體系在單親鑒定中的應(yīng)用價(jià)值。 方法:采用Chelex-100法提取無(wú)關(guān)健康個(gè)體FTA血卡DNA。利用熒光復(fù)合擴(kuò)增技術(shù),構(gòu)建包括Amelogenin、D8S1132、D12S391、GATA198B05、D7S3048、D2S1772、D11S2368、D6S1043、D13S325基因座的復(fù)合擴(kuò)增體系。將Amelogenin、D8S1132、D12S391三個(gè)基因座的上游引物5’端用6-FAM熒光標(biāo)記,GATA198B05、D7S3048兩個(gè)基因座的上游引物5’端用HEX熒光標(biāo)記,D2S1772、D11S2368兩個(gè)基因座的上游引物5’端用TAMRA熒光標(biāo)記,D6S1043、D13S325兩個(gè)基因座的上游引物5’端用ROX熒光標(biāo)記。調(diào)節(jié)各基因座引物濃度、Mg2+濃度、Taq酶濃度、退火溫度、循環(huán)次數(shù)、預(yù)變性時(shí)間、延伸時(shí)間等條件對(duì)復(fù)合體系進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳的反應(yīng)條件。應(yīng)用ABI310及ABI3130基因自動(dòng)分析儀對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè),Genemapper 3.2軟件分析結(jié)果、對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)分型。每個(gè)基因座選取2個(gè)純合子進(jìn)行測(cè)序,依據(jù)測(cè)序結(jié)果并根據(jù)國(guó)際法醫(yī)遺傳學(xué)會(huì)(international society of forensic genetics, ISFG)推薦的命名原則對(duì)各等位基因進(jìn)行命名。利用該體系調(diào)查回族、土族、藏族各100個(gè)無(wú)關(guān)健康個(gè)體及200個(gè)漢族無(wú)關(guān)健康個(gè)體的遺傳學(xué)數(shù)據(jù)。分別計(jì)算各基因座的等位基因頻率及各法醫(yī)學(xué)參數(shù),并比較不同人群的等位基因分布情況。對(duì)該熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系的靈敏度、種屬特異性進(jìn)行研究。選取本法醫(yī)鑒定中心既往積累的單親鑒定的案例10例,應(yīng)用本系統(tǒng)與商品化試劑盒聯(lián)合檢測(cè),計(jì)算父權(quán)指數(shù)、評(píng)價(jià)該系統(tǒng)在單親鑒定中的應(yīng)用價(jià)值。 結(jié)果: 1復(fù)合擴(kuò)增體系的建立:成功構(gòu)建包含8個(gè)STR基因座和1個(gè)牙釉質(zhì)蛋白基因座的復(fù)合擴(kuò)增體系。9個(gè)基因座都獲得了清晰的基因型分型結(jié)果,無(wú)干擾分型的非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物,可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確分型。 2群體遺傳學(xué)調(diào)查結(jié)果:應(yīng)用該體系對(duì)回族、土族、藏族各100例及漢族無(wú)關(guān)健康個(gè)體200例進(jìn)行群體遺傳學(xué)調(diào)查,基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡(P0.05)。在中國(guó)漢族、藏族、土族、回族人群,8個(gè)基因座的雜合度觀察值(Ho)的范圍分別為0.803~0.905、0.778~0.872、0.720~0.900、0.816~0.889 ;多態(tài)性信息含量(PIC)的范圍分別為0.770~0860、0.750~0.860、0.750~0.860、0.750~0.860;非父排除概率(PE)的范圍分別為0.605~0.806、0.558~0.739、0.460~0.795、0.630~0.773;個(gè)人識(shí)別率(DP)的范圍分別為0.927~0.967、0.906~0.964、0.913~963、0.909~0.964;匹配概率(Pm)的范圍分別為0.033~0.073、0.036~0.094、0.037~0.087、0.036~0.091;累積個(gè)人識(shí)別率分別為0.99999999998、0.99999999996、0.99999999996、0.99999999996;累積非父排除率分別為0.99989、0.99993、0.9998、0.99993。 3法醫(yī)學(xué)應(yīng)用評(píng)估: 3.1系統(tǒng)靈敏度研究結(jié)果:在DNA含量為0.125ng時(shí),應(yīng)用STR復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)仍可以進(jìn)行正確分型。 3.2種屬特異性研究結(jié)果:在所檢測(cè)的非靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(狗、兔、牛、魚(yú)、豬、雞)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(猴)及實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的菌株(念珠菌、腸球菌、大腸桿菌)中,除猴在牙釉質(zhì)蛋白基因座出現(xiàn)產(chǎn)物峰外,其余樣本的所有9個(gè)基因座均無(wú)特異性產(chǎn)物峰出現(xiàn)。 3.3在單親鑒定案件中,聯(lián)合應(yīng)用本系統(tǒng)和IdentifilerTM試劑盒或與PowerPlex?16 System,二者的累積二聯(lián)體非父排除概率均達(dá)到0.9999以上,并使累積父權(quán)指數(shù)提高2~4個(gè)數(shù)量級(jí),大大提高了單親鑒定結(jié)論的可靠性。 結(jié)論:本研究構(gòu)建了包括D8S1132、D12S391、GATA198B05、D7S3048、D2S1772、D11S2368、D6S1043、D13S325八個(gè)STR基因座和1個(gè)牙釉質(zhì)蛋白基因座在內(nèi)的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系,分型結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定可靠,靈敏度達(dá)0.125ng,具有人類(lèi)種屬特異性,在中國(guó)回族、藏族、土族及漢族群體中具有較好的遺傳多態(tài)性,補(bǔ)充了少數(shù)民族的遺傳學(xué)數(shù)據(jù),可作為常規(guī)STR試劑盒的有益補(bǔ)充,提高系統(tǒng)效能,更好地解決單親鑒定及疑難親子鑒定案件。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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1 李志強(qiáng),楊慶恩,余純應(yīng),陳慧;武漢漢族人群STR基因座D3S1358、D13S317、D12S391的多態(tài)性研究[J];法律與醫(yī)學(xué)雜志;2000年02期

2 呂德堅(jiān),劉秋玲,陸惠玲,陳麗嫻;15個(gè)STR在單親親子鑒定中的排除分析[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;2003年06期

3 金洪年;景鑫;王儉;黃力力;;人類(lèi)線(xiàn)粒體DNA異質(zhì)性研究進(jìn)展及在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;2007年05期

4 雷偉;朱金玲;羅佳濱;張玉萍;王長(zhǎng)山;呂學(xué)詵;;印記基因KCNQ1的遺傳多態(tài)性及在親權(quán)鑒定中的應(yīng)用[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

5 周雪平,張偉娟,賈振軍,吳謹(jǐn),李英碧,侯一平;線(xiàn)粒體DNA的研究進(jìn)展及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2004年02期

6 張茂修;劉洋;孫善會(huì);趙蔚明;汪運(yùn)山;;Identifiler~TM系統(tǒng)在單親血緣關(guān)系鑒定中的突變觀察與分析[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2008年03期

7 李成濤;郭宏;趙珍敏;李莉;;親權(quán)鑒定中常用STR基因座的基因組學(xué)和遺傳學(xué)分析[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2008年03期

8 張文紅;黎青;李少英;王曉曼;孫筱放;;STR基因座在二聯(lián)體親子鑒定中的應(yīng)用分析[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

9 張素華;暢晶晶;李莉;;Mentype~汶 Argus X-8試劑盒在親權(quán)鑒定中的應(yīng)用價(jià)值[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2009年03期

10 何瑋;夏云恩;李貌;翟滇;曾發(fā)明;程寶文;;多手段聯(lián)合親子鑒定1例[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2009年03期

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本文編號(hào)：2349705