本文關(guān)鍵詞：五子衍宗丸對大鼠熱激生精障礙的干預(yù)作用和機制研究

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【摘要】：目的：男性不育是現(xiàn)在臨床常見的疾病,且發(fā)病比率在逐年上升,目前已成為影響人類健康與社會發(fā)展的全球性醫(yī)學(xué)和社會問題。引起男性不育的原因很多,如精子發(fā)生或成熟障礙、輸精管梗阻、性功能障礙、附屬性腺異常、生殖道感染或免疫性因素等,其中生精障礙是最主要的原因,而睪丸局部高溫是目前公認(rèn)的對男性生殖能力有極大破壞力的關(guān)鍵因素之一。中醫(yī)認(rèn)為腎藏精,主生殖。歷代醫(yī)家認(rèn)為腎精在男性生殖中發(fā)揮重要作用,并認(rèn)為腎精的盛衰決定了男子的生育能力。腎精虧虛是引起男性生精障礙的主要原因,五子衍宗丸作為治療腎精虧虛型男性不育的經(jīng)典方,被歷代醫(yī)家盛譽為“古今種子第一方”。目前五子衍宗丸的臨床應(yīng)用及動物實驗療效確切,然而對于五子衍宗丸改善生精功能的作用機制尚不明確,通過探索其改善男性生精障礙的作用機制以期為臨床男性不育的防治提供新的靶點和思路。本課題以大鼠睪丸局部熱激(43℃,20min)制備生精障礙模型,探討五子衍宗丸對熱激生精障礙的干預(yù)作用,并深入研究其干預(yù)機制,以期為臨床男性不育的防治提供新的靶點和思路。方法：1.35只60天齡雄性Wistar大鼠隨機分為五組：對照組、模型組、五子衍宗丸低劑量組、五子衍宗丸中劑量組、五子衍宗丸高劑量組,五子衍宗丸低、中、高劑量組每天分別給予418 mg/kg、836 mg/kg、1672 mg/kg劑量五子衍宗丸溶液灌胃,對照組和模型組給予同等體積的去離子水,連續(xù)灌胃15天后造模。腹腔注射10%的水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉,之后將大鼠睪丸置于43℃(對照組22℃)恒溫水浴鍋內(nèi)局部熱激20min,熱激后30min取材,并稱取睪丸重量。2.放射免疫分析法檢測大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)和睪酮(T)的水平。3.免疫組織化學(xué)法檢測大鼠睪丸組織中Ki67的表達(dá)分布。4.DNA斷裂的原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測生精細(xì)胞凋亡。5.透射電子顯微鏡觀察曲細(xì)精管超微結(jié)構(gòu)的變化。6.蛋白印跡法(Western Blot)檢測睪丸組織中Akt、p-Akt、CK-18、AR、EPO及EPOR蛋白表達(dá)量的變化。結(jié)果：實驗一：五子衍宗丸各劑量組與模型組、對照組比較血清FSH和LH均沒有明顯差異。熱激后模型組的血清T水平降低,但與對照組比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；五子衍宗丸各劑量組與模型組相比,血清T水平升高,其中五子衍宗丸低劑量組升高明顯(P0.05),五子衍宗丸中劑量組最接近于對照組。對照組大鼠曲細(xì)精管內(nèi)少見凋亡陽性細(xì)胞,各細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞之間連接緊密,且Ki67蛋白陽性細(xì)胞較多。熱激后模型組大鼠曲細(xì)精管內(nèi)可見大量凋亡陽性細(xì)胞,出現(xiàn)大量空泡,曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)疏松,并且Ki67蛋白陽性細(xì)胞急劇減少,睪丸重量顯著降低(P0.01)；而與模型組相比,五子衍宗丸各劑量組大鼠曲細(xì)精管內(nèi)凋亡陽性細(xì)胞減少(其中尤以五子衍宗丸中劑量組大鼠曲細(xì)精管內(nèi)凋亡陽性細(xì)胞減少更明顯),各細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)基本完整,且Ki67蛋白陽性細(xì)胞顯著增多(其中尤以五子衍宗丸低、中劑量組大鼠曲細(xì)精管內(nèi)Ki67蛋白陽性細(xì)胞增多更明顯),睪丸重量都顯著提高(P0.01)。實驗二：Western Blot結(jié)果表明,模型組睪丸組織中p-Akt蛋白的相對表達(dá)量在熱激后顯著降低(P0.01)；而與模型組相比,五子衍宗丸中劑量組睪丸組織中p-Akt蛋白的相對表達(dá)量提高(P0.05)。CK-18的結(jié)果表明,對照組睪丸組織中很少見CK-18蛋白表達(dá)；熱激后模型組睪丸組織中CK-18蛋白的相對表達(dá)量顯著增加(P0.01)；而與模型組相比,五子衍宗丸各劑量組睪丸組織中CK-18蛋白的相對表達(dá)量顯著降低(P0.01)。AR的結(jié)果表明,對照組睪丸組織中AR蛋白表達(dá)明顯；模型組睪丸組織中AR蛋白的相對表達(dá)量在熱激后顯著降低(P0.01)；而與模型組相比,五子衍宗丸低劑量組與中劑量組睪丸組織中AR蛋白的相對表達(dá)量顯著升高(P0.01)。EPO結(jié)果表明,熱激后模型組睪丸組織中EPO蛋白的相對表達(dá)量顯著降低(P0.01),而與模型組相比,五子衍宗丸各劑量組睪丸組織中EPO蛋白的相對表達(dá)量顯著提高(P0.01)。EPOR結(jié)果表明,熱激后模型組睪丸組織中EPOR蛋白的相對表達(dá)量沒有顯著變化；而與模型組相比,五子衍宗丸各劑量組睪丸組織EPOR蛋白的相對表達(dá)量顯著提高(P0.01)。結(jié)論：1.五子衍宗丸可有效地預(yù)防熱激引起的大鼠生精細(xì)胞凋亡,改善曲細(xì)精管超微結(jié)構(gòu)病理變化,并保護(hù)熱激條件下生精細(xì)胞的增殖活性。2.五子衍宗丸可能通過刺激促紅細(xì)胞生成素(EP0)及其受體,使其表達(dá)增加,從而調(diào)控AR與T的表達(dá),促進(jìn)支持細(xì)胞分化和生精細(xì)胞增殖,有效地預(yù)防熱激造成的生精細(xì)胞凋亡與曲細(xì)精管超微結(jié)構(gòu)病理變化,從而保護(hù)睪丸功能,改善熱激生精障礙,而此過程可能與Akt信號通路密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：促紅細(xì)胞生成素 熱激 生精障礙 五子衍宗丸
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R277.5
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 符號說明12-13
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述13-37
• 綜述一 五子衍宗丸的研究進(jìn)展13-20
• 1 五子衍宗丸的藥理研究13-14
• 2 五子衍宗丸的臨床研究14-16
• 3 結(jié)語16-17
• 參考文獻(xiàn)17-20
• 綜述二 睪丸溫度升高對精子發(fā)生的影響20-31
• 1 睪丸溫度調(diào)節(jié)系統(tǒng)20
• 2 導(dǎo)致睪丸溫度升高的主要因素20-22
• 3 睪丸溫度升高可導(dǎo)致生精細(xì)胞凋亡22-24
• 4 睪丸溫度升高可抑制精原細(xì)胞增殖24-25
• 5 結(jié)語25-26
• 參考文獻(xiàn)26-31
• 綜述三 促紅細(xì)胞生成素的研究進(jìn)展31-37
• 1 抗炎作用31
• 2 抗凋亡作用31-32
• 3 抗氧化應(yīng)激作用32
• 4 免疫調(diào)節(jié)作用32-33
• 5 結(jié)語33-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 前言37-39
• 第二部分 實驗研究39-64
• 實驗一 五子衍宗丸對大鼠熱激生精障礙干預(yù)作用的研究39-54
• 1 材料39-40
• 2 方法40-46
• 3 結(jié)果46-51
• 4 小結(jié)51-52
• 5 討論52-54
• 實驗二 五子衍宗丸對大鼠熱激生精障礙干預(yù)機制的研究54-64
• 1 材料54-55
• 2 方法55-58
• 3 結(jié)果58-61
• 4 小結(jié)61-62
• 5 討論62-64
• 結(jié)語64-65
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 附錄70-71
• 致謝71-72
• 在校期間主要研究成果72-73
• 個人簡歷73

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1 王丹紅,應(yīng)芳芹,姜占波;五子衍宗丸治療精子減少性不孕癥32例臨床分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2000年01期

2 陳淑濤;五子衍宗丸臨床應(yīng)用及研究[J];四川中醫(yī);2001年04期

3 權(quán)玉郁;五子衍宗丸在婦科病中應(yīng)用[J];陜西中醫(yī);2002年05期

4 趙良倩,路振華,王廣霞;五子衍宗丸婦科新用[J];天津中醫(yī)藥;2003年01期

5 周件貴;羅杰英;;五子衍宗丸及加味方的臨床應(yīng)用和研究近況[J];中成藥;1990年10期

6 ;五子衍宗丸可護(hù)肝[J];江蘇中醫(yī);1994年05期

7 劉利國;五子衍宗丸的研究進(jìn)展[J];中醫(yī)藥信息;1994年01期

8 劉興文;五子衍宗丸治療男性病的近況[J];時珍國藥研究;1996年02期

9 陳立富;五子衍宗丸的臨床應(yīng)用[J];甘肅中醫(yī);1997年04期

10 張貴林,楊純,任光友,鐘恒亮,盧素琳;五子衍宗丸藥理學(xué)研究[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1998年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 周建國;曹永剛;王家輝;;五子衍宗丸治療男性不育癥古今初探[A];第5次全國中西醫(yī)結(jié)合男科學(xué)術(shù)會議論文匯編暨男科提高班講義[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 楊國秀;五子衍宗丸新用[N];民族醫(yī)藥報;2004年

2 楊國秀;婦科亦可用五子衍宗丸[N];中國醫(yī)藥報;2005年

3 本報記者 洪天語;五子衍宗丸徘徊岔道口上[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2004年

4 湖北遠(yuǎn)安縣中醫(yī)院 胡獻(xiàn)國;五子衍宗丸：古今種子第一方[N];中國中醫(yī)藥報;2014年

5 四川省達(dá)州市綠洲健康中心 歐陽軍;五子衍宗丸臨床新用[N];中國中醫(yī)藥報;2014年

6 楊桂芬;五子衍宗丸加味治療不育癥[N];中國醫(yī)藥報;2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 曹勝;補腎對凍存后自體移植小鼠卵巢功能影響的研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 秦茂;基于支持細(xì)胞線粒體自噬途徑研究五子衍宗丸改善生精功能機理[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 張婷婷;五子衍宗丸對大鼠熱激生精障礙的干預(yù)作用和機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 陳立華;五子衍宗丸治療男性不育的臨床及實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

4 楊超偉;中藥方劑—五子衍宗丸對腎虛精虧證大鼠睪丸支持細(xì)胞分泌功能的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

5 張圣強;五子衍宗丸含藥血清對大鼠睪丸支持細(xì)胞分泌產(chǎn)物和活力的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

6 高國政;加味五子衍宗丸對腎陽虛證大鼠生殖功能影響的實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

7 欒曉靜;五子衍宗丸中枸杞子、五味子的顯微定量研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2007年

8 王麗君;五子衍宗丸對幼年雄性大鼠睪丸Ki67、AR表達(dá)以及性激素的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

9 張秀平;五子衍宗丸對腎精虧虛證大鼠Cox7a2及Claudin-11表達(dá)的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

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本文編號：626650