1目的采用隊列研究的方法,探討影響膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)患者終點事件發(fā)生的因素;運用數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)挖掘KOA患者血小板計數(shù)(PLT)的變化及其與免疫炎癥指標(biāo)的關(guān)系,并探討中醫(yī)健脾單元療法改善KOA的療效;通過體外培養(yǎng)KOA患者外周血單核細(xì)胞,研究KOA患者細(xì)胞因子、血小板活化產(chǎn)物及VEGF/SDF-1/CXCR4信號通路的的變化,并基于VEGF/SDF-1/CXCR4信號通路探討新風(fēng)膠囊(XFC)含藥血清抑制KOA患者血小板活化的機制研究。2方法2.1隊列研究從安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院病例系統(tǒng)中調(diào)取風(fēng)濕科住院的KOA患者(時間:2016年10月-2018年6月)。用電話隨訪的形式,隨訪并記錄患者出院后服用中藥及終點事件發(fā)生情況。隨后用Epidata 3.02軟件建立我院KOA患者隊列研究數(shù)據(jù)庫,整理并上傳隨訪資料。最后運用SPSS23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。2.2數(shù)據(jù)挖掘研究應(yīng)用數(shù)據(jù)庫軟件為SQL Server,創(chuàng)立“安徽省中醫(yī)院風(fēng)濕科數(shù)據(jù)中心”,從中調(diào)取住院病人的一般資料、病程、中藥使用情況及治療前后實驗室檢查信息等情況。采用SPSS23.0及Clementine 11.1中的Aprior模塊對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。2.3體外實驗研究制備高、中、低劑量XFC含藥血清以備用。收集KOA外周血,分離PBMC。用MTT法檢測XFC含藥血清對PBMC的最佳抑制濃度和最佳作用時間。用ELISA法檢測TNF-ɑ、IL-1、IL-4、IL-10、VEGFA、VEGFR2;RT-PCR法檢測SDF-1、CXCR4、VEGFA、HIF-1ɑ基因表達(dá);免疫熒光檢測VEGFA、PDGF、CD40L的表達(dá);Western-blot法檢測VEGFA、VEGFR2、SDF-1、CXCR4蛋白的表達(dá)。3結(jié)果3.1 1100例KOA患者終點事件發(fā)生情況隊列研究結(jié)果3.1.1終點事件情況隨訪期間四類終點事件發(fā)生總例數(shù)為89例包括全因死亡12例、再發(fā)入院45例、關(guān)節(jié)外病變12例和手術(shù)治療20例。3.1.2中成藥及中藥使用情況隨訪期間,服用中藥有院內(nèi)制劑新風(fēng)膠囊、黃芩清熱除痹膠囊、五味溫通除痹膠囊等。中藥湯劑包括四妙散、桃紅四物湯、獨活寄生湯等。3.1.3終點事件與各指標(biāo)間的Logistic回歸中醫(yī)藥治療是全因死亡(OR=0.552)、再發(fā)入院(OR=0.552)、關(guān)節(jié)外病變(OR=0.519)、手術(shù)治療(OR=0.584)的保護(hù)性因素,年齡(OR=2.652)、ESR(OR=1.656)、PLT計數(shù)(OR=1.478)是全因死亡的危險因素,ESR(OR=2.206)、PLT計數(shù)(OR=1.431)、IgG(OR=1.509)是再發(fā)入院的危險因素,ESR(OR=1.854、OR=2.548)是關(guān)節(jié)外病變和手術(shù)治療的危險因素。3.2 1203例KOA患者臨床數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果3.2.1 KOA患者PLT計數(shù)的變化1203例KOA患者PLT計數(shù)與正常值(100-300×10~9/L)相比較,上升的452例(占37.57%),相關(guān)性分析顯示,PLT計數(shù)與ESR、hs-CRP、IgA、IgG、IgM、補體C3、補體C4呈正相關(guān)(P0.01)。3.2.2中藥使用情況1203例KOA患者住院期間使用中藥共涉及300余味,使用頻率最高的前20味中藥,健脾化濕類:薏苡仁、茯苓、陳皮、山藥、澤瀉;清熱解毒類:蒲公英、白花蛇舌草、黃芩、知母、甘草;活血化瘀類:桃仁、紅花、雞血藤、丹參、川芎;祛風(fēng)除濕類:威靈仙、豨薟草、杜仲、伸筋草、獨活。通過復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)及聚類分析亦可得出上述藥物為治療KOA的常用藥物。3.2.3關(guān)聯(lián)規(guī)則分析運用關(guān)聯(lián)規(guī)則挖掘治療KOA藥物之間的關(guān)聯(lián),及指標(biāo)與藥物之間的關(guān)聯(lián),得出置信度最高的前三位的藥對為:茯苓關(guān)聯(lián)于薏苡仁(96.11%),桃仁關(guān)聯(lián)于薏苡仁(91.42%)、蒲公英關(guān)聯(lián)于薏苡仁(89.29%)。PLT計數(shù)下降下降與茯苓(95.58%),PLT計數(shù)下降下降與薏苡仁(95.18%),Ig M指標(biāo)下降與薏苡仁(94.38%)。3.2.4中醫(yī)健脾單元療法對KOA患者PLT計數(shù)及免疫炎癥指標(biāo)的影響中藥聯(lián)合XFC在改善PLT計數(shù)、ESR、Ig A、Ig G、Ig M、補體C3水平上優(yōu)于單純中藥組(P0.01)。在隨機行走模型中,中藥聯(lián)合XFC組的隨機波動最大值、行走正向增長率、綜合評價指標(biāo)遞增率、綜合改善率等方面均優(yōu)于單純中藥組,說明患者PLT計數(shù)、ESR、hs-CRP指標(biāo)的改善與中醫(yī)藥治療存在長程關(guān)系,中藥干預(yù)時間越長,患者指標(biāo)改善越明顯。3.3體外實驗研究結(jié)果3.3.1 XFC含藥血清對PBMC的抑制作用XFC中劑量組含藥血清在24h對PBMC為最佳抑制時間和劑量。3.3.2 XFC含藥血清對KOA患者細(xì)胞因子及VEGFA、VEGFR2、PDGF、CD40L的影響與正常組比較,模型組TNF-ɑ、IL-1β、VEGFA、VEGFR2、PDGF、CD40L升高(P0.01),IL-4、Il-10降低(P0.01);與模型組相比較,各藥物干預(yù)組TNF-ɑ、IL-1β、VEGFA、VEGFR2、PDGF、CD40L降低(P0.01),IL-4、Il-10升高(P0.01);與XFC組相比較,XFC+AMD3100組TNF-ɑ、IL-1β、VEGFA、VEGFR2、PDGF、CD40L降低(P0.01),IL-4、Il-10升高(P0.01),AMD3100組TNF-ɑ、IL-1β、VEGFA、VEGFR2降低(P0.05,P0.01),IL-4、Il-10升高(P0.01);與AMD3100組相比較,XFC+AMD3100組TNF-ɑ、IL-1β、VEGF A、VEGFR2、PDGF、CD40L降低(P0.05,P0.01),IL-4、Il-10升高(P0.01)。3.3.3 XFC含藥血清對KOA患者SDF-1m RNA、CXCR4m RNA、VEGFAm RNA、HIF-1ɑm RNA的影響與正常組比較,各模型組SDF-1m RNA、CXCR4m RNA、VEGFAm RNA、HIF-1ɑm RNA升高(P0.01);與模型組相比,藥物干預(yù)后各組SDF-1m RNA、CXCR4m RNA、VEGFAm RNA、HIF-1ɑm RNA下降(P0.05,P0.01);與XFC組相比,AMD3100組和XFC+AMD3100組CXCR4m RNA、VEGFAm RNA、HIF-1ɑm RNA下降(P0.01);與AMD3100組相比較,XFC+AMD3100組VEGFAm RNA、HIF-1ɑm RNA下降(P0.01)。3.3.4 XFC含藥血清對KOA患者VEGFA、PDGF、CD40L蛋白表達(dá)的影響倒置熒光顯微鏡下觀察可見,VEGFA、PDGF、CD40L蛋白在正常組中呈現(xiàn)低表達(dá),KOA患者中表達(dá)明顯升高,經(jīng)XFC、AMD3100、XFC+AMD3100干預(yù)后,可降低VEGFA、SDF-1、CXCR4蛋白的表達(dá)。3.4.5 XFC含藥血清對KOA患者SDF-1、CXCR4、VEGFA、VEGFR2、MMP9蛋白表達(dá)的影響與正常組相比,模型組SDF-1、CXCR4、VEGFA、VEGFR2、MMP9蛋白表達(dá)升高(P0.01);與正常組相比,藥物干預(yù)后各組SDF-1、CXCR4、VEGFA、VEGFR2、MMP9蛋白表達(dá)降低(P0.01);與XFC組相比,AMD3100組和XFC+AMD3100組SDF-1、CXCR4、VEGFA、VEGFR2、MMP9蛋白表達(dá)降低(P0.01);與AMD3100組相比較,XFC+AMD3100組SDF-1、CXCR4、VEGFA、VEGFR2、MMP9蛋白表達(dá)降低更明顯(P0.01)。4結(jié)論KOA患者存在血小板計數(shù)升高,與免疫炎癥密切相關(guān),也是KOA終點事件發(fā)生的危險因素,健脾化濕通絡(luò)中藥可以降低血小板及免疫炎癥水平。KOA患者血小板異常活化與VEGF/SDF-1/CXCR4信號通路的激活相關(guān)。XFC改善KOA患者血小板活化的機制及免疫炎癥反應(yīng)的具體機制如下:(1)通過上調(diào)抑炎因子(IL-4、IL-10)、下調(diào)促炎因子(TNF-ɑ、I-1β),降低免疫炎癥反應(yīng),減輕關(guān)節(jié)破壞,緩解臨床癥狀。(2)不但能夠發(fā)揮類阻斷劑樣作用,且協(xié)同阻斷劑阻斷能更好地阻斷VEGF/SDF-1/CXCR4信號通路,從而達(dá)到抑制血小板活化的目的,改善臨床癥狀。
【學(xué)位單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TP311.13;R259
【部分圖文】：

圖 1 各終點事件發(fā)生情況Fig.1 The occurrence of each end event圖 2 各暴露組終點事件發(fā)生情況Fig.2 The occurrence of endpoint events in each exposed group用情況 KOA 患者應(yīng)用應(yīng)用中成藥總頻次為 3214 次，取用藥頻次最高的

圖 2 各暴露組終點事件發(fā)生情況Fig.2 The occurrence of endpoint events in each exposed group用情況 KOA 患者應(yīng)用應(yīng)用中成藥總頻次為 3214 次，取用藥頻次最高新風(fēng)膠囊、黃芩清熱除痹膠囊、五味溫通除痹膠囊、頸椎活血膠瘀接骨散、新癀片等�？诜兴帨珓┛傤l次為 2731 次，主要包主要有四妙散、知柏地黃湯、獨活寄生湯、宣痹湯、六味地黃湯身痛逐瘀湯等。

1100例KOA患者中成藥使用情況
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本文編號：2847341