目的:本研究采用大腸桿菌內(nèi)毒素注射法復(fù)制發(fā)熱家兔模型,以非甾體抗炎藥物(吲哚美辛)作為對照,觀察了刺絡(luò)拔罐法對內(nèi)毒素致熱家兔血清細胞因子(IL-1β、GM-CSF、IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10、IFN-γ)水平和家兔下丘腦組織中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、環(huán)氧合酶(COX-1、COX-2)蛋白表達水平的影響,旨在揭示刺絡(luò)拔罐法的退熱作用機制,體現(xiàn)了刺絡(luò)拔罐法的退熱優(yōu)勢作用,為刺絡(luò)拔罐法的機理闡釋和臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。材料與方法:1.動物及分組:選取25只清潔級家兔,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,將它們隨機分為正常組、模型組、刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組和西藥治療(吲哚美辛)組,每組各5只。2.造模方法:除正常組家兔外,其他組家兔均采用大腸桿菌內(nèi)毒素注射法復(fù)制發(fā)熱模型,用生理鹽水稀釋大腸桿菌內(nèi)毒素至200 ng/ml,并按200 ng/kg劑量經(jīng)家兔耳緣靜脈注射給藥進行模型復(fù)制。3.干預(yù)方法:模型復(fù)制成功后,西藥組家兔給予吲哚美辛混懸液灌胃,灌胃劑量按10ml/kg,其余組家兔則分別給予相同容積的生理鹽水灌胃;灌胃后單純拔罐組家兔、刺絡(luò)拔罐組家兔在造模成功1小時后分別進行拔罐操作,單純拔罐組家兔俯臥位被固定在兔板上,在家兔大椎穴處剃毛后,采用內(nèi)徑25mm的透明塑料罐,連接經(jīng)絡(luò)罐通儀,固定罐壓為-0.03Mpa在穴處拔罐,時間為15分鐘;刺絡(luò)拔罐組家兔按上述固定、剃毛后,先用1寸毫針(固定刺入深度2mm)點刺出血后再拔罐,拔罐方法與單純拔罐組相同;正常組、模型組和西藥治療(吲哚美辛)組家兔均要以相同方式固定,但不進行拔罐操作。4.指標(biāo)檢測及方法:造模后每1小時記錄體溫1次,連續(xù)測量溫度8小時,來觀察正常組、模型組、刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組和西藥治療(吲哚美辛)組動物的體溫變化;之后分別對正常組家兔、模型組家兔、刺絡(luò)拔罐組家兔、單純拔罐組家兔和西藥治療(吲哚美辛)組家兔進行耳緣靜脈采血,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA法)檢測正常組家兔、模型組家兔、刺絡(luò)拔罐組家兔、單純拔罐組家兔和西藥治療(吲哚美辛)組家兔血清細胞因子(IL-1β、GM-CSF、TNF-α、IL-6、IL-4、IL-10、IFN-γ)濃度;采血后用空氣栓塞法(耳緣靜脈注射10 ml空氣)處死動物,并取出全腦,迅速于視交叉與灰結(jié)節(jié)間取下丘腦,將標(biāo)本放入EP管中,液氮中保存。采用免疫印跡法(Western blot法)檢測正常組家兔、模型組家兔、刺絡(luò)拔罐組家兔、單純拔罐組家兔和西藥治療(吲哚美辛)組家兔下丘腦組織誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、環(huán)氧合酶(COX-1、COX-2)蛋白表達水平。5.統(tǒng)計方法:實驗結(jié)果采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,所有數(shù)據(jù)均用平均數(shù)±標(biāo)準差(?)來表示,兩組組間比較采用單因素方差分析,P0.05為具有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果:1.造模后,模型組家兔造模后直腸溫度逐漸升高,出現(xiàn)了典型的雙相熱,約至2h、4h時體溫升高至峰值,與正常組比較,顯著高于正常組,具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01),亦提示模型復(fù)制成功。刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組、西藥組家兔經(jīng)相應(yīng)治療后,直腸溫度升高程度均較模型組家兔溫度明顯降低,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),提示刺絡(luò)拔罐法、單純拔罐法和西藥干預(yù)均有明顯的退熱作用;刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組與西藥組家兔直腸溫度變化的組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),但從數(shù)值上看,刺絡(luò)拔罐組比單純拔罐組家兔直腸溫度降低的更明顯,刺絡(luò)拔罐法的退熱作用明顯具有優(yōu)于單純拔罐法的趨勢。2.模型組家兔血清IL-1β,IL-6,GM-CSF,TNF-α水平均較正常組顯著升高,具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。經(jīng)相應(yīng)治療后,刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組、西藥組家兔血清中IL-1β,IL-6,GM-CSF,TNF-α水平則明顯降低,其中刺絡(luò)拔罐組和西藥組與同時間段模型組家兔血清IL-1β,IL-6,GM-CSF,TNF-α水平相比,始終具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);單純拔罐組與同時間段模型組家兔血清中的IL-1β,IL-6,GM-CSF水平之間的差異,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而與其TNF-α水平相比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。表明刺絡(luò)拔罐法、單純拔罐法和西藥干預(yù)后均可降低內(nèi)毒素致熱家兔血清細胞因子中IL-1β,IL-6,GM-CSF,TNF-α水平。刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組、西藥組三組家兔血清IL-1β,IL-6,GM-CSF水平的組間比較,無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而單純拔罐組與其他兩組家兔血清TNF-α水平相比較,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。無論從總體上,還是從數(shù)值上看,刺絡(luò)拔罐法與單純拔罐法相比較,可以使模型家兔血清細胞因子水平降低得更明顯,具有優(yōu)于單純拔罐法的趨勢。3.模型組家兔血清IL-4、IFN-γ水平明顯低于正常組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其血清IL-10水平也有所降低,但與正常組比較,無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);干預(yù)治療后,刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組家兔血清IL-4、IFN-γ水平明顯被提升,與模型組同時間段內(nèi)比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而兩組家兔血清IL-10水平仍然降低,且與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);西藥組家兔血清IL-4、IFN-γ、IL-10水平在治療后均沒有明顯的提升,與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組家兔血清IL-4、IFN-γ水平的組間比較,無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),但從數(shù)值上來看,刺絡(luò)拔罐組具有更優(yōu)勢的作用趨勢。提示經(jīng)刺絡(luò)拔罐法和單純拔罐法干預(yù),可提高內(nèi)毒素致熱家兔血清細胞因子中IL-4,IFN-γ水平,而對于血清IL-10水平無明顯提升作用。西藥對于家兔血清IL-4、IFN-γ、IL-10水平均無明顯提升作用。4.模型組家兔下丘腦組織iNOS蛋白表達增加,與正常組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),經(jīng)干預(yù)治療后,刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組、西藥組家兔下丘腦組織iNOS蛋白表達水平均較模型組有明顯降低,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);三組家兔中樞iNOS蛋白表達水平組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),但從數(shù)值上看,刺絡(luò)拔罐法比單純拔罐法具有更優(yōu)勢作用的趨勢。5.模型建立后,模型組兔下丘腦組織COX-2蛋白表達增加,與正常組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而模型組兔下丘腦組織COX-1蛋白表達沒有明顯變化,與正常組比無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);經(jīng)干預(yù)治療后,西藥組家兔下丘腦組織COX-1、COX-2蛋白表達水平均較模型組有明顯降低,二者具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);刺絡(luò)拔罐組、單純拔罐組家兔的下丘腦組織中COX-2蛋白表達下降,與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而其COX-1蛋白表達水平?jīng)]有明顯降低,與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);刺絡(luò)拔罐組與單純拔罐組兩組間家兔中樞COX-1、COX-2蛋白表達水平比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),但從數(shù)值上看,刺絡(luò)拔罐法比單純拔罐法具有更優(yōu)勢作用的趨勢。表明刺絡(luò)拔罐法、單純拔罐法對內(nèi)毒素致熱家兔下丘腦組織COX-1蛋白表達沒有抑制作用,對中樞COX-2蛋白表達有選擇性抑制作用。而西藥(吲哚美辛)干預(yù)對COX-1和COX-2蛋白表達水平均有顯著抑制作用。結(jié)論:1.刺絡(luò)拔罐法與西藥治療同樣具有良好的退熱作用,但刺絡(luò)拔罐法具有其優(yōu)勢作用。2.在退熱作用起效過程中,刺絡(luò)拔罐法可降低血清促炎細胞因子(IL-1β、GM-CSF、TNF-α、IL-6)水平,可提高部分血清抗炎因子(IL-4、IFN-γ)水平,可抑制中樞iNOS、COX-2蛋白表達水平,而對中樞COX-1蛋白表達水平?jīng)]有抑制作用。3.刺絡(luò)拔罐法退熱的優(yōu)勢作用機制在于它可提高部分血清抗炎因子(IL-4、IFN-γ)水平,可抑制中樞COX-2蛋白表達水平的同時,對中樞COX-1蛋白表達水平?jīng)]有抑制作用。4.刺絡(luò)拔罐法退熱療效肯定,操作安全,值得臨床推廣。
【學(xué)位單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R244.3
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮略詞表
前言
實驗一 刺絡(luò)拔罐法對內(nèi)毒素致熱家兔血清細胞因子水平的影響
    材料與方法
    實驗結(jié)果
    討論
    小結(jié)
實驗二 刺絡(luò)拔罐法對內(nèi)毒素致熱家兔下丘腦組織iNOS、COX-1、COX-2 蛋白表達水平的影響
    材料與方法
    實驗結(jié)果
    討論
    小結(jié)
結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
個人簡介
在學(xué)期間科研成績
致謝

【參考文獻】

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本文編號：2867740