目的:探討"醒腦開竅"針法對大腦中動脈閉塞(MCAO)大鼠不同時相細(xì)胞黏附分子1(ICAM-1)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMPs-9) mRNA表達(dá)的影響。方法:將144只大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組,再按照灌注4 h、缺血1 d、7 d、20 d各分為4個亞組,每組18只大鼠,采用Z-Longa法對各組實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分,每組評分3次,求其平均值;采取逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法(RT-PCR)測定分歧時間點(diǎn)ICAM-1 mRNA及MMPs-9 mRNA表達(dá)量的改變。結(jié)果:不同時間點(diǎn)兩組大鼠神經(jīng)功能缺損評分:對照組4 h(2.78±0.38)、1 d(2.32±0.48)、7 d(1.98±0.35)、20 d(1.58±0.25),實(shí)驗(yàn)組4 h(2.50±0.46)、1 d(2.26±0.39)、7 d(1.62±0.40)、20 d(1.10±0.35),實(shí)驗(yàn)組表達(dá)降落明顯快于對照組,兩組不同時間點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評分差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05);對照組大鼠ICAM-1表達(dá),造模后4 h(3.134±0.839)、1 d(3.673±1.742)、7d(3.802±1.781)及20 d(3.408±1.876),實(shí)驗(yàn)組造模后4 h(2.641±0.565)、造模后1 d(2.447±0.785)、7 d(1.868±0.505)及20 d(1.747±0.775),相應(yīng)時相比較均P 0.05;對照組大鼠MMPs-9表達(dá),造模后4 h(2.420±0.928)、1 d(2.898±0.419)、7 d(2.696±0.857)及20 d(2.506±0.602),實(shí)驗(yàn)組造模后4 h(2.130±0.715)、1 d(1.982±0.351)、7 d(1.837±0.751)及20 d(1.802±0.587),相應(yīng)時相比較均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)。結(jié)論:"醒腦開竅"針法可有效改善局灶腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀,促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù),并且通過抑制血清及腦組織中炎癥因子ICAM-1、MMPs-9的表達(dá),從而發(fā)揮腦保護(hù)作用,針刺時間越早、周期越長,療效越明顯。
【部分圖文】：

大鼠造模后4 h、1 d、7 d及20 d，實(shí)驗(yàn)組與對照組相比較，實(shí)驗(yàn)組相應(yīng)時間點(diǎn)ICAM-1表達(dá)均小于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2,pcr溶解曲線及擴(kuò)增曲線分別見于圖1、圖2;大鼠造模后4 h、1 d、7 d及20 d，實(shí)驗(yàn)組與對照組相比較，實(shí)驗(yàn)組相應(yīng)時間點(diǎn)MMPs-9表達(dá)均小于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3,pcr溶解曲線及擴(kuò)增曲線分別見于圖3～4。3 討論

經(jīng)過大量查閱文獻(xiàn)筆者選擇體質(zhì)量為(280±20) g的SD大鼠作為研究對象，原因如下:第一，體質(zhì)量過小(<250 g)的大鼠對于麻藥耐受性比較差，增加了死亡率，而且體質(zhì)量較小的大鼠血管也較細(xì)，導(dǎo)致碳素魚線難以插入;第二，體質(zhì)量過大(>300 g)的大鼠血管變異的可能性大大增加，會使手術(shù)難度增加;第三，體質(zhì)量>300 g的大鼠血管相應(yīng)要粗很多，MCA的血流不能被線栓充分阻斷，從而導(dǎo)致造模成功率下降。除此之外，性別對于該模型的影響不容小覷，筆者選擇雄性大鼠是由于已有研究表明[7]，雌激素對神經(jīng)具有保護(hù)作用，且雌激素的分泌具有周期性，而目前的技術(shù)尚不能準(zhǔn)確計算雌激素水平，即實(shí)驗(yàn)干預(yù)因素不可控，而雄激素的分泌周期并不顯著且對神經(jīng)生理指標(biāo)無太大影響。故體質(zhì)量為(280±20) g的雄性SD大鼠更適合MCAO模型的制備。在前期造模預(yù)實(shí)驗(yàn)過程中，筆者發(fā)現(xiàn)盡管線栓已完全且順利插入，但并未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀，對此類造模不成功的大鼠進(jìn)行解剖發(fā)現(xiàn)，是由于個別大鼠血管變異，需要插入線栓的深度與理論有一定的差距;另有大鼠在麻醉清醒時評分達(dá)3分，卻于次日或隔日死亡，解剖發(fā)現(xiàn)大鼠顱底可見血凝塊，推測由于線栓過程中手法太重，造成了蛛網(wǎng)膜下腔出血，因此在此實(shí)驗(yàn)過程中，不僅要明確實(shí)驗(yàn)動物的選擇，亦要對造模插線的手法及時間予以精確掌握。本實(shí)驗(yàn)之所以選用MMPs-9、ICAM-1兩個炎癥因子作為觀察指標(biāo)是因?yàn)榻陙�，隨著對腦缺血損傷機(jī)制的研究愈加深入，進(jìn)行的相關(guān)研究亦隨之表明，炎癥因子的產(chǎn)生和發(fā)生作用是腦缺血損傷時的重要病理環(huán)節(jié)，因炎癥因子會導(dǎo)致腦組織代謝異常，引起神經(jīng)元損傷和凋亡[8]。ICAM-1能夠在血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，在炎性細(xì)胞因子以及內(nèi)毒素等物質(zhì)的刺激下表達(dá)率大幅度升高，當(dāng)腦發(fā)生損傷時，TNF-αm RNA的表達(dá)會增加，進(jìn)而對組織造成損傷，具體的機(jī)制:血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，通透性增加并產(chǎn)生凝血活性物質(zhì)，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)為促凝狀態(tài)，最終誘發(fā)血管出血及血栓[9];刺激ICAM-1異常增高，使血管舒縮活性物質(zhì)不能正常表達(dá)，致使血管異常收縮，進(jìn)一步使得腦缺血以及局部卒中的危險系數(shù)增加;觸發(fā)神經(jīng)細(xì)胞凋亡機(jī)制導(dǎo)致細(xì)胞凋亡;而MMPs來源于血管平滑肌細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞中，其中與腦缺血及再灌注密切相關(guān)的主要為明膠酶A(MMP-2)、明膠酶B(MMP-9)。這兩種MMPs被激活或活性上調(diào)，導(dǎo)致血腦屏障結(jié)構(gòu)破壞，功能損傷，繼而引起腦水腫和出血[10-11]。本實(shí)驗(yàn)中缺血再灌注損傷后4 h時，實(shí)驗(yàn)組、對照組大鼠腦組織MMPs-9 m RNA、ICAM-1 m RNA已大量表達(dá)，再灌注1 d時兩組大鼠的兩種炎癥因子表達(dá)到最高峰，7～20 d，隨時間的延長，兩組大鼠腦組織MMPs-9m RNA、ICAM-1 m RNA表達(dá)逐漸降低，且實(shí)驗(yàn)組低于對照組(P<0.05);再灌注20 d時，實(shí)驗(yàn)組大鼠腦組織MMPs-9 m RNA、ICAM-1 m RNA的表達(dá)明顯低于對照組(P<0.05)。因此，本實(shí)驗(yàn)證明，“醒腦開竅”針法可以通過抑制血清及腦組織中炎癥因子ICAM-1、MMPs-9的表達(dá)，從而發(fā)揮對腦組織的保護(hù)作用，并且針刺時間越早、周期越長，其療效也就越明顯。但在腦缺血損傷過程中，影響血腦屏障的因素很多，本實(shí)驗(yàn)中筆者所涉及檢測到的指標(biāo)有限，然而體內(nèi)微環(huán)境復(fù)雜，“醒腦開竅”針刺療法是否通過其他方式減輕腦損傷，這些問題都需要在后續(xù)的研究中以待完善。圖3 MMPs-9Real-time溶解曲線

MMPs-9Real-time溶解曲線
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