發(fā)布時間：2018-05-16 02:15

  本文選題：法醫(yī)病理 + 皮膚損傷��； 參考：《中國醫(yī)科大學》2009年碩士論文

【摘要】： 目的 皮膚損傷愈合是一個復雜的過程,包括血液成分凝集、炎癥、肉芽組織形成、新生上皮覆蓋、結締組織收縮和纖維化等過程。c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase/stress-activated protein kinase,JNK/SAPK)為絲裂酶原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族的一個重要的亞族,可通過細胞性壓力和炎癥刺激發(fā)生磷酸化而激活,與重要的細胞反應有關,比如炎性反應和凋亡。本研究應用免疫組織化學和Western blot技術,檢測小鼠皮膚損傷區(qū)切創(chuàng)后各時間段磷酸化JNK(phospho-JNK,p-JNK)的變化情況,探討p-JNK在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時間推斷上應用的可能性。 實驗材料與方法 健康成年(8周齡)清潔級昆明系小鼠55只,雌雄不限,體質(zhì)量35～40g,隨機分為11組。其中皮膚切創(chuàng)分為10個時間段組,另一組為正常對照組,每組均為5只小鼠。乙醚氣體吸入麻醉,背部剪毛處理后,常規(guī)手術消毒,在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層切口,深達筋膜。分別于傷后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠脫頸椎處死,耳義傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。正常對照組小鼠麻醉后背部剪毛,不做切創(chuàng),觀察至14d,脫頸椎處死,取相同部位同等大小皮膚,以備HE染色、免疫組織化學染色和Western blot檢測應用。應用免疫組織化學和Western blot技術檢測55例小鼠皮膚切創(chuàng)后各時間段p-JNK變化情況,以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對照,顯微鏡×400倍下,在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機選取10個視野,計數(shù)細胞總數(shù)、陽性細胞數(shù)及陽性細胞率。應用Fluochem V2.0軟件檢測各時間段的平均灰度值,測得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差((?)±s)表示。用SPSS13.0 for Windows進行單因素方差分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果 正常對照組小鼠皮膚的表皮、毛囊及皮脂腺中表達p-JNK。皮膚切創(chuàng)傷后6h,可見少數(shù)多核粒細胞有p-JNK表達。傷后12～24h,大量浸潤的多核粒細胞和部分單個核細胞p-JNK呈陽性。傷后1～3d隨著時間的延長,p-JNK陽性細胞主要以單個核細胞為主。傷后5～14d p-JNK表達主要在成纖維細胞中。傷后0～3h,p-JNK陽性細胞率較低,隨著傷后時間的延長,p-JNK陽性細胞率逐漸增加,1d達到高峰。傷后3～5d一直呈高表達狀態(tài)。傷后7d p-JNK陽性細胞率達到第二峰,隨后逐漸下降。除傷后3d與5d陽性細胞率無統(tǒng)計學差異外(P0.05),其他各組與相鄰上組的細胞總數(shù)及陽性細胞率差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Westernblot結果顯示正常對照皮膚內(nèi)有p-JNK陽性條帶。皮膚切創(chuàng)傷后各時間段組p-JNK表達強度有一定規(guī)律。傷后0～12h,陽性條帶逐漸增強;1d,稍有下降;3d,p-JNK達到高峰。傷后5d、10d,較少;但傷后7d p-JNK相對較深。到傷后14d p-JNK陽性條帶基本與正常對照組條帶情況一致。除0h與正常對照組間平均灰度值差異無統(tǒng)計學意義外(P0.05),其余各組間平均灰度值差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論 1、正常對照組小鼠皮膚的表皮、毛囊及皮脂腺中表達p-JNK。 2、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中多核粒細胞、單個核細胞及成纖維細胞表達p-JNK。 3、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中p-JNK對誘導多核粒細胞、單個核細胞及成纖維細胞的凋亡可能具有調(diào)節(jié)作用。 4、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中p-JNK表達的規(guī)律性變化可用于皮膚切創(chuàng)損傷時間的推斷。
[Abstract]:objective
Skin injury healing is a complex process, including blood component agglutination, inflammation, granulation tissue formation, new epithelial cover, connective tissue contraction and fibrosis,.C-Jun amino terminal kinase (c-JunN-terminal kinase/stress-activated protein kinase, JNK/SAPK) is a cleft zymogen activated protein kinase (mitogen-activated protei). An important subfamily of the family of N kinase, MAPK, which can be activated by phosphorylation of cellular stress and inflammatory stimulation, related to important cellular responses, such as inflammatory reactions and apoptosis. This study used immunohistochemistry and Western blot to detect the phosphorylated JNK (phospho-JNK, p-J) at every time after the wound in the skin of mice. NK, to explore the role of p-JNK in skin wound healing and the possibility of its application in the estimation of injury time.
Experimental materials and methods
55 healthy adult (8 weeks old) Kunming mice were divided into 11 groups, male and female, with body mass from 35 to 40g, and randomly divided into 11 groups. The skin incision was divided into 10 time groups, the other group was the normal control group, and the other groups were 5 mice. After the ether gas inhalation anesthesia, the back shearing treatment, the routine operation disinfection and the longitudinal length 1.5cm skin in the center of the back. 0h, 3h, 6h, 12h, 12h, 1D, 3D, 5D, 7d, 10d and 14d respectively removed the mice from the cervical vertebra after the injury. The application of color and Western blot detection. The changes of p-JNK in 55 mice were detected by immunohistochemistry and Western blot. The non cut mouse skin tissue was used as the control, and the microscope x 400 times, the 10 fields were selected randomly in the injured area and the surrounding area. The number of cells, the number of positive cells and the positive size were counted. The average gray value of each time period was detected by Fluochem V2.0 software, and the measured data were measured with mean mean deviation ((?) + s). The single factor variance analysis was carried out with SPSS13.0 for Windows, and the difference of P0.05 was statistically significant.
Result
The skin epidermis, hair follicle and sebaceous gland of normal control mice expressed 6h after p-JNK. skin incision, and a few multinucleated granulocytes had p-JNK expression. 12 to 24h after injury, and p-JNK positive in large number of infiltrating multinucleated granulocytes and some mononuclear cells. After 1 to 3D, p-JNK positive cells mainly were mononuclear cells. The expression of 5 ~ 14d p-JNK after injury was mainly in fibroblasts. The rate of p-JNK positive cells was low after injury. With the prolongation of the injury time, the rate of p-JNK positive cells increased gradually and the 1D reached the peak. The rate of 3 to 5D after injury was highly expressed. The rate of 7D p-JNK positive cells reached second peak after injury, and then decreased gradually. 3D and 5D positive cells after injury. There was no statistical difference (P0.05). The difference of the number of cells and the positive cell rate between the other groups and the adjacent groups were statistically significant (P0.05).Westernblot results showed that there were p-JNK positive bands in the normal control skin. The expression intensity of p-JNK in each time group after the skin incision was 0 to 12h, and the positive bands gradually increased; 1D 3D, p-JNK reached the peak. 5D, 10d, less after injury, but 7d p-JNK was relatively deep after injury. The positive band of 14d p-JNK after injury was basically the same as that in normal control group. The mean gray value difference between 0h and normal control group was not statistically significant (P0.05), and the difference of average gray value between the remaining groups was statistically significant (P0.0). 5).
conclusion
1, the epidermis, hair follicle and sebaceous glands of normal control mice were expressed in p-JNK..
2, multinucleated granulocytes, mononuclear cells and fibroblasts express p-JNK. during wound healing in mice.
3, p-JNK may play a regulatory role in inducing apoptosis of multinucleated granulocytes, mononuclear cells and fibroblasts during wound healing in mice.
4, the regular change of p-JNK expression during wound healing in mice can be used to deduce the time of wound healing.

【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：D919

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