第一部分化濁解毒疏肝方對(duì)輕中度抑郁(濁毒內(nèi)蘊(yùn)證)患者的療效觀察目的:觀察化濁解毒疏肝方對(duì)輕中度抑郁患者(濁毒內(nèi)蘊(yùn)證)的療效。方法:以診斷為輕中度抑郁癥并符合中醫(yī)濁毒內(nèi)蘊(yùn)證的患者48例,隨機(jī)分治療組24例,對(duì)照組24例。治療組服用化濁解毒疏肝方藥,對(duì)照組服用氟西汀,通過(guò)HAMD評(píng)分及中醫(yī)癥狀評(píng)分評(píng)價(jià)療效。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)和非參數(shù)秩和檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。結(jié)果:1.HAMD評(píng)分可見(jiàn)中藥組及西藥組治療后評(píng)分明顯減少,中藥組與西藥組無(wú)差異。2.中醫(yī)癥狀評(píng)分可見(jiàn)治療后中藥組及西藥組評(píng)分均明顯減少,中藥組與西藥組比較無(wú)差異。中藥組在改善中醫(yī)癥狀方面總有效率為90.5%。小結(jié):1.化濁解毒疏肝方具有抗抑郁作用。對(duì)抑郁癥的療效與西藥氟西汀相當(dāng)。2.化濁解毒疏肝方對(duì)郁證的中醫(yī)癥狀改善作用與氟西汀相當(dāng),但不良反應(yīng)少。第二部分化濁解毒疏肝方對(duì)CUMS(慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激)小鼠行為學(xué)及神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響目的:探討化濁解毒疏肝方對(duì)CUMS小鼠行為學(xué)及神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響,觀察此方的抗抑郁作用及神經(jīng)元保護(hù)作用。方法:采用雄性ICR小鼠48只,隨機(jī)分為正常組、模型組、西藥組及中藥高、中、低劑量組。建立CUMS模型,通過(guò)糖水偏愛(ài)測(cè)試、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)及高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)觀察小鼠的焦慮抑郁程度,通過(guò)光鏡和電鏡觀察小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)。各樣本總體差異采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1.一般情況觀察模型組小鼠毛發(fā)色澤暗淡,膽小易驚,反應(yīng)遲鈍,活動(dòng)度減少,精神不振,進(jìn)食減少,甚至出現(xiàn)應(yīng)激性排便。2.模型組糖水偏愛(ài)指數(shù)與正常組比較明顯減少,西藥組及中藥高中劑量組增加。3.模型組小鼠曠場(chǎng)試驗(yàn)各項(xiàng)評(píng)分顯著降低,中藥各劑量組與西藥組均有增加。4.模型組小鼠強(qiáng)迫游泳總不動(dòng)明顯延長(zhǎng),不動(dòng)潛伏期縮短,中藥各劑量組及西藥組干預(yù)后有明顯改善。5.高架十字迷宮顯示模型組與正常組比較開(kāi)放臂訪問(wèn)次數(shù)及停留時(shí)間明顯減少,閉合臂訪問(wèn)次數(shù)及停留時(shí)間明顯增加,西藥組及中藥高、中劑量組有所改善。6.光鏡:模型組神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞核固縮,出現(xiàn)較多凋亡小體,可見(jiàn)較多膠質(zhì)細(xì)胞及炎性細(xì)胞。中藥組:神經(jīng)細(xì)胞排列較為規(guī)整,輕微核固縮,有少量的凋亡小體,可見(jiàn)少量的膠質(zhì)細(xì)胞及炎性細(xì)胞。7.電鏡:模型組細(xì)胞萎縮,膜結(jié)構(gòu)欠清晰,線粒體內(nèi)外膜融合,突觸融合,小泡減少,神經(jīng)氈水腫。中藥組:細(xì)胞膜清晰可見(jiàn),胞漿水腫,線粒體較多,突觸可見(jiàn)致密物,突觸間隙存在,小泡較多。小結(jié):1.通過(guò)CUMS加孤養(yǎng)可成功建立抑郁小鼠模型,模型穩(wěn)定而可靠。2.化濁解毒疏肝方可改善CUMS小鼠的抑郁程度,中藥高劑量組效果最佳,與氟西汀療效相當(dāng)。3.從形態(tài)學(xué)方面證實(shí)CUMS可致小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的損傷。4.化濁解毒疏肝方藥可以保護(hù)小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元,從而恢復(fù)海馬的結(jié)構(gòu),從形態(tài)學(xué)角度為探討抑郁癥發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。第三部分基于Rac1-LIMK1-cofilin通路探討化濁解毒疏肝方的抗抑郁作用及改善神經(jīng)可塑性的機(jī)制目的:探討化濁解毒疏肝方對(duì)CUMS小鼠BDNF及其受體、以及突觸相關(guān)蛋白,Rac1-LIMK1-cofilin通路相關(guān)蛋白的表達(dá),并探討抗抑郁作用的可能機(jī)制。方法:采用雄性ICR小鼠48只,隨機(jī)分為正常組、模型組、西藥組及中藥高、中、低劑量組。采用免疫組織化學(xué)法、免疫印跡法和實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)小鼠海馬組織BDNF,TrkB,SYP,PSD-95,Rac1,LIMK1,p-cofilin蛋白水平。所有數(shù)據(jù)采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果:1.模型組海馬CA3區(qū)BDNF,TrkB表達(dá)量減少,Western Blot結(jié)果與免疫組化結(jié)果一致。Q-PCR結(jié)果表明模型組BDNF mRNA水平明顯低于正常組,中藥高、中劑量組及西藥組表達(dá)增加。2.模型組海馬CA3區(qū)SYP,PSD-95表達(dá)減少。Western Blot結(jié)果與免疫組化結(jié)果一致。Q-PCR結(jié)果表明SYP,PSD-95 mRNA水平模型組明顯低于正常組,與上述結(jié)果一致,中藥高、中劑量組及西藥組表達(dá)增加。3.模型組海馬CA3區(qū)Rac1、LIMK1、p-cofilin表達(dá)量減少,中藥高、中劑量組及西藥組表達(dá)增加。小結(jié):1.慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激可成功誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生抑郁樣行為,并伴有海馬BDNF及受體,突觸相關(guān)蛋白及Rac1-LIMK1-cofilin通路蛋白的變化。2.小鼠的抑郁樣行為發(fā)生機(jī)制可能與影響B(tài)DNF-TrkB介導(dǎo)的Rac1-LIMK1-cofilin通路蛋白變化有關(guān)。3.化濁解毒疏肝方通過(guò)影響B(tài)DNF-TrkB介導(dǎo)的Rac1-LIMK1-cofilin通路蛋白變化發(fā)生神經(jīng)保護(hù)作用,從而產(chǎn)生抗抑郁效應(yīng)。結(jié)論:1化濁解毒疏肝方具有抗抑郁作用,在改善抑郁癥狀方面與西藥氟西汀療效相當(dāng)。2化濁解毒疏肝方對(duì)慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激小鼠有抗抑郁作用。3化濁解毒疏肝方對(duì)慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激小鼠具有神經(jīng)元保護(hù)作用。4化濁解毒疏肝方對(duì)慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激小鼠的抗抑郁及神經(jīng)元保護(hù)作用可能是通過(guò)激活BDNF-Rac1-cofilin通路發(fā)揮的,從而改善神經(jīng)可塑性。
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各組HAMD評(píng)分結(jié)果

各組HAMD評(píng)分結(jié)果

圖 1 糖水偏愛(ài)測(cè)試結(jié)果Fig1. Results of SPT.ked with means ± S.E.M., n = 8, **P < 0.01，compared with
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