本文關(guān)鍵詞：五株不同來源海洋微生物胞外多糖分離純化及結(jié)構(gòu)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國海洋大學》 2014年

五株不同來源海洋微生物胞外多糖分離純化及結(jié)構(gòu)研究

單紀苗  

【摘要】：海洋微生物資源豐富，生存環(huán)境多種多樣。海洋微生物依據(jù)分離菌的生境來源可分為海水、海洋沉積物、共棲、共生和深海菌群。本文主要從五種不同生境來源海洋微生物發(fā)酵液中提取分離得到胞外多糖，對其進行分離純化和理化性質(zhì)分析，并對其中兩株放線菌和一株真菌所產(chǎn)胞外多糖的結(jié)構(gòu)進行了進一步解析。研究結(jié)果如下： 1．從紅樹林根泥來源放線菌Saccharopolyspora sp.發(fā)酵液中提取分離得到胞外多糖粗品，經(jīng)Q Sepharose Fast Flow陰離子交換柱和Sephacryl S-100凝膠柱進行分離純化，將多糖分別按極性和分子量大小進行分離，主要得到兩種多糖組分SSW1-1和SSW2-1，分子量分別為17.0kDa和12.7kDa，，單糖組成幾乎全部為Man。多糖經(jīng)甲基化衍生后進行GC-MS分析以判斷糖苷鍵連接方式；通過1D、2D NMR對不同糖殘基間連接順序進行研究，結(jié)果表明SSW1-1主鏈主要由→2)-α-Manp-(1→和少量→6)-α-Manp-(1→組成，在→2)-α-Manp-(1→的C-6位存在大量α-1,2或α-1,3連接的甘露四糖以及末端甘露糖分支。通過DPPH自由基清除活性評價表明，SSW1-1和SSW2-1具有較好的抗氧化活性，兩者EC50值分別為2.4mg/mL和2.2mg/mL。 2.從膠州灣海泥來源放線菌Streptomyces sp.發(fā)酵液中提取得到的胞外多糖粗品，經(jīng)Q Sepharose Fast Flow陰離子交換柱和Sephacryl S-100凝膠柱進行分離純化，主要得到胞外多糖組分CHQ2-1，分子量為30.7kDa。單糖組成分析表明該多糖主要含Man，是一種純度較高的甘露聚糖。經(jīng)部分酸水解、GC-MS分析及1D、2D NMR分析表明，CHQ2-1多糖主鏈主要由→2)-α-Manp-(1→和→6)-α-Manp-(1→兩種糖殘基組成，在→6)-α-Manp-(1→殘基的C-2位存在α-1,2或α-1,3連接的含有1-3個甘露糖殘基的側(cè)鏈。通過DPPH自由基清除活性評價表明，CHQ2-1的EC50值為6.6mg/mL，抗氧化活性不明顯。 3.從海綿來源真菌Apiospora montagnei發(fā)酵液中提取得到胞外多糖，經(jīng)QSepharose Fast Flow陰離子交換柱進行分離純化，得到三種多糖組分HDN1、HDN2和HDN3，再經(jīng)Sephacryl S-100凝膠柱進行進一步分離純化，對其中得率較高的組分HDN2-1進行進一步的研究。HDN2-1總糖含量為92.3%，HPGPC法分析顯示該組分呈單一對稱峰，分子量為14.7kDa。HPLC分析表明HDN2-1主要由Man、Gal和Rha組成，摩爾比為7.6：6.3：1.0。甲基化后分析表明HDN2-1由多種連接方式構(gòu)成，包括Manp-(1→，Galf-(1→，→2)-Manp-(1→，→5)-Galf-(1→，→6)-Manp-(1→，→2,6)-Manp-(1→以及少量末端Rhap(1→。對HDN2-1進行部分酸水解，所得樣品HDN-P主要由→2)-Manp-(1→和→6)-Manp-(1→兩種糖殘基構(gòu)成，且為直鏈結(jié)構(gòu)。通過對降解前后樣品的甲基化分析結(jié)果進行對比，可以推測HDN2-1結(jié)構(gòu)以→2)-Manp-(1→和→6)-Manp-(1→為主鏈，在→6)-Manp-(1→的C-2位存在由→5)-Galf-(1→構(gòu)成的分支，以及少量末端甘露糖、半乳糖和鼠李糖。HDN2-1是一種結(jié)構(gòu)新穎的胞外多糖。 4.從廣東海綿共附生真菌MXH-82和廣西英羅灣紅樹林植物木蘭根泥的真菌Aspergillus flavus發(fā)酵液中分離得到兩種真菌胞外多糖MX和HS，分別采用Q SepharoseFast Flow陰離子交換柱和Sephacryl S-100凝膠柱對兩種多糖進行分離純化，得到五種胞外多糖組分MX1-1、MX2-1、MX3-1、HS1-1和HS2-1。MX1-1、MX2-1和MX3-1分子量依次為18.2kDa，11.4kDa，24.7kD，單糖組成主要為Man和Gal，以及少量Glc和GlcN，其中MX2-1和MX3-1還含有少量GlcUA。 HS1-1和HS2-1分子量分別為7.7kDa和16.2kDa，單糖組成主要為Man、Glc、Gal，且都含有少量的GlcN。 本論文的研究成果為我國海洋糖庫的建設(shè)提供了結(jié)構(gòu)新穎的海洋多糖，為微生物多糖構(gòu)效關(guān)系研究及微生物資源的開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R284
【目錄】：

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