目的通過自制頸椎前屈位裝置,造成兔骨骼肌靜力性損傷,觀察理筋手法對(duì)受損骨骼肌外周疼痛物質(zhì)、組織形態(tài)學(xué)、肌細(xì)胞骨架蛋白Desmin和α-Actin的表達(dá)的影響,從組織生物分子學(xué)方面探討理筋手法治療靜力性骨骼肌損傷的機(jī)制。方法60只普通級(jí)大耳朵兔隨機(jī)抽取18只為正常組(Normal,Nor組),隨機(jī)抽取6只采用頸椎前屈45°進(jìn)行造模,建立骨骼肌靜力性損傷模型,建模成功后,其作為模型組(Model set,MS組),剩余36只按照以上方法進(jìn)行造模,根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為理筋手法組(Li jin,LJ組,18只)和自然恢復(fù)組(Self repairing,SR組,18只)。理筋手法組在造模結(jié)束后行理筋手法治療,正常組和自然恢復(fù)組不做治療,分別在傷后7d、14d和21d各隨機(jī)選取6只兔子取材。耳緣靜脈采集血液,用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定5-羥色胺(5-HT)、β-內(nèi)啡肽(β-EP)和P物質(zhì)(SP)的含量;透射電鏡觀察組織的超微結(jié)構(gòu),HE染色觀察組織病理變化,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)陽性肌纖維,免疫印跡法檢測(cè)Desmin和α-Actin的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果1.模型評(píng)估頸后肌僵硬程度的變化情況:造模過程中,模型組頸部肌肉組織逐漸變僵硬;造模結(jié)束后可觸及結(jié)節(jié)或條索狀物,說明本實(shí)驗(yàn)兔骨骼肌靜力性損傷模型是成功的。肌組織形態(tài)學(xué)變化:縱切面上觀察,大部分肌纖維排列紊亂,扭曲變形、斷裂,大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),橫切面上肌細(xì)胞萎縮,肌細(xì)胞間隙明顯增寬,說明本實(shí)驗(yàn)兔骨骼肌靜力性損傷模型是成功的。2.實(shí)驗(yàn)兔一般情況各組實(shí)驗(yàn)兔均存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束,實(shí)驗(yàn)兔在造模前,反應(yīng)靈敏,雙眼有神,對(duì)捕捉有明顯的逃避反應(yīng);造模結(jié)束后,兔精神狀態(tài)不佳,反應(yīng)遲鈍,毛發(fā)松散無光澤,形體消瘦,飲食減少。3.外周血檢測(cè)指標(biāo):β-EP結(jié)果:模型組、理筋手法組和自然恢復(fù)組在造模后,β-EP含量變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說明實(shí)驗(yàn)具有可比性,與正常組比較,β-EP含量明顯降低(P0.05);理筋手法組和自然恢復(fù)組在治療前后β-EP含量變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);損傷治療14d,理筋手法組的β-EP含量高于自然恢復(fù)組(P0.05);損傷治療21d,理筋手法組的β-EP含量明顯高于自然恢復(fù)組(P0.05)。5-HT檢測(cè)結(jié)果:模型組、理筋手法組和自然恢復(fù)組在造模后,5-HT含量變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說明實(shí)驗(yàn)具有可比性,與正常組比較,5-HT含量明顯升高(P0.05);理筋手法組和自然恢復(fù)14d、21d在治療前后5-HT含量變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);損傷治療7d,理筋手法組的5-HT含量比自然恢復(fù)組的低(P0.05);損傷治療14d,理筋手法組的5-HT含量比自然恢復(fù)組明顯低(P0.05);損傷治療21d,理筋手法組與自然恢復(fù)組比較,5-HT含量沒有明顯差異(P0.05)。SP檢測(cè)結(jié)果:模型組、理筋手法組和自然恢復(fù)組在造模后,SP含量變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說明實(shí)驗(yàn)具有可比性,與正常組比較,SP含量明顯升高(P0.05);理筋手法組和自然恢復(fù)14d、21d在治療前后SP含量變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);損傷治療7d,理筋手法組的SP含量比自然恢復(fù)組低(P0.05);損傷治療14d,理筋手法組的SP含量比自然恢復(fù)組明顯低(P0.05);損傷治療21d,理筋手法組的SP含量變化與自然恢復(fù)組有顯著差異(P0.05)。4.組織形態(tài)病理觀察:HE染色觀察結(jié)果:正常組肌纖維整齊排列,肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。模型組大部分肌纖維排列紊亂,肌纖維扭曲變形、斷裂,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。損傷治療7d,理筋手法組和自然恢復(fù)組肌纖維斷裂扭曲,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),有少量空泡樣肌細(xì)胞。損傷治療14d,理筋手法組肌纖維腫脹,仍有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),但肌纖維結(jié)構(gòu)明顯比自然恢復(fù)組有所改善。損傷治療21d,理筋手法組肌細(xì)胞較整齊緊密,有新生肌細(xì)胞,肌纖維腫脹明顯消退,自然恢復(fù)組仍有少量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肌纖維結(jié)構(gòu)好轉(zhuǎn)。透射電鏡觀察肌纖維超微結(jié)構(gòu):正常組可見致密且排列整齊肌纖維,清晰的看到完整的Z線和M線;模型組肌纖維疏松,扭曲變形斷裂,找不到完整的肌節(jié),M線和Z消失不見;損傷治療7d,理筋手法組肌纖維疏松,有一小部分完整的肌節(jié),可見部分Z線,自然恢復(fù)組肌節(jié)寬度大小不等,肌纖維疏松;損傷治療14d,理筋手法組可見大部分清晰Z線和M線,大量的線粒體較均勻的分布在肌纖維之間,自然恢復(fù)組肌纖維疏松程度比理筋手法組較重,可見大部分Z線,有少量的線粒體分布;損傷治療21d,理筋手法組大部分完整的肌節(jié),肌纖維致密,少部分Z線和M線仍有破壞,肌纖維明顯好轉(zhuǎn),自然恢復(fù)組仍有一小部分肌纖維處于扭曲狀態(tài),Z線清楚,少量完整肌節(jié)。5.骨骼肌肌組織Desmin、α-Actin陽性肌纖維(AOD值):正常組分別與模型組、理筋手法治療7d和14d、自然恢復(fù)組各組比較,正常組的Desmin、α-Actin陽性肌纖維AOD值明顯升高(P0.05);損傷治療7d,理筋手法組的骨骼肌纖維Desmin、α-Actin陽性肌纖維AOD值高于自然恢復(fù)組(P0.05);損傷治療14d,理筋手法組的骨骼肌纖維Desmin、α-Actin陽性肌纖維AOD值高于自然恢復(fù)組(P0.05);損傷治療21d,理筋手法組的骨骼肌纖維Desmin、α-Actin陽性肌纖維AOD值高于自然恢復(fù)組(P0.05)。6.骨骼肌組織Desmin、α-Actin表達(dá)(免疫印跡法):正常組分別與模型組、理筋手法治療7d和14d、自然恢復(fù)組各組比較,正常組的Desmin、α-Actin表達(dá)水平明顯較高(P0.05);損傷治療7d,理筋手法組的骨骼肌纖維Desmin、α-Actin表達(dá)水平高于自然恢復(fù)組(P0.05);損傷治療14d,理筋手法組的骨骼肌纖維Desmin、α-Actin表達(dá)水平高于自然恢復(fù)組(P0.05);損傷治療21d,理筋手法組的骨骼肌纖維Desmin、α-Actin表達(dá)水平高于自然恢復(fù)組(P0.05)。1.理筋手法通過調(diào)節(jié)外周血清β-EP、5-HT、SP的含量,達(dá)到鎮(zhèn)痛效果。2.理筋手法通過增加肌纖維細(xì)胞骨架蛋白Desmin、α-Actin的表達(dá),促進(jìn)損傷骨骼肌組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)的修復(fù)。
【學(xué)位單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R244.1
【部分圖文】：

碩士學(xué)位論文 骼肌靜力性損傷模型建立頸肌損傷的動(dòng)物模型建立符合人類長(zhǎng)期伏案工作或反復(fù)低頭的單易于操作，而且無損傷皮膚的特點(diǎn)，這樣有利于后期手法治療方法進(jìn)行改造[15-16]造模，改良模具參照劉志華[14]模型架建立骨骼韌性較好的鐵絲固定架綁在實(shí)驗(yàn)兔身上，使頸部前屈 45°，頸部部用松緊繩將鐵絲固定，松緊度以不影響正常呼吸為宜，且兔四按照此方法造模。每日 1 次，每次固定 5h，連續(xù) 2 個(gè)月。每天造中單獨(dú)飼養(yǎng)，觀察兔的精神狀態(tài)、反應(yīng)性等一般情況。

圖 4 各組實(shí)驗(yàn)兔頸部骨骼肌肌組織 HE 染色病理結(jié)構(gòu)（200×）：正常組（A1-A2），正常肌纖維；模型組（B1-B2）；理筋手法治療 7d 肌纖維（C1-C2）；自然恢復(fù) 7d 肌纖維D1-D2）；理筋手法治療 14d 肌纖維（E1-E2）；自然恢復(fù) 14d 肌纖維（F1-F2）理筋手法治療 21d 肌纖維（G1-G2）然恢復(fù) 21d 肌纖維（H1-H2）。.2 骨骼肌纖維超微結(jié)構(gòu)透射電鏡觀察肌纖維超微結(jié)構(gòu)（圖 5），正常組（A 圖）可見大量致密且排列整齊肌絲組成的肌纖維，能清晰的看到完整的 Z 線和 M 線，線粒體結(jié)構(gòu)完整，肌漿網(wǎng)清可見；模型組（B 圖）肌纖維疏松，扭曲變形斷裂，排列紊亂，找不到完整的肌節(jié)， 線消失不見，Z 線部分消失，線粒體結(jié)構(gòu)完整；損傷治療 7d，理筋手法組（C 圖）肌維疏松，可看到一小部分完整的肌節(jié)，部分 Z 線清晰可見，局部 M 線清晰，自然恢組（D 圖）肌節(jié)寬度大小不等，肌纖維明顯疏松，可見部分 Z 線，能找到大量線粒體

圖 6 各組實(shí)驗(yàn)兔頸部骨骼肌免疫組織化學(xué) Desmin 表達(dá)（200×）注：正常組（A1-A2），正常肌纖維；模型組（B1-B2）；理筋手法治療 7d 肌纖維（C1-C2）；自然恢復(fù) 7d 肌纖（D1-D2）；理筋手法治療 14d 肌纖維（E1-E2）；自然恢復(fù) 14d 肌纖維（F1-F2）理筋手法治療 21d 肌纖維（G1-G自然恢復(fù) 21d 肌纖維（H1-H2）。5.2 骨骼肌α-Actin 表達(dá)的結(jié)果在光鏡下觀察α-Actin 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（圖 7）：各組α-Actin 染色均以棕色為陽性表達(dá)，正常組（A1-A2）肌纖維染色較深均且分布均勻，肌纖維骨架完整，暗相間的橫紋清晰可見，肌細(xì)胞形態(tài)完整，α-Actin 表達(dá)較強(qiáng)；模型組（B1-B2）肌纖明顯扭曲、變形、腫脹，橫紋消失，肌細(xì)胞染色變淺，α-Actin 染色表達(dá)較弱。損傷療 7d，自然恢復(fù)組（D1-D2）組肌纖維變形，肌細(xì)胞染色不一，有空泡樣淡染色區(qū)。筋手法組（C1-C2）肌纖維腫脹扭曲稍減，有一小部分可見橫紋，結(jié)構(gòu)的完整性優(yōu)于
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本文編號(hào)：2849809