發(fā)布時(shí)間：2018-03-14 15:26

  本文選題：DNA甲基化　切入點(diǎn)：鏈融解曲線法　出處：《鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2008年01期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的:建立基于Rotor-Gene的鏈融解曲線法的甲基化標(biāo)記篩選技術(shù),分析各種影響因素,評(píng)估其實(shí)用性。方法:克隆Hela細(xì)胞雄激素受體基因外顯子-1的Bisulfite-PCR產(chǎn)物,挑出經(jīng)測(cè)序證實(shí)的可以代表不同甲基化程度的一組質(zhì)粒,并以之為模板,在Rotor-Gene3000實(shí)時(shí)定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增和鏈融解,分析融鏈溫度、鏈融解曲線與甲基化程度、甲基化模式的相關(guān)性及各種影響因素。結(jié)果:基于Rotor-Gene的鏈融解曲線法,不僅可以區(qū)分甲基化與非甲基化,而且能夠鑒別片段內(nèi)細(xì)微的甲基化差異;主要的影響因素有升溫幅度、緩沖液離子強(qiáng)度、產(chǎn)物濃度等。結(jié)論:基于Rotor-Gene的鏈融解曲線法,可以集擴(kuò)增和鏈融解于一體,是一種經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便的甲基化分析技術(shù),可用于樣品的甲基化篩選。
[Abstract]:Aim: to establish a methylation marker screening technique based on Rotor-Gene chain fusion curve, analyze various influencing factors and evaluate its practicability. Methods: Bisulfite-PCR products of androgen receptor gene exon 1 were cloned from Hela cells. A group of plasmids identified by sequencing as representing different levels of methylation were selected and used as templates for amplification and chain fusion using Rotor-Gene3000 real-time quantitative PCR apparatus to analyze the melting chain temperature, chain melting curve and methylation degree. Results: the chain fusion curve method based on Rotor-Gene could not only distinguish methylation from demethylation, but also distinguish the slight difference of methylation within segments. Conclusion: the chain melting curve method based on Rotor-Gene can integrate amplification and chain fusion. It is an economical and simple methylation analysis technique and can be used for methylation screening of samples.
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系 河南科技大學(xué)法醫(yī)學(xué)院 河南科技大學(xué)法醫(yī)學(xué)院 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系
【分類(lèi)號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1611802