發(fā)布時間：2017-05-29 10:01

  本文關鍵詞：通過對HK-2細胞的EMT機制探討化瘀降濁湯對梗阻性腎病研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的：1、采用分子生物學的技術,研究化瘀降濁湯對腎小管上皮細胞(HK-2) EMT相關形態(tài)、分子標記、浸潤能力及TGF-β/Smad信號通路活性的影響。2、揭示化瘀降濁湯抑制HK-2細胞EMT和抗腎小管纖維化的分子機制。研究意義：1、證實化瘀降濁湯通過抑制TGF-β/Smad信號通路逆轉HK-2細胞EMT,具有抗腎小管纖維化作用。2、深入探討化瘀降濁湯的治療梗阻性腎病的生物學特征,為中醫(yī)藥治療梗阻性腎病提供可借鑒的治療方法。研究方法：1、化瘀降濁湯對TGF-β誘導的HK-2細胞形態(tài)學的研究：顯微鏡下直接觀察細胞外觀,判斷化瘀降濁湯對HK-2細胞形態(tài)影響。2、化瘀降濁湯對TGF-β誘導的HK-2細胞浸潤能力的研究：將不同濃度的化瘀降濁湯處理的腎小管上皮細胞在Matrigel transwell小室中培養(yǎng)后,通過穿透Matrigel的細胞數(shù)量,比較各組間浸潤能力的差異。3、化瘀降濁湯對TGF-β誘導的HK-2細胞EMT特征性分子標記的影響：用不同濃度化瘀降濁湯處理誘導后HK-2細胞,通過RT-PCR檢測HK-2細胞E-cadherin mRNA. Snail mRNA、a-SMA mRNA、FSP-1 mRNA表達：通過Western blot檢測E-cadherin、 Snail、a-SMA、FSP-1等蛋白的表達。4、化瘀降濁湯通過抑制TGF-β/Smad信號通路逆轉HK-2細胞EMT的體外研究：通過RT-PCR檢測HK-2細胞α-SMAmRNA、Snail mRNA、E-cadherin mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA表達；通過Western blot檢測E-cadherin. Smad2、 Smad7、α-SMA、Smad3、Snail等蛋白的表達。研究結果：1、化瘀降濁湯能夠抑制TGF-β誘導的HK-2細胞增殖,并隨著濃度增加,抑制率增加,根據(jù)統(tǒng)計結果,運用MTT比色法得出IC50為472.017 μg/ml,為便于計算取500 u g/ml。低劑量取取1/2倍值250μg/ml,高劑量取2倍值1000 μ g/ml。2、Transwell遷移實驗結果顯示：誘導組(255.89±15.726)與正常組(25.72+5.976)比較,具有顯著的統(tǒng)計學意義(P0.01),說明HK-2細胞發(fā)生EMT的模型成功：高劑量(155.39±20.201)與誘導組(255.89±15.726)比較,具有顯著的統(tǒng)計學意義(P0.01)。3、RT-PCR結果顯示：對于FSP-1 mRNA、α-SMA mRNA、E-cadherin mRNA、Snail mRNA表達,高劑量組與誘導組比較時,有顯著性統(tǒng)計學意義(P0.01); Western Blot結果顯示：對于FSP-1、α-SMA、E-cadherin、Snail蛋白的表達,高劑量組與誘導組比較時,有顯著性統(tǒng)計學意義(P0.01)。4、通過多因素方差分析,RT-PCR結果顯示：α-SMA mRNA、Snail mRNA、E-cadherin mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA的表達,在48h時,高劑量組較誘導組比較時,兩者有顯著性統(tǒng)計學意義(P0.01)；Western Blot結果顯示：α-SMA、Snail、E-cadherin、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表達,在48h時,高劑量組組較誘導組比較時,兩者有顯著性統(tǒng)計學意義(P0.01)。結論及意義：TGF-β能夠誘導的HK-2細胞發(fā)生EMT,化瘀降濁湯能夠在抑制TGF-β誘導HK-2發(fā)生EMT后的細胞增殖,呈現(xiàn)出一定的量效關系；Transwell實驗結果顯示化瘀降濁湯能夠抑制TGF-β誘導的HK-2細胞浸潤能力；化瘀降濁湯能夠抑制TGF-β誘導的HK-2細胞發(fā)生EMT后α-SMA、Snail、FSP-1蛋白的表達,增加E-cadherin蛋白的表達；化瘀降濁湯能增加TGF-β誘導的HK-2細胞TGF-β/Smad信號通路中E-cadherin、 Smad2、Smad7蛋白及基因表達,減少α-SMA、Smad3、Snail蛋白以及基因表達,隨著時間改變有差異。表明化瘀降濁湯可能是通過調(diào)節(jié)HK-2細胞中的由TGF-β/Smad信號介導的EMT達到抑制甚至逆轉腎小管上皮細胞轉分化。因此化瘀降濁湯保護腎功能的機制可能是通過調(diào)控上述途徑實現(xiàn)。
【關鍵詞】：梗阻性腎病 化瘀降濁湯 上皮間質(zhì)轉分化 TGF-β/Smad信號通路
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R277.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 英文縮略語9-11
• 綜述：中西醫(yī)對梗阻性腎病所致EMT機制的研究回顧11-19
• 1. EMT是腎間質(zhì)纖維化的重要機制11-12
• 2. TGF-β/Smad信號通路與EMT12-14
• 3. 中醫(yī)藥治療梗阻性腎病的優(yōu)勢14-16
• 4. 結論16-17
• 參考文獻17-19
• 前言19-20
• 實驗一 化瘀降濁湯對TGF-β誘導HK-2細胞細胞增殖的影響20-27
• 1.1 實驗材料20-21
• 1.2 實驗方法21-25
• 1.3 實驗結果25-26
• 1.4 討論26
• 1.5 結論26-27
• 實驗二 tanswell侵襲實驗測定化瘀降濁湯對TGF-β1誘導的HK-2細胞的浸潤影響27-31
• 2.1 實驗材料27
• 2.2 實驗方法27-28
• 2.3 統(tǒng)計分析28-29
• 2.4 實驗結果29-30
• 2.5 討論30
• 2.6 結論30-31
• 實驗三 化瘀降濁湯體外對腎小管上皮細胞EMT調(diào)節(jié)作用的研究31-44
• 3.1 實驗材料31-33
• 3.2 實驗步驟33-39
• 3.3 統(tǒng)計方法39-40
• 3.4 結果40-42
• 3.5 討論42-43
• 3.6 結論43-44
• 實驗四 化瘀降濁湯體外調(diào)控TGF-β/Smad信號通路的研究44-53
• 4.1 實驗材料44
• 4.2 實驗步驟44
• 4.3 統(tǒng)計方法44-45
• 4.4 結果45-51
• 4.5 討論51-53
• 結語53-54
• 參考文獻54-56
• 致謝56-57
• 個人簡歷57

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 燕小霞;化瘀降濁法治療慢性腎衰的療效觀察[J];河北中醫(yī);1996年03期

2 汪艷玫,馬新娟;益腎化瘀降濁湯治療老年性癡呆21例臨床觀察[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志;2001年03期

3 左恒;化瘀降濁法治療男性自身免疫性不育癥56例[J];安徽中醫(yī)臨床雜志;2003年02期

4 高菁,劉玉芹,任可,王秀琴;益腎化瘀降濁法治療慢性腎功能不全86例[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2002年04期

5 邢鴻林;侯麗;張秋平;韋秀珍;;補虛化瘀降濁法治療慢性腎功能不全60例臨床觀察[J];中醫(yī)藥信息;2006年01期

6 張文軍;;健脾益氣化瘀降濁法治療慢性腎衰竭35例觀察[J];實用中醫(yī)藥雜志;2010年04期

7 楊寒;健脾益腎化瘀降濁法治療尿石癥32例總結[J];湖南中醫(yī)雜志;1998年03期

8 樊平;許文平;;補腎化瘀降濁湯化裁治療慢性腎衰竭氮質(zhì)血癥期58例[J];陜西中醫(yī)學院學報;2009年05期

9 耿建國,劉玉寧,李培旭;溫陽化瘀降濁法治療慢性腎功能衰竭的臨床研究[J];浙江中醫(yī)雜志;2003年12期

10 雷燁;;化瘀降濁方治療2型糖尿病伴動脈粥樣硬化62例[J];陜西中醫(yī)學院學報;2011年05期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 呂濟源;通過對HK-2細胞的EMT機制探討化瘀降濁湯對梗阻性腎病研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2016年

2 于瑞波;健脾益腎、化瘀降濁法治療腎性貧血鐵缺乏的臨床研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2010年

3 馮濤;健脾益腎化瘀降濁顆粒聯(lián)合纈沙坦治療CKD2、3期—脾腎氣虛、濕濁瘀阻證的臨床研究[D];南方醫(yī)科大學;2012年

  本文關鍵詞：通過對HK-2細胞的EMT機制探討化瘀降濁湯對梗阻性腎病研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：404621