目的:1、通過水迷宮實(shí)驗(yàn),檢測電針前后睡眠剝奪模型大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力改變情況。2、對比電針單穴與配伍腧穴在治療睡眠剝奪后大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力下降方面的效應(yīng)差異。3、研究電針干預(yù)對睡眠剝奪模型大鼠海馬體中睡眠相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)機(jī)制,研究電針單穴與配伍腧穴治療失眠的療效,為失眠神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制和臨床針刺治療失眠提供理論依據(jù)。方法:健康雄性SD大鼠共60只,隨機(jī)分成6組,每組10只,分別是正常組、模型組、百會(huì)組、神門組、三陰交組與百會(huì)-神門-三陰交配伍組(簡稱“三才組”)。(1)實(shí)驗(yàn)開始前適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,腹腔注射對氯苯丙氨酸(PCPA)建立睡眠剝奪模型(2)造模成功后的第2天,使用Morris水迷宮對各組大鼠的認(rèn)知功能進(jìn)行連續(xù)4天的評估,進(jìn)行定位巡航實(shí)驗(yàn)及空間探索實(shí)驗(yàn)。(3)同時(shí)進(jìn)行電針干預(yù),治療結(jié)束后1h取材,采用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測大鼠海馬體中與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的蛋白激酶A-Cβ亞基(PKA-Cβ)、環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(P-CREB)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)及原肌球蛋白受體激酶(TrkB)表達(dá)情況。結(jié)果:(1)水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)顯示,神門穴組、百會(huì)組、三陰交組和配伍組潛伏期顯著縮短(p0.05),配伍組潛伏期低于其他三治療組(p0.05)�？臻g探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組大鼠穿越平臺(tái)原位置的次數(shù)明顯減少(p0.05),百會(huì)組、三陰交組和配穴組穿越次數(shù)明顯增多(p0.05),而配伍組的次數(shù)明顯多于其他三治療組,提示針刺單穴神門、百會(huì)和配伍均顯著改善了失眠大鼠空間工作記憶能力,其中配伍組改善效果最佳。(2)與正常組大鼠相比,模型組大鼠海馬組織內(nèi)BDNF、TrkB、P-CREB和PKA-Cβ蛋白表達(dá)量明顯降低(p0.01,p0.05,p0.05,p0.01),針刺神門穴后海馬組織內(nèi)BDNF、TrkB和PKA-Cβ表達(dá)量顯著升高(p值均0.05),針刺百會(huì)穴后TrkB和PKA-Cβ表達(dá)量明顯上調(diào)(p0.05,p0.05),針刺三陰交穴后BDNF和TrkB的表達(dá)量明顯上調(diào)(p0.05,p0.05),針刺配伍腧穴后BDNF、TrkB、P-CREB和PKA-Cβ表達(dá)量明顯上調(diào)(p0.01,p0.05,,p0.05,p0.01),且BDNF的表達(dá)明顯高于百會(huì)組(p0.05),PKA-Cβ蛋白表達(dá)量明顯高于三陰交組(p0.05),說明腧穴配伍對失眠大鼠海馬內(nèi)改善學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白的表達(dá)的上調(diào)作用優(yōu)于單穴。結(jié)論:1.Morris水迷宮可以作為評價(jià)睡眠剝奪模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的有效性指標(biāo)。2.無論從行為學(xué)方面還是學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白表達(dá),電針都可以有效調(diào)節(jié)大鼠睡眠剝奪所導(dǎo)致的學(xué)習(xí)記憶功能障礙。3.電針可激活海馬神經(jīng)元內(nèi)學(xué)習(xí)記憶功能相關(guān)的PKA-Cβ→P-CREB→BDNF/TrkB信號調(diào)節(jié)通路,不同程度的影響其蛋白質(zhì)的表達(dá),而且腧穴配伍的影響效應(yīng)優(yōu)于單穴,推測其將導(dǎo)致多種神經(jīng)生理活動(dòng)的變化并促進(jìn)海馬神經(jīng)細(xì)胞的分化、再生及存活,從而改善失眠大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。
【學(xué)位單位】：長春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R245.97
【部分圖文】：

2 實(shí)驗(yàn)方法2.1 實(shí)驗(yàn)流程圖1 實(shí)驗(yàn)流程2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組根據(jù)實(shí)驗(yàn)流程（見圖1），采用 Microsoft Excel 軟件將60只實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行隨機(jī)分

圖 2：正常組與睡眠剝奪模型組大鼠睡眠-覺醒時(shí)間觀察對比（驗(yàn)指標(biāo)rris水迷宮法對各組大鼠的認(rèn)知功能進(jìn)行連續(xù)4天的測試評估探索實(shí)驗(yàn)等項(xiàng)目。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在定位航行實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過4天的連

長春中醫(yī)藥大學(xué) 2019 屆碩士學(xué)位論文21空間參考學(xué)習(xí)與記憶的改善效應(yīng)優(yōu)于單穴，其次為神門穴與百會(huì)穴（表4，圖3）�？臻g探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠穿越隱匿性平臺(tái)原位置的次數(shù)明顯減少（p＜0.05），提示失眠使大鼠的工作記憶能力即記憶儲(chǔ)存與提取再現(xiàn)能力明顯降低。與模型組相比，百會(huì)組、三陰交組和配穴組穿越隱匿性平臺(tái)的次數(shù)明顯增多（p＜0.05），而配伍組的次數(shù)明顯多于神門組、百會(huì)組和三陰交組，與三陰交穴組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），提示針刺單穴神門、百會(huì)和三穴配伍均顯著改善了失眠大鼠空間工作記憶能力，其中配伍組改善效果最佳， 其次為神門穴、百會(huì)穴

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