本文關鍵詞：美洲大蠊提取物對實驗性潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用及機理探討

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【摘要】：潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC)是一種發(fā)病原因尚未完全明確、病程遷延的慢性非特異性結(jié)直腸炎癥,是消化系統(tǒng)常見的難治性疾病。近年來,國內(nèi)外UC的發(fā)病率快速增長,相關的治療藥物也成了學者研究的熱點。目前,臨床上治療UC常配合中藥口服或灌腸,這不僅可以提高療效、減少復發(fā)率,而且還可以減少西藥用量及減輕長期服用的副作用。美洲大蠊(Periplaneta americana L.)為我國傳統(tǒng)的動物類中藥,具有通利血脈之功效。近年來,以美洲大蠊為原料制成的制劑在防治消化系統(tǒng)疾病方面效果顯著,如放射性食管炎、急性糜爛性胃炎、潰瘍性結(jié)腸炎等各類消化性潰瘍,但對其作用機理的相關報道和基礎研究甚少。因此,本試驗首先以美洲大蠊乙醇提取物為研究對象,通過動物試驗探討其對UC的治療作用,并探討對UC時細菌易位的干預作用;其次進一步以美洲大蠊乙醇提取物及其各極性部位為研究對象,分別探討各極性部位對成纖維細胞功能、免疫活性的影響,以期闡明抗UC的機理。主要研究內(nèi)容結(jié)果如下:(1)美洲大蠊乙醇提取物化學成分分析結(jié)果:多肽(17.59 mg/g)、氨基酸(5.75mg/g)、多元醇(11.60 mg/g)、粘糖氨酸(4.65 mg/g)、尿嘧啶(0.189 mg/g)。(2)以2,4-二硝基氯苯+乙酸復合法建立的UC大鼠為模型,探討美洲大蠊乙醇提取物抗UC的療效。將42只SD大鼠隨機分為6組(n=7):正常對照組、模型組、美洲大蠊提取物三組(20,40,80 mg/kg)、柳氮磺胺吡啶(SASP)組。造模完成次日,給予藥物干預,連續(xù)給藥10 d。每天記錄大鼠體重、大便性狀,并計算疾病活動指數(shù)(DAI)。實驗結(jié)束后,解剖收集肛門以上約3 cm處的直腸,用于MPO水平及病理學檢測,結(jié)果表明:美洲大蠊提取物能降低大鼠DAI、減輕腸道炎癥指標水平并且能夠改善上皮細胞缺損、腺體破壞、杯狀細胞消失、炎細胞浸潤等病理變化。(3)以綠色熒光蛋白標記并且耐氨芐西林的大腸桿菌為示蹤菌,結(jié)合動物模型,研究美洲大蠊提取物對UC大鼠細菌易位的干預作用。將24只無抗藥性的UC模型大鼠連續(xù)給藥4 d,同時灌服示蹤菌,每天一次。實驗結(jié)束后,解剖收集大鼠結(jié)腸、腸系膜淋巴結(jié)、肝、脾、腎。結(jié)果表明:與模型組相比,美洲大蠊提取物高劑量組(80 mg/kg)能顯著降低UC大鼠腸道細菌易位率(p0.05)。(4)從細胞水平探討美洲大蠊提取物及其各極性部位對NIH3T3成纖維細胞功能的影響。采用MTT法檢測不同濃度PAE及各極性部位對NIH3T3細胞增殖的影響,其中PAE終濃度為250μg/m L時,促增殖作用達到高峰。采用羥脯氨酸試劑盒測定藥物對細胞膠原合成的影響,結(jié)果表明PAE對膠原蛋白合成具有促進作用�？捡R斯亮藍測定細胞總蛋白合成,結(jié)果表明PAE能夠促進細胞總蛋白的合成。劃痕實驗表明PAE能使較多的細胞進入創(chuàng)口模型,加速細胞愈合速度,促進細胞的遷移。(5)以環(huán)磷酰胺(80 mg/kg)誘導的免疫力低下小鼠為模型,研究美洲大蠊提取物及其各極性部位對機體免疫功能的影響。結(jié)果表明:BuOH部位能夠提高胸腺和脾臟指數(shù),并對小鼠的細胞免疫和體液免疫有較好的激活作用,可見美洲大蠊具有較好的免疫調(diào)節(jié)作用,以Bu OH部位活性最好。
【關鍵詞】：美洲大蠊 潰瘍性結(jié)腸炎 細菌易位 成纖維細胞 免疫調(diào)節(jié)
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R259
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 縮寫注釋7-12
• 第一章 緒論12-26
• 1.1 美洲大蠊的研究概況12-19
• 1.1.1 美洲大蠊藥材簡介12
• 1.1.2 美洲大蠊化學成分研究12-17
• 1.1.3 美洲大蠊藥理活性17-18
• 1.1.4 美洲大蠊的毒性與安全性18-19
• 1.2 潰瘍性結(jié)腸炎（UC）的研究概況19-23
• 1.2.1 UC的臨床表現(xiàn)19
• 1.2.2 UC的發(fā)病機理19-20
• 1.2.3 UC的藥物治療20-23
• 1.3 細菌易位與腸黏膜屏障23-24
• 1.4 本論文的研究背景、意義24-25
• 1.5 本論文的研究內(nèi)容25-26
• 第二章 美洲大蠊提取物化學成分的研究26-37
• 2.1 材料26-27
• 2.1.1 儀器設備26
• 2.1.2 藥品與試劑26-27
• 2.2 方法27-32
• 2.2.1 美洲大蠊提取物（PAE）的制備27
• 2.2.2 PAE的分步萃取27-28
• 2.2.3 TLC鑒別28
• 2.2.4 含量測定28-32
• 2.3 結(jié)果32-36
• 2.3.1 提取物浸膏得率32-33
• 2.3.2 PAE的TLC鑒別33
• 2.3.3 PAE各極性部位中多肽含量33-34
• 2.3.4 PAE各極性部位中游離氨基酸含量34
• 2.3.5 PAE各極性部位中多元醇含量34
• 2.3.6 PAE各極性部位中粘糖氨酸含量34-35
• 2.3.7 PAE各極性部位中尿嘧啶含量35
• 2.3.8 PAE及各極性部位中各成分含量的匯總表35-36
• 2.4 本章小結(jié)36-37
• 第三章 美洲大蠊提取物對UC大鼠的療效研究37-45
• 3.1 材料37-38
• 3.1.1 實驗動物37-38
• 3.1.2 實驗試劑38
• 3.1.3 主要儀器設備38
• 3.1.4 主要溶液配制38
• 3.2 方法38-41
• 3.2.1 動物模型的復制方法38
• 3.2.2 實驗劑量的確定38-39
• 3.2.3 供試藥物的制備39
• 3.2.4 分組處理39
• 3.2.5 觀察指標39-41
• 3.3 統(tǒng)計學分析41
• 3.4 結(jié)果41-44
• 3.4.1 各組大鼠的一般狀態(tài)41-42
• 3.4.2 肉眼觀察各組大鼠直腸組織42-43
• 3.4.3 光學顯微鏡觀察（HE染色）各組大鼠直腸組織43-44
• 3.4.4 直腸MPO活性44
• 3.5 本章小結(jié)44-45
• 第四章 美洲大蠊提取物對UC大鼠細菌易位的干預45-50
• 4.1 材料46
• 4.1.1.實驗動物46
• 4.1.2 示蹤菌46
• 4.1.3 實驗試劑46
• 4.1.4 主要儀器46
• 4.1.5 主要溶液配制46
• 4.2 方法46-47
• 4.2.1 動物模型的復制方法46-47
• 4.2.2 實驗劑量的確定及供試藥物的制備47
• 4.2.3 分組處理47
• 4.2.4 觀察指標47
• 4.3 統(tǒng)計學分析47-48
• 4.4 結(jié)果48-49
• 4.4.1 大鼠體重變化48
• 4.4.2 細菌培養(yǎng)及鑒定48-49
• 4.4.3 腸道細菌易位率及組織細菌含量49
• 4.5 本章小結(jié)49-50
• 第五章 美洲大蠊提取物對NIH3T3成纖維細胞功能的影響50-58
• 5.1 主要儀器與試劑50-52
• 5.1.0 儀器50
• 5.1.1 試劑50
• 5.1.2 主要試劑的配置50-51
• 5.1.3 細胞培養(yǎng)51
• 5.1.4 供試藥物的制備51-52
• 5.2 方法52-53
• 5.2.1 最佳接種濃度確定52
• 5.2.2 最佳培養(yǎng)時間的確定52
• 5.2.3 細胞增殖的測定52
• 5.2.4 膠原合成量的測定（羥脯氨酸試劑盒法）52-53
• 5.2.5 細胞總蛋白含量測定（考馬斯亮藍染色法）53
• 5.2.6 體外細胞遷移能力53
• 5.3 統(tǒng)計學處理53-54
• 5.4 結(jié)果54-57
• 5.4.1 最佳接種濃度的確定54
• 5.4.2 最佳培養(yǎng)時間的確定54-55
• 5.4.3 PAE各極性部位對NIH3T3增殖的影響55
• 5.4.4 PAE各極性部位對NIH3T3膠原合成的影響55-56
• 5.4.5 PAE各極性部位對NIH3T3總蛋白含量的影響56
• 5.4.6 PAE對NIH3T3遷移的影響56-57
• 5.5 本章小結(jié)57-58
• 第六章 美洲大蠊提取物對免疫低下小鼠的免疫增強作用58-66
• 6.1 實驗儀器與試劑58-60
• 6.1.1 儀器58-59
• 6.1.2 試劑59
• 6.1.3 實驗動物59
• 6.1.4 相關溶液的配置59-60
• 6.2 實驗方法60-62
• 6.2.1 實驗劑量的確定及供試藥物的制備60
• 6.2.2 實驗分組與給藥60
• 6.2.3 相關考察指標60-62
• 6.3 統(tǒng)計學處理62
• 6.4 實驗結(jié)果與分析62-65
• 6.4.1 PAE各極性部位對小鼠體重的影響62-63
• 6.4.2 PAE各極性部位對小鼠免疫器官重量的影響63
• 6.4.3 PAE各極性部位對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響63-64
• 6.4.4 PAE各極性部位對小鼠淋巴細胞增殖的影響64
• 6.4.5 PAE各極性部位對小鼠血清溶血素水平的影響64-65
• 6.5 本章小結(jié)65-66
• 第七章 全文總結(jié)與展望66-68
• 7.1 主要結(jié)論66
• 7.2 創(chuàng)新點66-67
• 7.3 展望67-68
• 參考文獻68-77
• 致謝77-78
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文78

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