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  本文關(guān)鍵詞：銀杏葉，銀杏葉提取物及其注射液中化學(xué)成分及酚酸含量的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《北京中醫(yī)藥大學(xué)》 2013年

銀杏葉，銀杏葉提取物及其注射液中化學(xué)成分及酚酸含量的研究

陳晶  

【摘要】：銀杏葉及其制劑在臨床上得到越來越廣泛的應(yīng)用,但目前對其質(zhì)量的控制集中在銀杏內(nèi)酯,黃酮醇苷和銀杏酸,約有70%的成分尚未得到明確及控制,特別對于極性大的成分研究較少。對于黃酮醇苷類成分的控制標準是以水解測定苷元槲皮素,異鼠李素,山柰素的總量來折算黃酮醇苷的含量,不能準確反映原型成分的真實含量。針對以上問題,對銀杏葉提取物進行分離,在極性大的部分分離得到5個酚酸類化合物,并對銀杏葉、銀杏葉提取物及其注射液中4個酚酸化合物進行了含量分析；富集制備了4個具有特征性的黃酮醇苷類化合物,對6個黃酮醇苷化合物進行了標定；在小極性部分分離純化了4個雙黃酮類化合物,并在銀杏葉注射液指紋圖譜上進行了指認。 1化合物的提取分離 利用硅膠,羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20),反相硅膠,微孔樹脂(MCI),制備液相等色譜技術(shù),從銀杏葉及其提取物中分離得到14個化合物,經(jīng)過核磁共振波譜(NMR)和質(zhì)譜(MS)分析,確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)為5個酚酸類化合物：對羥基苯甲酸,間羥基苯甲酸,原兒茶酸,沒食子酸,6-羥基犬尿喹啉酸(6-HKA),其中沒食子酸和間羥基苯甲酸為首次自銀杏葉中分離得到；5個為黃酮醇類化合物：槲皮素-3-0-葡萄糖苷,山柰酚-3-0-蕓香糖苷,異鼠李素-3-0-蕓香糖苷,山柰酚-3-0-鼠李糖-2-葡萄糖苷,槲皮素；4個為雙黃酮類化合物：銀杏雙黃酮,異銀杏雙黃酮,去甲銀杏雙黃酮和金松雙黃酮。其中4個黃酮醇苷類單體富集總量在300mg以上 2銀杏葉、銀杏葉提取物及其注射液中4個酚酸類化合物的含量測定 建立了銀杏葉、銀杏葉提取物及其注射液中4個酚酸類化合物(沒食子酸,原兒茶酸,對羥基苯甲酸,間羥基苯甲酸)的高效液相色譜(HPLC)含量測定方法。采用Thermo Syncronis C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),以0.1%磷酸-乙腈(A)為流動相梯度洗脫(0～8min,5.7%A;9～45min,6.7%A),流速為1mL·min-1,檢測波長為切換波長(0～30min,260nm;30～45min,234nm),柱溫35℃。經(jīng)方法學(xué)考察,線性關(guān)系良好,精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的相對標準偏差(RSD)均小于1.95%；對于準確度,銀杏葉中待測物的RSD小于2.10%,注射液,銀杏葉提取物的RSD小于1.87%,平均回收率均在98.45～102.11%之間。采用上述方法,對所收集到的銀杏葉提取物及注射液樣品中4個酚酸的含量進行測定。 36個黃酮醇苷類化合物的標定 對分離得到的4個黃酮醇苷和實驗室中的2個黃酮醇苷進行標定。通過解析其UV. NMR.MS數(shù)據(jù)確證化合物結(jié)構(gòu)。用硅膠和聚酰胺薄層色譜進行純度檢查。采用HPLC方法,選取Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm,5μm)和Phenomenex Gemini C18(250mm×4.6mm,5μm)兩種色譜柱以不同梯度進行洗脫,以二極管陣列檢測器(DAD)進行檢測,按峰面積歸一化法進行計算。槲皮素-3-0-葡萄糖苷,山柰酚-3-0-蕓香糖苷,異鼠李素-3-0-蕓香糖苷,山柰酚-3-0-鼠李糖-2-葡萄糖苷,槲皮素-3-0-鼠李糖-2-0-(6-0-對羥基反式桂皮酰)葡萄糖苷,山柰酚-3-0-鼠李糖-2-0-(6-0-對羥基反式桂皮酰)葡萄糖苷的測定結(jié)果分別為95.8,98.7,97.1,97.4,96.4,94.3%。 4銀杏葉注射液指紋圖譜的完善 用分離得到的酚酸和雙黃酮類化合物在銀杏葉注射液指紋圖譜上進行色譜峰的指認。采用Agilent Zorbax Eclipse Plus C18色譜柱(50mm×4.6mm,1.8μm),以0.4%磷酸-乙腈(A)為流動相梯度洗脫(0～12min,14%A；17min,16A；24min,20%A,26～40min,21%A),流速為0.6mL·min-1,檢測波長為360nm,柱溫40℃。在該色譜條件下,酚酸類化合物保留時間在前3mi n,雙黃酮類化合物保留時間在36min后。3-30min的黃酮醇苷類化合物已得到識別。通過對酚酸與雙黃酮的定性研究,從而完善銀杏葉的指紋圖譜。 上述研究結(jié)果豐富了銀杏葉及其制劑的研究內(nèi)容,擴大了質(zhì)量控制范圍,完善了質(zhì)量內(nèi)容,為保障銀杏葉及其制劑的質(zhì)量穩(wěn)定提供了科學(xué)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R284.2
【目錄】：

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1 陳晶;銀杏葉，銀杏葉提取物及其注射液中化學(xué)成分及酚酸含量的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

2 楊芳;銀杏葉提取物體外抗乙型肝炎病毒分泌抗原的作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

3 孫微;腦缺血—再灌注損傷時MMP-9的表達及銀杏葉的干預(yù)作用[D];吉林大學(xué);2006年

4 王英麗;銀杏葉提取物抗輻射作用的實驗研究[D];吉林大學(xué);2006年

5 梁潔;銀杏葉提取物微丸的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

6 陳三妹;銀杏葉提取物對糖尿病大鼠腎臟保護作用[D];浙江大學(xué);2006年

7 王雪;銀杏葉制劑對青光眼術(shù)后視神經(jīng)保護作用的臨床研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2006年

8 鄭欣;銀杏葉提取物對糖尿病大鼠腎小管上皮—間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化的影響與機制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

9 張允;鋰-匹羅卡品癲癇大鼠小腦中膠質(zhì)細胞反應(yīng)性觀察及銀杏葉提取物干預(yù)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

10 陳淑萍;銀杏葉提取物（EGb761）預(yù)處理對兔移植肺缺血再灌注損傷保護作用的研究[D];浙江大學(xué);2006年

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