本文關(guān)鍵詞：獨(dú)一味石油醚提取物對人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞株增殖的影響及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的:1.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥?petroleum ether extract of Lamiophlomis rotate,PEELR)對Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞活性及增殖能力的影響。2.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳ca8113細(xì)胞株細(xì)胞克隆形成能力的影響。3.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳ca8113細(xì)胞株細(xì)胞凋亡的影響。4.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳π∈蟪衫w維小包L929細(xì)胞株細(xì)胞毒性的影響。5.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳ca8113細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響。6.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳ca8113細(xì)胞株細(xì)胞中BAX,Bcl-2與Casepase3的蛋白表達(dá)量的影響。方法:通過磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B,SRB)比色法、生長能力觀察、細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、Annexin V/PI雙染檢測細(xì)胞凋亡和流式細(xì)胞術(shù)來檢測Tca8113細(xì)胞株的細(xì)胞生長能力、增殖活力及凋亡比例,設(shè)置獨(dú)一味石油醚提取物(petroleum ether extract of Lamiophlomis rotate,PEELR)實(shí)驗(yàn)組、空白對照組,以博來霉素(bleomycin,BLM,10μg/mL)作為藥物對照組,以小鼠成纖維細(xì)胞L929細(xì)胞株作為細(xì)胞對照組檢測PEELR毒性。經(jīng)Hoechst/PI雙染法觀察Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞總數(shù)及凋亡、壞死細(xì)胞比例。經(jīng)細(xì)胞周期檢測分析細(xì)胞周期阻滯情況。蛋白免疫印跡法(Western blot)對Tca8113細(xì)胞中P53,BAX,Bcl-2與Casepase3蛋白表達(dá)量進(jìn)行檢測。結(jié)果:1.24 h SRB比色法和Tca8113細(xì)胞株生長曲線結(jié)果顯示:24 h的IC50=66.388μg/mL,PEELR藥物濃度與對Tca8113細(xì)胞的增殖抑制率呈正相關(guān);低濃度PEELR(25μg/m L和50μg/mL)對Tca8113細(xì)胞的生長能力與空白對照組相比無明顯差異(P0.05);中濃度PEELR(100μg/mL)和高濃度PEELR藥物(200μg/m L和400μg/m L)對Tca8113細(xì)胞株的長期增殖抑制作用與對照藥物組BLM(10μg/m L)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)2.細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)表明:隨著PEELR濃度的增大,Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞的克隆形成率(即增殖能力)逐漸減小;不同濃度PEELR藥物對Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞均有顯著的增殖抑制效果(P0.01);中濃度PEELR(100μg/m L)和高濃度PEELR藥物(200μg/m L)對Tca8113細(xì)胞株的克隆形成能力與對照藥物組BLM(10μg/m L)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.Annexin V/PI雙染細(xì)胞凋亡比例檢測顯示:PEELR可以誘導(dǎo)Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞發(fā)生凋亡;PEELR濃度與誘導(dǎo)凋亡能力呈正相關(guān);與BLM(10μg/m L)組相比,PEELR組(50μg/mL和100μg/mL)無顯著差異(P0.05);與空白對照組相比,PEELR組的Tca8113細(xì)胞系晚期凋亡和壞死發(fā)生率均有極其顯著差異(P0.01);與BLM(10μg/m L)組相比PEELR組的Tca8113細(xì)胞系晚期凋亡和壞死發(fā)生率均有顯著差異(P0.05)。而不同濃度PEELR組相比均無顯著差異(P0.05)。4.細(xì)胞毒性試驗(yàn)顯示:24 h的IC50=294.119μg/mL;低、中濃度PEELR對L929細(xì)胞系的影響與空白對照組,藥物對照組相比無明顯差異(P0.05);高濃度PEELR對L929細(xì)胞系有抑制作用,呈正相關(guān)。5.隨著PEELR藥物濃度的增加,同一視野范圍內(nèi)細(xì)胞總數(shù)呈負(fù)相關(guān),而凋亡、壞死細(xì)胞比例呈正相關(guān)。PEELR組正常細(xì)胞無明顯形態(tài)的變化,凋亡細(xì)胞可見細(xì)胞核皺縮,PEELR組凋亡細(xì)胞比率顯著大于壞死細(xì)胞比率(P0.01)。6.隨著PEELR藥物濃度的增大,其作用24 h的Tca8113細(xì)胞系細(xì)胞周期的SPF指數(shù)和PI增殖指數(shù)均減小。7.Western blt實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:BAX和Casepase-3的蛋白表達(dá)量隨PEELR藥物濃度增大而增大,Bcl-2的蛋白表達(dá)量隨PEELR藥物濃度增大而減小。PEELR各個(gè)藥物組均可以降低Bcl-2/BAX表達(dá)比率,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);Bcl-2/BAX表達(dá)比率的大小與PEELR藥物濃度呈負(fù)相關(guān);高濃度PEELR(150μg/mL、200μg/mL)組的Bcl-2/BAX表達(dá)比率小于1。結(jié)論:PEELR對體外培養(yǎng)的人舌鱗癌細(xì)胞的增殖有較好的抑制效果,且無明顯的細(xì)胞毒性。PEELR可能是通過內(nèi)源性凋亡通路,以上調(diào)BAX和Casepase-3的蛋白表達(dá)量和下調(diào)Bcl-2的蛋白表達(dá)量來引起線粒體外膜通透性增加和誘導(dǎo)細(xì)胞色素c的釋放從而發(fā)揮了抑制Tca8113細(xì)胞株增殖及誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡的作用。
【關(guān)鍵詞】：獨(dú)一味石油醚提取物 人舌鱗狀細(xì)胞癌 腫瘤細(xì)胞增 SRB比色法 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn) 流式細(xì)胞術(shù) BAX Bcl-2 Casepase3
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R29
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-12
• 第一章 藏藥獨(dú)一味的研究進(jìn)展12-20
• 1 獨(dú)一味簡介12-13
• 2 獨(dú)一味化學(xué)成分的研究概述13-16
• 2.1 黃酮類成分13
• 2.2 環(huán)烯醚萜類化合物13-14
• 2.3 苯乙醇苷類化合物14-15
• 2.4 揮發(fā)油類成分15-16
• 2.5 其它類成分16
• 3 獨(dú)一味藥理活性及臨床應(yīng)用研究概述16-19
• 3.1 鎮(zhèn)痛、抗炎作用16-17
• 3.2 止血作用17-18
• 3.3 抗菌作用18
• 3.4 提高免疫功能作用18
• 3.5 抗腫瘤作用18-19
• 3.6 毒理毒性作用19
• 4 獨(dú)一味研究小結(jié)19-20
• 第二章 獨(dú)一味石油醚提取物對人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞株增殖的影響20-36
• 1 口腔癌的現(xiàn)狀20-24
• 1.1 口腔癌的流行病學(xué)研究20-22
• 1.1.1 口腔癌的發(fā)病率跟死亡率20-21
• 1.1.2 口腔癌的生存率21
• 1.1.3 口腔癌的發(fā)病趨勢21-22
• 1.1.4 口腔癌的治療22
• 1.2 中藥及其提取物抗腫瘤的研究22-23
• 1.3 獨(dú)一味防治腫瘤的進(jìn)展23-24
• 2 材料與方法24-27
• 2.1 材料24-25
• 2.1.1 獨(dú)一味石油醚提取物的提取24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株來源24
• 2.1.3 主要試劑24-25
• 2.1.4 主要儀器和設(shè)備25
• 2.2 方法25-27
• 2.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)25-26
• 2.2.2 SRB比色法測定PEELR對Tca8113細(xì)胞株生長能力的影響26
• 2.2.3 PEELR對Tca8113細(xì)胞株生長曲線的影響26
• 2.2.4 PEELR對Tca8113細(xì)胞株克隆形成能力的影響26-27
• 2.2.5 Annexin V熒光探針和流式細(xì)胞儀檢測PEELR對Tca8113細(xì)胞凋亡的影響27
• 2.2.6 PEELR對小鼠成纖維細(xì)胞株L929細(xì)胞毒性的影響27
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27
• 3 結(jié)果27-34
• 3.1 Tca8113細(xì)胞株正常形態(tài)27-28
• 3.2 SRB比色法檢測不同濃度的PEELR和 10 μg/m L的BLM作用24 小時(shí)對Tca8113細(xì)胞系生長能力的影響28-29
• 3.3 SRB比色法檢測PEELR對Tca8113細(xì)胞系生長曲線的影響29-30
• 3.4 PEELR對Tca8113細(xì)胞系克隆形成能力的影響30-32
• 3.5 PEELR對Tca8113細(xì)胞系凋亡率的影響32-33
• 3.6 PEELR對L929細(xì)胞株細(xì)胞毒性的影響33-34
• 4 討論34-36
• 第三章 獨(dú)一味石油醚提取物對人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞株BAX、bcl-2 和Casepase3蛋白表達(dá)的影響36-50
• 1 前言36-37
• 2 材料與方法37-42
• 2.1 材料37-38
• 2.1.1 PEELR的提取37
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株來源37
• 2.1.3 主要試劑37-38
• 2.1.4 主要儀器和設(shè)備38
• 2.2 方法38-42
• 2.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)38
• 2.2.2 Hoechst/PI熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)38-39
• 2.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測PEELR對Tca8113細(xì)胞周期的影響39
• 2.2.4 Western blot法檢測PEELR藥物組Tca8113細(xì)胞BAX，Bcl-2，，Casepase-3 蛋白的表達(dá)39-41
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理41-42
• 3 結(jié)果42-47
• 3.1 Hoechst/PI熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)42-44
• 3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測PEELR對Tca8113細(xì)胞周期的影響44-45
• 3.3 Western blot法檢測PEELR藥物組Tca8113細(xì)胞株BAX、Bcl-2、Casepase-3 蛋白的表達(dá)45-47
• 3.3.1 Western blot法檢測PEELR藥物組Tca8113細(xì)胞株BAX、Bcl-2、Casepase-3 蛋白的表達(dá)45-46
• 3.3.2 PEELR藥物組Tca8113細(xì)胞株Bcl-2/ BAX蛋白表達(dá)比率的影響46-47
• 4 討論47-50
• 第四章 結(jié)論50-52
• 第五章 展望52-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 中英文對照60-61
• 在學(xué)期間主要研究成果61-62
• 病例報(bào)告62-69
• 1）病歷摘要62-63
• 2）術(shù)前準(zhǔn)備及注意事項(xiàng)63
• 3）手術(shù)過程：上頜骨部分切除術(shù)+左側(cè)舌骨上淋巴結(jié)清掃術(shù)63-64
• 4）術(shù)后管理64
• 5）出院診斷64-66
• 6）病例討論與文獻(xiàn)回顧66-69
• 1. 診斷與鑒別診斷66-68
• 2. 患者術(shù)式的選擇68-69
• 致謝69

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