目的:從減輕糖尿病腎病（DN）大鼠腎臟氧化應激損傷角度探討藏族藥灰兜巴的腎臟保護作用,為其治療DN提供科學依據(jù)。方法:本實驗采取高脂飲食喂養(yǎng)加腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）65 mg·kg^-1法誘導DN大鼠模型,空白組注射等體積溶媒并飼以大鼠維持飼料。將造模成功DN大鼠隨機分為DN模型組(10 mL·kg^-1·d^-1),二甲雙胍組(0.045 g·kg^-1·d^-1),灰兜巴組(0.18 g·kg^-1·d^-1),每組8只,分別以溶媒或相應藥物灌胃給藥干預6周。動態(tài)監(jiān)測各組大鼠體質(zhì)量、血糖變化,并于藥物干預前后收集24 h尿液,檢測24 h尿微量白蛋白（mAlb）;實驗取材后,計算腎臟質(zhì)量指數(shù)（KI）;并利用全自動生化分析儀檢測大鼠血肌酐（SCr）和血尿素氮（BUN）水平;馬松（Masson）染色觀察腎組織病理學改變;脂質(zhì)氧化丙二醛（MDA）測定試劑盒檢測腎組織MDA含量;蛋白免疫印跡法（Western blot）和免疫熒光法檢測腎組織煙酰... 

【文章來源】：中國實驗方劑學雜志. 2020,26(18)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

灰兜巴對DN大鼠腎小球病理結構的影響（Masson，×400)

BROSIUS等[15]發(fā)現(xiàn)飲食可對DN產(chǎn)生影響，本實驗采用高脂飲食喂養(yǎng)預造模大鼠，飲食干預6周后，其體質(zhì)量明顯高于正常維持飼料喂養(yǎng)的空白組。又有研究發(fā)現(xiàn)，非基因源糖尿病腎病大鼠模型經(jīng)常出現(xiàn)不同程度的STZ誘導的β細胞衰竭[16]，美國國立衛(wèi)生研究所組建的糖尿病并發(fā)癥動物模型工作組推薦使用低劑量STZ誘導DN模型，但課題組前期預實驗發(fā)現(xiàn)，低劑量STZ(35 mg·kg-1）誘導DN成模率較低。因此本課題組采用高劑量STZ(65 mg·kg-1）誘導DN大鼠模型。但實驗中發(fā)現(xiàn)，注射高劑量STZ后3周，大鼠體質(zhì)量迅速下降，且少動，不排除存在明顯β細胞急性損害的可能性。在DN進展為終末期腎�。‥SRD）的過程，足細胞損傷所引起的蛋白尿和腎小球濾過率（GFR）下降是2個重要的臨床表現(xiàn)[17]。血尿生化檢測結果表明灰兜巴可明顯降低DN大鼠24 h mAlb和SCr,BUN水平。DN高糖氧化應激環(huán)境加重腎間質(zhì)纖維化，其典型的病理特征即腎小球基底膜（GBM）增厚，細胞外基質(zhì)（ECM）積聚增加致系膜區(qū)擴張[18-19]，而減輕足細胞損傷降低蛋白尿是抑制ECM積聚的有效途徑[20]，腎臟組織Masson染色結果顯示，灰兜巴可明顯減輕腎小球ECM積聚和腎小球系膜增生，降低DN大鼠蛋白尿，發(fā)揮腎臟保護作用。圖3 腎臟組織Nox4蛋白表達電泳

圖2 灰兜巴對DN大鼠腎組織Nox4免疫熒光表達的影響（免疫熒光，×400)多項研究表明，DM持續(xù)高糖環(huán)境可誘發(fā)細胞氧化應激，使細胞內(nèi)產(chǎn)生過多活性氧（ROS）加速細胞凋亡[21-23]。MDA作為脂質(zhì)過氧化主要產(chǎn)物之一，已成為機體發(fā)生氧化應激的公認評價指標之一，實驗研究結果表明灰兜巴可明顯減輕DN大鼠體內(nèi)氧化應激狀態(tài)，降低腎組織MDA含量。NADPH氧化酶（Nox）是不同細胞中氧化應激的主要誘導者，Nox家族有7個亞型，Nox1-Nox5和Duox1,Duox2，其中Nox1,Nox2和Nox4主要表達于腎皮質(zhì)[24-25]，而腎組織中表達最豐富的的就是Nox4[26]。有研究報道，在培養(yǎng)的足細胞和糖尿病鼠模型中，葡萄糖刺激均可激活Nox4誘導細胞凋亡[27-29]。為從源頭挖掘足細胞損傷致蛋白尿的始動因素，課題組通過Western blot和免疫熒光檢測了DN大鼠腎臟Nox4表達，發(fā)現(xiàn)DN模型組Nox4蛋白水平顯著上升。灰兜巴可明顯下調(diào)Nox4蛋白表達水平，減輕DN大鼠腎臟氧化應激損傷，從而起到DN腎臟保護作用。

【參考文獻】：
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本文編號：3541632