目的:評價(jià)濕潤燒傷膏和全蝎軟膏聯(lián)用治療糖尿病皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合的效果并探討其作用機(jī)制。方法:選擇Wistar大鼠建立糖尿病皮膚潰瘍模型,采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為對照組、模型組、全蝎軟膏組、濕潤燒傷膏組和聯(lián)用組,以連續(xù)飼喂高脂飼料、腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）及皮膚損傷法制備糖尿病皮膚潰瘍大鼠模型。造模后,分別在創(chuàng)傷處進(jìn)行藥物干預(yù)處理,空白組和模型組用PBS處理并計(jì)算創(chuàng)面愈合率;采用免疫組化、創(chuàng)面組織超微病理結(jié)構(gòu)觀察給藥后3 d、7 d、10 d和14 d的創(chuàng)面肉芽組織,western-blot檢測Smad4蛋白的表達(dá)。結(jié)果:糖尿病皮膚潰瘍模型組的大鼠體重、血糖與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,成模率為95.45%;經(jīng)14 d連續(xù)治療后,各治療組創(chuàng)面愈合率均高于模型組（P<0.05）,聯(lián)用組創(chuàng)面愈合率與對照組水平接近。免疫組化染色結(jié)果顯示與模型組相比,經(jīng)藥物干預(yù)后的創(chuàng)面組織內(nèi)AGEs和RAGE的表達(dá)水平均明顯下調(diào)（P<0.05）;電鏡觀察結(jié)果表明聯(lián)用濕潤燒傷膏和全蝎軟膏能夠促進(jìn)胞內(nèi)細(xì)胞器恢復(fù)正常水平,其改善效果較單獨(dú)藥物干預(yù)組效果更顯著;Western-blot檢測結(jié)果表明各治療組創(chuàng)面... 

【文章來源】：現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,20(14)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

免疫組化染色結(jié)果（200×）

透射電鏡觀察結(jié)果如圖2所示，未經(jīng)干預(yù)治療的模型組與對照組相比，內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞核腫脹，線粒體有空泡，膠原纖維合成減少，血管腔變窄（圖2A）；而各治療組經(jīng)用藥處理后內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)容物逐漸豐富，線粒體空泡得到改善，膠原合成數(shù)量逐漸增多，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見明顯擴(kuò)張。其中，聯(lián)合治療組中成纖維細(xì)胞內(nèi)容物多，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未擴(kuò)張且膠原纖維生成較多；全蝎軟膏組成纖維細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張不明顯，數(shù)量較豐富且膠原纖維生成較多；濕潤燒傷膏組內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞核稍有腫脹，線粒體空泡化較多，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張較明顯（圖2B-D）。結(jié)果表明聯(lián)合治療組能夠有效提高細(xì)胞器的恢復(fù)進(jìn)程，從而促使DCU組織創(chuàng)面的愈合。2.5 創(chuàng)面組織Smad 4的表達(dá)

糖尿病性皮膚潰瘍患者因自身胰島素抵抗等因素致使神經(jīng)血管病變、膠原合成減少及炎性階段延長，阻礙了新生肉芽組織的合成[21]。近年來，中西醫(yī)對DCU的治療研究已取得重大突破，越來越多的中藥制劑在臨床實(shí)踐中取得了良好的應(yīng)用效果，不僅提高皮膚創(chuàng)面的愈合效果并縮短治療周期，且兼?zhèn)涓弊饔眯『唾M(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)[22]。本研究以前期研究為基礎(chǔ)，選取全蝎軟膏聯(lián)合濕潤燒傷膏對DCU大鼠進(jìn)行治療。全蝎軟膏因具有清熱解毒、活血化瘀、祛腐生肌、抑菌消炎等功效，配合濕潤創(chuàng)傷膏扶正祛邪、清熱解毒等功效可達(dá)到快速修復(fù)創(chuàng)面的目的。對于DCU模型的復(fù)制多采用STZ誘導(dǎo)的皮膚缺損法和磁片循環(huán)壓迫法等，但后者造模成本較高、過程復(fù)雜且對實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求較嚴(yán)格[23]，故本研究選擇連續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料結(jié)合STZ誘導(dǎo)皮膚缺損法構(gòu)建DCU大鼠模型，結(jié)果顯示大鼠DCU模型的成模率高達(dá)95.45%，死亡率僅為4.55%(1/22），死亡原因可能是在模型復(fù)制過程中，DM大鼠體型消瘦、耐受力差或注射STZ時(shí)操作不當(dāng)而引起。DCU大鼠模型復(fù)制成功后，除對照組外，各模型組均出現(xiàn)多飲、多食、多尿和體重減輕的"三多一少"典型糖尿病癥狀，表明本研究所選的造模法能夠用于DCU大鼠模型的復(fù)制。經(jīng)濕潤燒傷膏和/或全蝎軟膏干預(yù)治療后，各治療組愈合率明顯高于模型組，但聯(lián)合組的治療效果最佳，能夠有效改善DCU大鼠微循環(huán)并促使皮膚肉芽組織快速生成。皮膚修復(fù)愈合作為一個(gè)復(fù)雜而有序的動(dòng)態(tài)過程，長久以來都是醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)話題，一般認(rèn)為，肉芽組織中新生血管的修復(fù)和抑制炎性反應(yīng)對創(chuàng)傷的愈合至關(guān)重要。研究表明在DCU患者體內(nèi)存在大量的具有蛋白質(zhì)交聯(lián)特性的異源大分子物質(zhì)AGEs，其與RAGE在內(nèi)皮細(xì)胞表面相互結(jié)合后能夠引起內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生一系列功能的改變并影響創(chuàng)面的愈合進(jìn)程；此外，AGEs-RAGE信號通路還能夠通過程序激活核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB通路，促進(jìn)白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、細(xì)胞白介素6(IL-6）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子分泌增多，引起持續(xù)的細(xì)胞損傷和功能紊亂，最終阻礙皮膚組織的正常愈合[24,25]。免疫組化試驗(yàn)結(jié)果顯示藥物干預(yù)組中AGEs和RAGE的表達(dá)明顯低于模型組，且差異性顯著（P<0.05），證實(shí)濕潤燒傷膏和全蝎軟膏聯(lián)用能夠降低AGEs及RAGE水平，進(jìn)而抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)進(jìn)程，達(dá)到促進(jìn)新生毛細(xì)血管生成和促使成纖維細(xì)胞增殖的目的，但參與調(diào)控AGEs-RAGE通路具體的細(xì)胞因子仍需進(jìn)一步試驗(yàn)確定。超微結(jié)構(gòu)觀察顯示與模型組相比，聯(lián)用組的內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞含量較多且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見明顯擴(kuò)張，細(xì)胞核和線粒體結(jié)構(gòu)恢復(fù)水平與對照組相當(dāng)，表明聯(lián)合濕潤燒傷膏和全蝎軟膏能夠通過改善創(chuàng)面組織細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，修復(fù)細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器以促進(jìn)DCU創(chuàng)面的快速愈合。

【參考文獻(xiàn)】：
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