本文關(guān)鍵詞：郝迎旭教授中醫(yī)藥防治腫瘤化療毒副反應(yīng)臨證經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及臨床研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《福建醫(yī)科大學(xué)》 2015年

siRNA干擾EGFR表達(dá)對(duì)食管鱗癌和腺癌放射敏感性影響

邱子丹  

【摘要】：目的探討小干擾RNA(small interfering RNA,si RNA)抑制表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)表達(dá)對(duì)食管鱗癌和食管腺癌放射敏感性的影響。方法體外培養(yǎng)食管鱗癌ECa109和食管腺癌OE19細(xì)胞株作為研究對(duì)象。脂質(zhì)體lipo2000介導(dǎo)化學(xué)合成的帶熒光Cy3-si RNA、不同序列EGFR-si RNA(EGFR-si RNA1:UGAUCUGUCACCACAUAAUUACGGG,CCCGUAAUUAUGUGGUGACAGAUCA;EGFR-si RNA2:UUAGAUAAGACUGCUAAGGCAUAGG,CCUAUGCCUUAGCAGUCUUAUCUAA;EGFR-si RNA3:UUUAAAUUCACCAAUACCUAUUCCG,CGGAAUAGGUAUUGGUGAAUUUAAA)和陰性-si RNA。通過熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率,通過RT-PCR及Western blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后EGFR基因和蛋白的表達(dá)情況變化,CCK8法分析轉(zhuǎn)染對(duì)兩株細(xì)胞增殖活性影響,最終確定最優(yōu)轉(zhuǎn)染條件。設(shè)空白對(duì)照組、單純照射組及EGFR-si RNA1照射組。采用克隆形成實(shí)驗(yàn)計(jì)算兩株細(xì)胞存活率及放射增敏比,多靶單擊模型和LQ模型繪制細(xì)胞存活曲線。流式細(xì)胞儀檢測(cè)EGFR-si RNA聯(lián)合放射對(duì)ECa109和OE19細(xì)胞各個(gè)時(shí)期(G0,G1,S,G2/M)的分布狀態(tài)和細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果1.ECa109和OE19細(xì)胞均表達(dá)EGFR,轉(zhuǎn)染Cy3-si RNA 4h后在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)兩株細(xì)胞均易被轉(zhuǎn)染,能滿足實(shí)驗(yàn)要求;2.在最優(yōu)轉(zhuǎn)染條件下,通過RT-PCR和Western blotting檢測(cè)得出EGFR-si RNA可明顯下調(diào)兩株細(xì)胞EGFR基因和蛋白的表達(dá),且轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞增殖抑制率低于5%;3.克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,ECa109細(xì)胞經(jīng)2、4、6、8Gy照射條件下EGFR si RNA組與對(duì)照組相比各劑量點(diǎn)SF明顯下降(P值均小于0.05);而OE19細(xì)胞在相同處理?xiàng)l件下EGFR si RNA組與對(duì)照組相比各劑量點(diǎn)SF下降不明顯(P值均大于0.05)。細(xì)胞存活曲線顯示,無論ECa109或OE19細(xì)胞,EGFR-si RNA組細(xì)胞存活參數(shù)均低于對(duì)照組;ECa109和OE19細(xì)胞EGFR si RNA組與空白對(duì)照組相比,SERD0分別為1.40和1.01;4.流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示,6Gy X線照射后細(xì)胞培養(yǎng)24h,發(fā)現(xiàn)單純照射可明顯影響ECa109細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡(P0.05),表現(xiàn)為G2/M期增加及S期下降,細(xì)胞凋亡率升高,但對(duì)OE19細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡影響較小(P0.05);干擾聯(lián)合X線照射可使ECa109和OE19細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡均發(fā)生較大幅度改變,但對(duì)ECa109細(xì)胞影響更顯著,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論si RNA干擾EGFR表達(dá)對(duì)食管鱗癌和食管腺癌均起一定的放射增敏作用,但食管鱗癌比食管腺癌放射增敏性更顯著,放射生物學(xué)改變更明顯,體現(xiàn)在:更有效地抑制了細(xì)胞對(duì)亞致死性損傷的修復(fù)能力;明顯影響細(xì)胞周期分布,使更多腫瘤細(xì)胞進(jìn)入對(duì)放射敏感的G2/M期,并且較大幅度地增加細(xì)胞凋亡率。總之,干擾EGFR表達(dá)后食管鱗癌細(xì)胞株的放射敏感性顯著高于食管腺癌細(xì)胞株。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

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