傳統(tǒng)降尿酸藥用植物中XOD抑制劑的篩選已成為研究熱點(diǎn)。短管兔耳草系玄參科兔耳草屬植物L(fēng)agotis brevituba Maxim.的干燥全草,其應(yīng)用歷史悠久,是著名藏藥“洪連”的基原植物,具有極高的藥用價(jià)值,被《四部醫(yī)典》列為藏草藥之首。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)藏藥短管兔耳草提取物具有良好的降尿酸效果,通過抑制肝臟XOD活性是其降尿酸重要途徑,且靶向捕集分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中的XOD抑制劑具有多種化學(xué)成分類型。在此基礎(chǔ)之上,本文進(jìn)一步考察了短管兔耳草提取物不同部位的降尿酸活性及XOD的抑制作用,然后對短管兔耳草提取物活性部位大孔樹脂60%乙醇洗脫部位化學(xué)成分進(jìn)行分離純化,并研究了所分離成分的XOD抑制活性,主要方法與結(jié)果如下:1、采用氧嗪酸鉀誘導(dǎo)小鼠高尿酸血癥模型,研究了藏藥短管兔耳草不同極性部位的降尿酸活性與肝臟XOD抑制活性。結(jié)果顯示總提物低、中、高劑量,30%乙醇部位中、高劑量,60%乙醇部位低、中、高劑量,90%乙醇部位中、高劑量均具有降尿酸活性,其中60%洗脫部位對XOD抑制活性較好。而總提物低、中、高劑量,30%乙醇部位低、中、高劑量,60%乙醇部位低、中、高劑量,90%乙醇部位低、中、高劑量均對肝臟XOD具有抑制活性。2、根據(jù)藥效研究結(jié)果,運(yùn)用大孔樹脂、正相硅膠、凝膠、ODS、制備HPLC等柱色譜方法,結(jié)合NMR、MS等波譜技術(shù),從短管兔耳草60%乙醇提取物中分離鑒定了23個(gè)化合物,其中有:3個(gè)黃酮類化合物:木犀草素(4),柯伊利素-7-O-β-D-葡萄糖苷(5),香葉木素-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)。9個(gè)苯丙素類化合物:兔耳草苷E(1)、阿魏酸甲酯(7),3,4-二甲氧基苯丙酸(8),6'-O-(4-甲氧基-(Z)-肉桂�；�)-α/β-D-吡喃葡萄糖苷(9),6-O-(3,4-二甲氧基-(Z)-肉桂�；�)-α/β-D-吡喃葡萄糖苷(10),兔耳草苷B(11),6-O-(Z)-肉桂�；�-α/β-D-吡喃葡萄糖苷(12),松脂酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(13),syringaresinol-4'-O-β-D-monoglucoside(14)。9個(gè)環(huán)烯醚萜類化合物:兔耳草苷F(2)、兔耳草苷G(3)、6-O-[α-L-(3-3,4-二甲氧基肉桂酰)-吡喃鼠李糖基]-梓醇(15),baldaccioside(16),globularin(17),10-O-(3,4-二甲氧基-(Z)-肉桂�；�)-梓醇(18),10-O-(3,4-二甲氧基-(E)-肉桂�；�)-梓醇(19),globularidin(20),10-O-對甲氧基-(Z)-肉桂�；�-梓醇(21)。2個(gè)簡單酚酸類化合物:3,4-二甲氧基苯甲醛(22),鄰苯二甲酸二丁酯(23)。上述化合物1、2、3為新化合物,7、8、9、10、12、13、15、16、20、23為兔耳草屬首次發(fā)現(xiàn)。11、14、17、18、19、21、22為首次從短管兔耳草植物中分得。3、采用紫外分光光度法對分離得到的23個(gè)化合物的XOD抑制活性進(jìn)行篩選。結(jié)果顯示:化合物1,4,5,6,9,10,23均具有XOD抑制活性(抑制率:9.7%-86.77%),選取抑制率高于50%的化合物4和化合物9測定其IC_(50)值,其IC_(50)值分別為26.6μM和73.8μM。
【學(xué)位單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R29
【部分圖文】：

色譜甲醇、乙腈（美國 TEDIA 有限公司）；甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇均為分析純（西隴化工股份有限公司）；1.3 藥材短管兔耳草購于成都荷花池藥材市場，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)鐘國躍研究員鑒定為玄參科兔耳草屬植物短管兔耳草（Lagotis brevituba Maxim.）的干燥全草。2. 提取分離短管兔耳草的干燥全草 10 kg，粉碎，滲漉，提取液減壓濃縮得浸膏，加水混懸至無明顯顆粒，石油醚萃取，水層減壓濃縮得浸膏 (1455 g )，浸膏經(jīng)過 HP20大孔樹脂柱層析，經(jīng)過純水、30%乙醇、60%乙醇，90%乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮，分別得到水部位 462g、30%乙醇部位 488g、60%乙醇部位 153g、90%乙醇部位 52g。見圖 5。

圖 7 短管兔耳草 Fr.6.5 分離圖Fig 7 The separation process of Fr.6.5 Parts of the L.brevituba Maxim.流分 Fr.5 經(jīng)硅膠柱層析 ( 200-300 目，CH2Cl2: CH3OH=10 : 1-1 : 5 )，得到Fr.5.1～Fr.5.10，F(xiàn)r.5.6 經(jīng) ODS 柱層析 ( C18，CH3OH : H2O= 20 : 80-100 : 0 )，得到 Fr.5.6.1，化合物 4 ( 43.4 mg )，F(xiàn)r.5.6.3 和 Fr.5.6.4，F(xiàn)r.5.6.3 經(jīng)過 Sephadex LH-20柱層 ( CH2Cl2: CH3OH=1 : 1 )，得到 Fr.5.6.3.1～Fr.5.6.3.3，F(xiàn)r.5.6.3.2 經(jīng)半制備高效液 ( CH3OH : H2O=40 : 60 )，得到化合物 12 ( tR=25 min, 13.6 mg )。見圖 8。

圖 8 短管兔耳草 Fr.5 部位分離圖Fig 8 The separation process of Fr.5 Parts of the L.brevituba Maxim.Fr.5.8 經(jīng) ODS 柱層析( C18，CH3OH : H2O= 20 : 80-100 : 0 )，得到 Fr.5.8.1～Fr.5.8.4，F(xiàn)r.5.8.1 經(jīng) Sephadex LH-20 柱層析 ( CH2Cl2: CH3OH=1:1)，得到化合物23 ( 10.1 mg)，F(xiàn)r.5.8.3 經(jīng)過 Sephadex LH-20 柱層析 ( CH2Cl2: CH3OH=1 : 1 )，得到 Fr.5.8.3.1～Fr.5.8.3.4，F(xiàn)r.5.8.3.1 經(jīng)半制備高效液相 ( CH3OH : H2O =40 : 60 )，得到化合物 10 ( tR=22 min, 57.9 mg )，F(xiàn)r.5.8.3.3 經(jīng)過半制備高效液相 ( CH3OH :H2O=45 : 55 )，得到化合物 16 ( tR=30 min, 21.8 mg )，化合物 5 (tR=20 min, 61mg)，6 (tR=22 min, 46.9 mg )，9 (tR=30.5 min, 32.9 mg )。見圖 9。
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本文編號：2850050