發(fā)布時間：2020-10-30 04:52

　　 目的:采用乙酸灌腸+捆綁束縛的方法制備腹瀉型腸易激綜合征大鼠模型,運用隔藥餅灸對腹瀉型腸易激綜合征大鼠進行干預(yù)治療,應(yīng)用16S rDNA技術(shù)和核磁共振氫譜技術(shù)探討隔藥餅灸對腹瀉型腸易激綜合征大鼠的腸道菌群和代謝物的影響。方法:48只SPF級雄性SD大鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,分為正常組(12只)和模型組(36只),模型組大鼠予以乙酸灌腸,7天后行束縛應(yīng)激2周,驗證模型后原模型組大鼠隨機分為模型組、西藥組和隔藥餅灸組,每組12只。正常組不予以任何干預(yù),模型組予以捆綁,不進行治療;隔藥餅灸組予以隔藥餅灸治療,西藥組予以匹維溴銨片灌胃。治療2周后,從Bristol糞便性狀評分、糞便含水量和內(nèi)臟敏感性評價等方面評價療效,并用無菌EP管每只大鼠采集2顆糞便樣本,進行代謝組學和腸道菌群檢測。應(yīng)用16S rDNA技術(shù)研究各組大鼠腸道菌群豐度和多樣性的變化情況,以及觀察在隔藥餅灸干預(yù)后腸道菌群的恢復(fù)情況,通過LEfSe分析,找出干預(yù)后顯著差異的菌群。應(yīng)用核磁共振氫譜技術(shù)對各組大鼠的糞便樣本進行代謝組學研究。核磁譜圖采用MestReNova軟件進行預(yù)處理并歸一化,導入至SIMCA-P 14.1軟件進行多維統(tǒng)計分析,通過PLS-DA模型中的VIP值結(jié)合t檢驗,篩選大鼠糞便樣品中的特征代謝物。通過生物功能分析,尋找相關(guān)代謝通路。結(jié)果:1.模型組的糞便性狀評分和糞便含水量均較正常組升高、AWR評分為3分時的注水量與正常組比較明顯下降(P0.01),經(jīng)過隔藥餅灸的干預(yù)后均出現(xiàn)一定程度的回調(diào)。說明隔藥餅灸對乙酸灌腸+束縛應(yīng)激制備的IBS-D大鼠模型的腹瀉和內(nèi)臟高敏感性具有良性的調(diào)節(jié)作用。2.α多樣性分析結(jié)果表明隔藥餅灸對腸道菌群的多樣性具有良性調(diào)節(jié)作用。ANOSIM相似性分析和β多樣性分析表明模型組與正常組的腸道菌群存在明顯的差異。LEfSe分析結(jié)果表明隔藥餅灸可以調(diào)節(jié)Akkermansia muciniPhila、Prevotella、Bacteroidetes等的含量使其恢復(fù)正常。3.腹瀉型腸易激綜合征大鼠經(jīng)過乙酸灌腸和捆綁束縛造模后,糞便樣品的代謝物改變包括蘇氨酸和尿苷二磷酸葡萄糖濃度增加以及亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、2-羥基丁酸、纈氨酸、乳酸、乙醇、精氨酸、2-氧代異戊酸和膽汁酸濃度降低,主要涉及精氨酸和脯氨酸代謝,丙酸鹽代謝以及纈氨酸,亮氨酸和異亮氨酸降解三條主要代謝通路。而經(jīng)過隔藥餅灸的干預(yù)后,可以使IBS組大鼠紊亂的代謝狀態(tài)一定程度上恢復(fù)至正常狀態(tài)。結(jié)論:1.隔藥餅灸對乙酸灌腸+束縛應(yīng)激制備的IBS-D大鼠模型的腹瀉癥狀和內(nèi)臟高敏感性狀態(tài)具有良性的調(diào)節(jié)作用。2.隔藥餅灸對IBS-D腸道菌群多樣性具有良性調(diào)節(jié)作用。隔藥餅灸可以調(diào)節(jié)部分菌群,通過影響?zhàn)さ鞍捉到�、腸道的屏障功能、炎癥反應(yīng)等起作用。3隔藥餅灸干預(yù)可以使IBS-D大鼠表現(xiàn)的代謝紊亂部分恢復(fù)到正常狀態(tài),通過調(diào)節(jié)部分代謝物從而影響免疫應(yīng)答、腸道屏障完整性、腸上皮細胞炎癥、膽汁酸的重吸收等以改善IBS的癥狀。
【學位單位】：湖南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R245.8
【部分圖文】：

2 結(jié)果與分析2.1 模型評價指標模型組大鼠糞便性狀評分和糞便含水量均較正常組比較升高（P<0.01），說明模型組大鼠腹瀉癥狀明顯；而引起大鼠腹壁撤退反射評分為 3 分時的注水量較正常組比較明顯下降（P<0.01），這與模型組大鼠內(nèi)臟敏感性增高密切相關(guān)。見表 1-2 和圖 1-1。表 1-2 大鼠糞便性狀評分、糞便含水量和注水量比較分組 n 糞便性狀評分 糞便含水量（%） 注水量（ml）正常組 12 4.20±1.03 45.80±1.98 2.84±0.34模型組 36 5.63±1.01** 49.90±2.30** 1.62±0.26**注：與正常組比較 P<0.01**

10圖 1-2 大鼠糞便性狀評分、糞便含水量和注水量比較注：與正常組比較 P<0.01**，與模型組比較 P<0.01＃＃.3 治療后各種大鼠糞便的含水量與正常組比較，模型組糞便含水量明顯增加（P<0.01），隔藥餅灸組、西大鼠糞便含水量與模型組比較明顯下降（P<0.01），見表 1-4 和圖 1-3。

11圖 1-3 大鼠糞便性狀評分、糞便含水量和注水量比較注：與正常組比較 P<0.01**，與模型組比較 P<0.01＃＃療后各種大鼠內(nèi)臟敏感性的評分正常組比較，測量模型組大鼠 AWR 評分為 3 時（腹背部肌肉較強烈收縮部抬離地面）的注水量較低，這與模型組大鼠的內(nèi)臟敏感性升高有關(guān)，而藥餅灸和匹維溴銨的干預(yù)后，注水量上升，說明隔藥餅灸和匹維溴銨對 大鼠內(nèi)臟高敏感狀態(tài)有較好的良性調(diào)整作用，見表 1-5 和圖 1-4。
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本文編號：2862015