目的研究藏藥如意珍寶丸介導(dǎo)偏頭痛模型大鼠下行痛覺調(diào)節(jié)通路中蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)-反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CAMP response element-binding protein,CREB)變化來探討垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)及受體PAC1的影響,以探究其干預(yù)偏頭痛的有效機(jī)制。方法 SPF級(jí)SD雄性大鼠90只隨機(jī)等分為6組:空白組、模型組、陽性藥組(琥珀酸舒馬普坦片; 9.72 mg/kg)、藏藥如意珍寶丸組(預(yù)防組、治療1組、治療2組,500 mg/kg)。藏藥如意珍寶丸(治療1組、治療2組)、空白組及模型組灌胃等體積蒸餾水,陽性藥組、藏藥如意珍寶丸預(yù)防組分別灌胃琥珀酸舒馬普坦片、藏藥如意珍寶丸進(jìn)行藥物干預(yù),連續(xù)7 d;于末次給藥1 h后,除空白組大鼠頸部皮下注射生理鹽水外,其余各組同部位注射硝酸甘油(Nitroglycerin,NTG,10 mg/kg)以制備偏頭痛模型,治療1組造模1 h后灌胃藏藥如意珍寶丸,各組均進(jìn)行標(biāo)本采集。而治療2組需連續(xù)灌胃2 d藏藥如意珍寶丸后再收集樣本。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-linked immunosorb-ent assay,ELISA)法檢測(cè)血清中PACAP和PAC1的蛋白含量,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)檢測(cè)PACAP、AC、PAC1、CREB、PKA m RNA表達(dá)變化。結(jié)果與正常組比較,模型組大鼠血清PACAP、PAC1的蛋白表達(dá)顯著升高(P 0.05)。與模型組比較,陽性藥組PAC1蛋白表達(dá)明顯降低(P 0.05),而PACAP含量?jī)H呈下調(diào)趨勢(shì);藏藥如意珍寶丸(預(yù)防組、治療1組) PACAP蛋白水平差異性減少,且預(yù)防組PAC1蛋白表達(dá)顯著下降(P 0.05,P 0.01)。與正常組比較,模型組大鼠中腦PACAP、AC、PAC1、CREB、PKA基因表達(dá)含量均明顯上調(diào)(P 0.01),提示造模成功。與模型組比較,陽性藥組、藏藥如意珍寶丸(預(yù)防組、治療1組、治療2組) CREB、PKA基因表達(dá)變化均不同程度地下調(diào),而PACAP、AC基因表達(dá)差異性降低見于藏藥如意珍寶丸(預(yù)防組、治療2組),PAK基因水平變化明顯減少見于陽性藥組、藏藥如意珍寶丸預(yù)防組(P 0.05,P 0.01)。結(jié)論藏藥如意珍寶丸可通過調(diào)節(jié)中腦內(nèi)PKA-CREB信號(hào)通路以介導(dǎo)PACAP、PAC1含量變化來緩解偏頭痛的發(fā)作。
【部分圖文】：

與正常組比較，模型組大鼠中腦PACAP、AC、PAC1、CREB、PKA基因表達(dá)含量均明顯上調(diào)(P<0.01)，提示造模成功。與模型組比較，陽性藥組、藏藥如意珍寶丸(預(yù)防組、治療1組、治療2組)CREB、PKA基因表達(dá)變化均不同程度地顯著性下調(diào)，而PACAP、AC基因表達(dá)差異性降低僅見于藏藥如意珍寶丸(預(yù)防組、治療2組)，PAK基因水平變化明顯減少的僅見于陽性藥組、藏藥如意珍寶丸預(yù)防組(P<0.01,P<0.05)，故從基因?qū)用娑�，藏藥如意珍寶丸可通過調(diào)節(jié)中腦中PKA-CREB信號(hào)通路以介導(dǎo)PACAP、PAC1含量變化來緩解偏頭痛的發(fā)作。結(jié)果見圖2。圖2 各組大鼠中腦PACAP、AC、PAC1、CREB、PKA基因表達(dá)變化

各組大鼠中腦PACAP、AC、PAC1、CREB、PKA基因表達(dá)變化
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