本文關(guān)鍵詞：扶正解毒方對荷瘤小鼠腫瘤相關(guān)巨噬細胞介導下血管重塑的調(diào)控研究

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【摘要】：研究背景：胃癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是一直困擾臨床醫(yī)生和限制臨床療效提高的重要難題。近年來研究表明,腫瘤免疫抑制微環(huán)境是腫瘤細胞賴以生存的基礎(chǔ),對促進腫瘤生長、逃避免疫監(jiān)視、形成微血管方面起著重要作用。已經(jīng)完成的國家自然基金課題(NO.81072802)扶正解毒法對HlF-α介導的腫瘤相關(guān)巨噬細胞(TAM)促微淋巴管生成的調(diào)控研究顯示扶正解毒方可以誘導腫瘤間質(zhì)中的TAM向M1型轉(zhuǎn)化,逆轉(zhuǎn)腫瘤組織中的乏氧環(huán)境和免疫抑制狀態(tài),抑制微淋巴管的生成,其機制與干預(yù)PI3K/AKT/mTOR通路有關(guān),同時發(fā)現(xiàn)扶正解毒方對移植瘤微血管生成亦有一定的調(diào)節(jié)作用。本實驗以此為基礎(chǔ),進一步探討扶正解毒方對荷瘤小鼠模型腫瘤相關(guān)巨噬細胞介導下血管重塑的調(diào)控機制。研究方法：造模：建立移植性前胃癌小鼠荷瘤模型(參照國家自然基金項目NO.81072802),將實驗動物隨機分為對照組、中藥組(扶正解毒方)、化療組(5-Fu)、中西醫(yī)結(jié)合組(結(jié)合組),分別給予相應(yīng)藥物干預(yù)14天。作用觀察：觀察扶正解毒中藥對前胃癌小鼠荷瘤模型移植瘤的生長及抑制情況,用超聲檢測小鼠移植瘤血管分布及血流參數(shù),采用尾靜脈注射熒光染料和腹腔注射乏氧探針的方法觀察腫瘤組織的血流灌注量和乏氧狀況。機制探討：用FACS法檢測各組小鼠CD4+/CD8+T細胞比值、Treg細胞含量,RT-PCR檢測血管生成因子VEGF、MMP-9、 COX-2、及免疫抑制因子IL-6、IL-10,趨化因子CCL-17、Arg-1分泌水平,Western blot和IHP法檢測血管生成素、UPR以及核心通路mTOR相關(guān)因子表達的情況。研究結(jié)果：1.荷瘤小鼠移植瘤的瘤重及抑制率對照組瘤重最高,為1.29±0.39g,藥物干預(yù)后,各治療組瘤重降低,中藥組、化療組、結(jié)合組的瘤重分別為0.93±0.37g、0.62±0.30g、0.48±0.24g；按照抑瘤率計算公式中藥組、化療組、結(jié)合組的瘤重抑制率分別為28.20%、52.09%、62.59%。2.超聲觀察各組小鼠腫瘤的血管分布及血流參數(shù)檢測對照組腫瘤組織血流豐富,血管密集、雜亂地分布于腫瘤周邊,管徑較細,缺少典型、深入瘤體中心的較大血管。中藥組腫瘤組織血流豐富程度不及對照組,然而其血管集中、規(guī)則,往往有1-2個深入瘤體中心的較大血管�；熃M、結(jié)合組也有部分集中深入瘤體內(nèi)部的血管,但血管普遍較少,血流信號不明顯。各組小鼠瘤內(nèi)血流參數(shù)PSV、EDV、RI值均為：中藥組對照組化療組結(jié)合組。各組小鼠瘤體內(nèi)血管Alder分級程度亦與血流參數(shù)情況類似,中藥組分級程度最高,其次分別為對照組、化療組、結(jié)合組,差異有統(tǒng)計學意義。3.腫瘤組織內(nèi)的血流灌注及乏氧狀況腫瘤組織內(nèi)的血流灌注量依次為對照組中藥組化療組結(jié)合組。其乏氧嚴重程度亦為對照組中藥組化療組結(jié)合組,對照組乏氧情況最嚴重,藥物干預(yù)后,治療組乏氧狀況輕度改善。4.對腫瘤相關(guān)巨噬細胞免疫抑制微環(huán)境的影響對照組腫瘤組織CD4+/CD8+T細胞比值為1.45±0.09,處于一個較低的水平,而脾組織Treg細胞的相對含量較高(2.50±0.56),且高表達M2型巨噬細胞的特征性免疫抑制因子IL-6、IL-10和趨化因子CCL-17、Arg-1,提示腫瘤微環(huán)境處于免疫抑制狀態(tài)。扶正解毒中藥干預(yù)后,腫瘤微環(huán)境CD4+/CD8+T細胞比值得到一定程度的提高(1.72±0.14),聯(lián)合化療組(1.96±0.31)效果最為明顯：Treg細胞含量降低,中藥組、化療組、結(jié)合組分別為1.37±0.44、1.67±0.20、1.15±0.55,免疫抑制因子表達水平也降低。5.對腫瘤相關(guān)巨噬細胞促血管生成因子表達的影響移植瘤中對照組VEGFa、MMP-9、COX-2基因的轉(zhuǎn)錄水平最高,經(jīng)藥物治療后,各組目標基因轉(zhuǎn)錄水平均有降低趨勢,P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義,結(jié)合組降低效果最為明顯。VEGFa基因表達水平為對照組化療組中藥組結(jié)合組；MMP-9、COX-2基因表達水平為對照組中藥組化療組結(jié)合組,MMP-9基因表達水平結(jié)合組與中藥組、化療組相比,降低水平明顯,而COX-2為化療組、結(jié)合組的基因表達水平明顯低于對照組、中藥組,差異有統(tǒng)計學意義。對照組移植瘤高表達Ang-1、Ang-2,經(jīng)藥物治療后其蛋白表達水平均降低,差異有統(tǒng)計學意義。Ang-1蛋白的表達水平為對照組中藥組化療組結(jié)合組,其中結(jié)合組與中藥組、化療組相比,差異顯著,有統(tǒng)計學意義；對照組Ang-2蛋白表達水平最高,經(jīng)藥物治療后各治療組蛋白表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義,而各治療組之間相互比較,差異無統(tǒng)計學意義。6.對Rheb/mTOR/p70S6K1信號通路的調(diào)控對照組高表達PI3K、Rheb、p70S6K1蛋白,中藥干預(yù)后,PI3K、Rheb表達水平降低,結(jié)合組降低最為明顯,對照組與各治療組之間,差異有統(tǒng)計學意義。p70S6K1蛋白中藥組和結(jié)合組有降低的趨勢,與對照組相比,僅結(jié)合組差異有統(tǒng)計學意義。對照組mTOR、AK1、TSC1蛋白的光密度值較高,藥物干預(yù)后表達水平降低。與對照組相比,mTOR蛋白中藥組和結(jié)合組的的光密度值降低明顯；AKT蛋白結(jié)合組光密度值最低,與對照組、中藥組相比,差異有統(tǒng)計學意義；中藥組、化療組TSC1蛋白光密度值較對照組降低,結(jié)合組最少,差異有統(tǒng)計學意義。7.對腫瘤微環(huán)境中非折疊蛋白反應(yīng)(UPR)的調(diào)控對照組GRP-78蛋白表達水平較高,經(jīng)藥物干預(yù)后其表達水平降低,各治療組與對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義；化療組GRP-78的表達水平最低,但各治療組之間差異無統(tǒng)計學意義。ATF-6、IRE1α、PERK對照組的光密度值最高,藥物干預(yù)后降低。ATF-6、 IRE1α蛋白結(jié)合組的光密度值最低,各治療組與對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義；PERK蛋白經(jīng)中藥干預(yù)后,蛋白的光密度值降低,聯(lián)合化療未見效果更為明顯。研究結(jié)論：扶正解毒中藥能有效抑制前胃癌荷瘤小鼠模型移植瘤的生長,減少腫瘤血管生成,同時促進腫瘤局部的血流灌注,改善腫瘤微環(huán)境的乏氧狀態(tài)。其機制可能在于通過調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細胞表型的轉(zhuǎn)化和激活,抑制TAM介導下PI3K/AKT/TSC1/Rheb/mTOR信號通路及非折疊蛋白反應(yīng)(UPR)過程,逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫抑制微環(huán)境的形成,減少微環(huán)境作用下相關(guān)促血管生成因子的表達,進而發(fā)揮調(diào)控腫瘤血管重塑的作用(如圖示一)。
【關(guān)鍵詞】：扶正解毒中藥 腫瘤相關(guān)巨噬細胞 免疫抑制微環(huán)境 血管生成
【學位授予單位】：中國中醫(yī)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R273
【目錄】：

• 中文摘要7-11
• ABSTRACT11-16
• 英文縮略語16-17
• 綜述一：扶正解毒法防治胃癌的理論基礎(chǔ)及循證依據(jù)17-22
• 1. 本虛毒聚貫穿胃癌發(fā)生發(fā)展的終始17-19
• 1.1 古代醫(yī)家對胃癌病機的描述17-18
• 1.2 胃癌患者中醫(yī)體質(zhì)的偏頗18
• 1.3 當代名老中醫(yī)對胃癌病因病機的認識18-19
• 1.4 現(xiàn)代醫(yī)學治療對胃癌病機的影響19
• 2. 扶正解毒思想防治胃癌的臨床和基礎(chǔ)研究19-21
• 2.1 扶正解毒法在胃癌臨床實踐中彰顯療效19-20
• 2.2 扶正解毒法的有效性在胃癌基礎(chǔ)研究中得到了進一步證實20-21
• 3. 展望21-22
• 綜述二：腫瘤血管生成與重塑的研究進展22-33
• 1. 腫瘤血管生成及其特點22-23
• 1.1 腫瘤血管的生成過程22
• 1.2 腫瘤血管的異常結(jié)構(gòu)和功能22-23
• 2. 腫瘤血管生成與重塑的機制23-25
• 3. 抑制血管生成與血管正�；钦{(diào)控腫瘤血管重塑的兩個方向25-26
• 4. 結(jié)語26-27
• 參考文獻27-33
• 前言33-35
• 第一部分：扶正解毒方對前胃癌荷瘤小鼠移植瘤生長與血管重塑的作用觀察35-46
• 實驗一：扶正解毒方對前胃癌荷瘤小鼠移植瘤的抑制作用觀察35-40
• 1.1 材料35-36
• 1.2 方法36-37
• 1.3 結(jié)果37-38
• 1.4 討論38-40
• 實驗二：扶正解毒方對前胃癌荷瘤小鼠移植瘤血管重塑的作用觀察40-46
• 2.1 材料40
• 2.2 方法40-41
• 2.3 結(jié)果41-44
• 2.4 討論44-46
• 第二部分 扶正解毒方對前胃癌荷瘤小鼠移植瘤血管重塑的分子機制46-73
• 實驗三：扶正解毒方對腫瘤相關(guān)巨噬細胞免疫抑制微環(huán)境的影響46-55
• 3.1 材料46-47
• 3.2 方法47-51
• 3.3 結(jié)果51-53
• 3.4 討論53-55
• 實驗四：扶正解毒方對腫瘤相關(guān)巨噬細胞促血管生成因子表達的影響55-63
• 4.1 材料55-56
• 4.2 方法56-59
• 4.3 結(jié)果59-61
• 4.4 討論61-63
• 實驗五：扶正解毒方對RHEB/MTOR/P70S6K1信號通路的調(diào)控63-69
• 5.1 材料63
• 5.2 方法63-64
• 5.3 結(jié)果64-67
• 5.4 討論67-69
• 實驗六：扶正解毒方對腫瘤微環(huán)境中非折疊蛋白反應(yīng)(UPR)的調(diào)控69-73
• 6.1 材料69
• 6.2 方法69
• 6.3 結(jié)果69-71
• 6.4 討論71-73
• 實驗結(jié)論73-74
• 參考文獻74-78
• 致謝78-79
• 研究生簡介79

【參考文獻】

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本文編號：782851