目的:從減輕糖尿病腎�。―N）大鼠腎臟氧化應(yīng)激損傷角度探討藏族藥灰兜巴的腎臟保護(hù)作用,為其治療DN提供科學(xué)依據(jù)。方法:本實(shí)驗(yàn)采取高脂飲食喂養(yǎng)加腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）65 mg·kg^-1法誘導(dǎo)DN大鼠模型,空白組注射等體積溶媒并飼以大鼠維持飼料。將造模成功DN大鼠隨機(jī)分為DN模型組(10 mL·kg^-1·d^-1),二甲雙胍組(0.045 g·kg^-1·d^-1),灰兜巴組(0.18 g·kg^-1·d^-1),每組8只,分別以溶媒或相應(yīng)藥物灌胃給藥干預(yù)6周。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)各組大鼠體質(zhì)量、血糖變化,并于藥物干預(yù)前后收集24 h尿液,檢測(cè)24 h尿微量白蛋白（mAlb）;實(shí)驗(yàn)取材后,計(jì)算腎臟質(zhì)量指數(shù)（KI）;并利用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血肌酐（SCr）和血尿素氮（BUN）水平;馬松（Masson）染色觀察腎組織病理學(xué)改變;脂質(zhì)氧化丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒檢測(cè)腎組織MDA含量;蛋白免疫印跡法（Western blot）和免疫熒光法檢測(cè)腎組織煙酰... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2020,26(18)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

灰兜巴對(duì)DN大鼠腎小球病理結(jié)構(gòu)的影響（Masson，×400)

BROSIUS等[15]發(fā)現(xiàn)飲食可對(duì)DN產(chǎn)生影響，本實(shí)驗(yàn)采用高脂飲食喂養(yǎng)預(yù)造模大鼠，飲食干預(yù)6周后，其體質(zhì)量明顯高于正常維持飼料喂養(yǎng)的空白組。又有研究發(fā)現(xiàn)，非基因源糖尿病腎病大鼠模型經(jīng)常出現(xiàn)不同程度的STZ誘導(dǎo)的β細(xì)胞衰竭[16]，美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究所組建的糖尿病并發(fā)癥動(dòng)物模型工作組推薦使用低劑量STZ誘導(dǎo)DN模型，但課題組前期預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，低劑量STZ(35 mg·kg-1）誘導(dǎo)DN成模率較低。因此本課題組采用高劑量STZ(65 mg·kg-1）誘導(dǎo)DN大鼠模型。但實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，注射高劑量STZ后3周，大鼠體質(zhì)量迅速下降，且少動(dòng)，不排除存在明顯β細(xì)胞急性損害的可能性。在DN進(jìn)展為終末期腎�。‥SRD）的過(guò)程，足細(xì)胞損傷所引起的蛋白尿和腎小球?yàn)V過(guò)率（GFR）下降是2個(gè)重要的臨床表現(xiàn)[17]。血尿生化檢測(cè)結(jié)果表明灰兜巴可明顯降低DN大鼠24 h mAlb和SCr,BUN水平。DN高糖氧化應(yīng)激環(huán)境加重腎間質(zhì)纖維化，其典型的病理特征即腎小球基底膜（GBM）增厚，細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）積聚增加致系膜區(qū)擴(kuò)張[18-19]，而減輕足細(xì)胞損傷降低蛋白尿是抑制ECM積聚的有效途徑[20]，腎臟組織Masson染色結(jié)果顯示，灰兜巴可明顯減輕腎小球ECM積聚和腎小球系膜增生，降低DN大鼠蛋白尿，發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。圖3 腎臟組織Nox4蛋白表達(dá)電泳

圖2 灰兜巴對(duì)DN大鼠腎組織Nox4免疫熒光表達(dá)的影響（免疫熒光，×400)多項(xiàng)研究表明，DM持續(xù)高糖環(huán)境可誘發(fā)細(xì)胞氧化應(yīng)激，使細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生過(guò)多活性氧（ROS）加速細(xì)胞凋亡[21-23]。MDA作為脂質(zhì)過(guò)氧化主要產(chǎn)物之一，已成為機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激的公認(rèn)評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明灰兜巴可明顯減輕DN大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)，降低腎組織MDA含量。NADPH氧化酶（Nox）是不同細(xì)胞中氧化應(yīng)激的主要誘導(dǎo)者，Nox家族有7個(gè)亞型，Nox1-Nox5和Duox1,Duox2，其中Nox1,Nox2和Nox4主要表達(dá)于腎皮質(zhì)[24-25]，而腎組織中表達(dá)最豐富的的就是Nox4[26]。有研究報(bào)道，在培養(yǎng)的足細(xì)胞和糖尿病鼠模型中，葡萄糖刺激均可激活Nox4誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[27-29]。為從源頭挖掘足細(xì)胞損傷致蛋白尿的始動(dòng)因素，課題組通過(guò)Western blot和免疫熒光檢測(cè)了DN大鼠腎臟Nox4表達(dá)，發(fā)現(xiàn)DN模型組Nox4蛋白水平顯著上升�；叶蛋涂擅黠@下調(diào)Nox4蛋白表達(dá)水平，減輕DN大鼠腎臟氧化應(yīng)激損傷，從而起到DN腎臟保護(hù)作用。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3541632